宋鐵英，李瑩瑩，郭娟

胃癌是消化系統(tǒng)發(fā)病率較高的惡性腫瘤，其已經(jīng)成為臨床上威脅病人生存預后的重要疾病。在長期飲酒或者幽門螺桿菌感染的人群中，胃癌的發(fā)病率顯著上升。臨床上通過對于胃癌發(fā)病機制的研究，可以為胃癌的診斷及治療預后的預測提供參考指標。溶酶體相關(guān)四次跨膜蛋白B（lysosomeassociated protein transmembrane 4 beta ，LAPTM4B）是細胞器相關(guān)的跨膜蛋白，可以影響癌細胞的異常分裂速度，使其加快，使得癌細胞增殖穩(wěn)定性受到影響，導致惡性腫瘤發(fā)生；三葉因子家族（trefoil factor family，TFF）是一種轉(zhuǎn)錄調(diào)控相關(guān)因子，它激活轉(zhuǎn)錄上游的開放閱讀區(qū)會增加癌細胞持續(xù)核分裂的風險。為了揭示LAPTM4B、TFF1 蛋白的表達與胃癌病人的病情關(guān)系，本研究收集80例胃癌組織，探討LAPTM4B、TFF1 蛋白的表達情況，并分析LAPTM4B、TFF1 蛋白的表達與胃癌病人臨床病理特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015 年8 月至2018 年6 月鄭州人民醫(yī)院病理科收集的胃癌組織80 例，男44 例、女36 例，年齡（61.2±8.6）歲，年齡范圍為47～75 歲；TNM 分期：Ⅰ期20 例、Ⅱ期27 例、Ⅲ期29 例、Ⅳ期4例；組織學分化程度：高分化23 例、中分化26 例、低分化28例、未分化3例；發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移43例；浸潤深度達到漿膜層31 例；病灶最大徑≥3.0 cm 45 例。選取距離胃癌病灶邊緣2～5 cm 的癌旁組織40 例，男20 例、女20 例，年齡（60.8±9.2）歲，年齡范圍為50～73 歲。兩組性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計學意義（

P

>0.05）。

1.2 納入與排除標準

診斷標準：胃癌的診斷標準參考人民衛(wèi)生出版社《外科學》第七版中的標準。納入標準：①手術(shù)病理學或胃鏡活檢證實；②病人不具有放化療等治療病史；③各項基礎(chǔ)資料完整；④病人或其近親屬知情同意。排除標準：①轉(zhuǎn)移性胃癌；②伴有風濕免疫性疾??；③關(guān)鍵資料缺失，無法進行統(tǒng)計分析。本研究符合《世界醫(yī)學協(xié)會赫爾辛基宣言》相關(guān)要求。

1.3 方法

1.3.1 免疫組織化學染色

使用石蠟切片。 脫水后室溫孵育20 min。磷酸鹽緩沖液洗滌3 次，每次5 min。磷酸鹽緩沖液稀釋山羊血清，封閉抗體5 min。加入一抗（購自賽默飛中國，濃度：1∶1 000）5 mL，37 ℃孵育2 h，或4 ℃冰箱孵育過夜，磷酸鹽緩沖液洗3 次，每次5 min，加入生物素熒光標記二抗（購自賽默飛中國，濃度：1∶2 000）3 mL，37 ℃孵育20～30 min，磷酸鹽緩沖液洗3 次，每次5 min，加入Streptavidin/HRP 辣根酶標記streptavidin，37 ℃孵育20～30 min，磷酸鹽緩沖液洗3次，每次5 min，用增強型HRP-DAB 底物顯色試劑盒（PA110）顯色，自來水沖洗，復染，封固。

1.3.2 LAPTM4B、TFF1染色結(jié)果評分標準

LAPTM4B蛋白在癌組織的細胞質(zhì)中，TFF1蛋白在癌組織的細胞核中，顯微鏡下觀察時如果蛋白呈黃色、棕黃色、褐色則可判定為陽性。①依據(jù)蛋白染色情況進行評分：無著色（0分）、淡黃色（1分）、棕黃色（2分）、褐色、黑色等深色（3 分）。②依據(jù)陽性染色細胞在總細胞中所占比例進行評分：≤10%（1 分）、>10%～50%（2分）、>50%～75%（3分）、>75%（4分），兩種類型的積分相乘為總分，總分<3 分為陰性、總分≥3 分為陽性。

2 結(jié)果

2.1 兩組LAPTM4B 蛋白、TFF1 蛋白陽性表達率比較

胃癌組織中LAPTM4B 蛋白陽性表達率61.25%、TFF1 蛋白陽性表達率68.75%，胃癌癌旁組織中LAPTM4B 蛋白陽性表達率25.00%、TFF1 蛋白陽性表達率35.00%；胃癌組織均高于癌旁組織（

P

<0.05），見表1、圖1，2。

表1 胃癌組織與癌旁組織中的溶酶體相關(guān)四次跨膜蛋白B（LAPTM4B）、三葉因子家族1（TFF1）蛋白陽性表達率比較/例（%）

2.2 LAPTM4B 蛋白陽性表達率與胃癌病理學參數(shù)的關(guān)系

在TNM 分期（Ⅲ期+Ⅳ期）、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中LAPTM4B 蛋白陽性表達率分別為78.79%、74.42%，高于TNM 分期（Ⅰ期+Ⅱ期）48.94%、未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移45.95%（

P

<0.05）；LAPTM4B蛋白陽性與陰性病人的病灶最大徑、腫瘤分化程度、腫瘤浸潤深度比較，均差異無統(tǒng)計學意義（

P

>0.05）。見表2。

表2 溶酶體相關(guān)四次跨膜蛋白B（LAPTM4B）蛋白陽性表達率與胃癌參數(shù)的關(guān)系

2.3 TFF1蛋白陽性表達率與胃癌病理學參數(shù)的關(guān)系

在TNM 分期（Ⅲ期+Ⅳ期）、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、低分化的胃癌組織中TFF1 蛋白陽性表達率分別為90.91%、81.40%、87.10%，高于TNM 分期（Ⅰ期+Ⅱ期）53.19%、未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移54.05%、高分化和中分化的57.14%，差異有統(tǒng)計學意義（

P

<0.05）；TFF1蛋白陽性與陰性病人的病灶最大徑、腫瘤浸潤深度比較，均差異無統(tǒng)計學意義（

P

>0.05）。見表3。

表3 三葉因子家族1（TFF1）蛋白陽性表達率與胃癌參數(shù)的關(guān)系

3 討論

胃癌具有較高的基礎(chǔ)發(fā)病率和年病死率，其整體臨床預后不佳。胃癌臨床治療方案以及病人預后評估的參考依據(jù)均來自胃癌臨床病理特征。腫瘤蛋白如糖鏈蛋白125或者糖鏈蛋白199，雖然能夠在胃癌的診療中發(fā)揮臨床病情評估作用。但糖鏈蛋白125 或者糖鏈蛋白199 評估胃癌臨床病情的可靠性較低。

LAPTM4B蛋白是細胞膜跨膜調(diào)控相關(guān)因子，可以降低癌細胞膜的穩(wěn)定性，這與LAPTM4B 蛋白具有調(diào)節(jié)癌細胞膜結(jié)構(gòu)蛋白的作用密不可分。癌細胞膜內(nèi)層蛋白LAPTM4B 蛋白的活化可增加癌細胞第二信使的活化，增加惡性腫瘤細胞周期的調(diào)控紊亂風險；TFF1 蛋白是三葉因子調(diào)控的成員，它修飾轉(zhuǎn)錄閱讀區(qū)的重復羧基結(jié)構(gòu)，可以增加癌基因異常轉(zhuǎn)錄的風險。研究揭示了TFF1 蛋白在胃癌病人中的表達。 認為胃癌病人TFF1 蛋白表達陽性率明顯升高，但對LAPTM4B蛋白的分析較少。

本研究在研究免疫組織化學相關(guān)結(jié)論的過程中，可以發(fā)現(xiàn)在胃癌病灶組織中，LAPTM4B 蛋白、TFF1蛋白的表達陽性率明顯高于胃癌癌旁組織，表明LAPTM4B 蛋白、TFF1蛋白的高表達，可能在胃癌的整體性病情進展中發(fā)揮了作用。從癌旁組織到癌組織的病變過程中，LAPTM4B 蛋白、TFF1 蛋白誘導的上皮細胞生物學行為的惡化，或者通過誘導上皮細胞浸潤和黏附能力的增強，能夠促進惡性腫瘤病灶的形成。張靜怡等發(fā)現(xiàn)，在胃癌等胃腸道腫瘤病人中，LAPTM4B 蛋白表達陽性率可超過50%。在具有腹腔轉(zhuǎn)移或者胸腔積液、腹水的病人中，LAPTM4B蛋白的表達陽性率可進一步上升。通過本研究免疫組織化學染色分析可見，LAPTM4B蛋白、TFF1 蛋白在病灶組織中具有較高的染色強度，其中在癌細胞異型性較為明顯的區(qū)域，LAPTM4B蛋白、TFF1 蛋白的染色深度更為明顯。本研究探討LAPTM4B 蛋白和TFF1蛋白的表達與胃癌病人臨床病理特征的關(guān)系中發(fā)現(xiàn)，在TNM 分期晚期或淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病人中，LAPTM4B 蛋白表達陽性率較高，提示LAPTM4B 蛋白對胃癌病人臨床病理特征的影響是有效的。這主要由于LAPTM4B 蛋白的高表達能夠通過提高胃黏膜上皮細胞偽足形成的能力，這將使得癌細胞黏附淋巴組織的風險提高，加速了病理學的進展。特別是LAPTM4B 對于淋巴結(jié)內(nèi)皮黏附分子adherin 的表達調(diào)控，能夠提高腫瘤細胞對于淋巴結(jié)組織的黏附浸潤能力；而在不同TNM 分期、是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、不同分化程度的胃癌組織中，TFF1 蛋白的表達同樣差異有統(tǒng)計學意義，提示TFF1 蛋白也能夠影響到胃黏膜上皮細胞的病變過程，這主要由于TFF1 蛋白能夠影響到腫瘤細胞內(nèi)MAPK 或者P16 信號通路的激活，最終加劇了癌細胞生物學行為的惡化。特別是TFF1 蛋白能夠通過影響到腫瘤細胞分化成熟誘導因子cyc，導致胃癌上皮細胞定向分化障礙，導致低分化比例的胃癌細胞明顯增加。

綜上所述，胃癌組織中LAPTM4B、TFF1 表達強度明顯較癌旁組織增強，可能與胃癌的發(fā)生及發(fā)展有一定的關(guān)系。關(guān)于LAPTM4B、TFF1 的表達與胃癌病人臨床轉(zhuǎn)歸或者臨床預后的關(guān)系，仍然需要后續(xù)研究的探討。