黃 健 張志大 李希玖

江西省胸科醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學科，江西南昌 330006

肺結核是一種由結核桿菌感染肺部導致的傳染性疾病，早期癥狀輕微，隨著疾病發(fā)展，肺結核患者逐漸出現(xiàn)畏寒、出汗、間歇性咳嗽等癥狀，隨著疾病發(fā)展，患者甚至出現(xiàn)咯血現(xiàn)象，嚴重影響患者身體健康[1]。近年來，隨著人們健康意識提升，每年進行健康體檢的人群增多，大批無癥狀結核患者被及早發(fā)現(xiàn)，為患者早期治療、控制結核病蔓延奠定了基礎。據(jù)全國第五次結核病流行病學抽樣調查中，在參與調查的10萬人中，活動性肺結核為459 例，占0.46%，其中，涂陰肺結核的患病率占總患病數(shù)的85.62%[2]。在診斷結核病時，疾病確診離不開細菌學，增大了涂陰肺結核快速診斷難度?，F(xiàn)有診斷技術中，涂片鏡檢迅速且便利，但敏感性不足。且結核菌培養(yǎng)時間超過2 周。結核分枝桿菌RNA 恒溫擴增實時熒光檢測技術（simultaneous amplification and testing for Mycobacterium tuberculosis，SAT-TB）檢測迅速，僅需要1～2 h，但容易因外力因素（如污染等）出現(xiàn)假陽性，靈敏度低，對實驗員的專業(yè)性要求高。因結核的特異性，效應T 細胞會向病變位置集中，依照該特點，本研究收集患者肺泡灌洗液，進行結核感染效應T 細胞斑點試驗（T-cell spot test，T-SPOT），通過計算肺泡灌洗液內結核桿菌特異性單核細胞，快速診斷肺結核。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年1月至12月江西省胸科醫(yī)院收治的80 例疑似肺結核患者作為研究對象，按照痰涂片檢驗結果將其分為涂陽組（35 例）與涂陰組（45 例）。涂陽組中，男24 例，女11 例；年齡25～67歲，平均（46.02±4.02）歲；病程2～6 個月，平均（4.42±0.41）個月；肺結核17 例，結核性腹膜炎13 例，其他5 例。涂陰組中，男28 例，女17 例；年齡26～67 歲，平均（46.53±4.47）歲；病程2～6 個月，平均（4.32±0.43）個月；肺結核18 例，結核性腹膜炎12 例，其他5 例。兩組患者的年齡、性別等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會審核批準。納入標準：①患者既往無結核病史；②患者血清HIV 檢測為陰性；③遵循 《肺結核診斷和治療指南》[3]，對患者肺泡灌洗液均進行SAT-TB、T-SPOT 檢測；④患者愿意參與本研且所有患者及其家屬均知情同意。排除標準：①精神障礙患者；②合并嚴重肝、腎、心臟疾病患者；③患者一般資料不全。

1.2 方法

標本采集：使用日本1575k 型電子支氣管鏡對患者進行檢查，于患者肺部CT 影像學檢查病灶位置的支氣管肺段，將灌洗液（0.9%氯化鈉溶液；江西科倫藥業(yè)有限公司；生產批號：20200912）注入支氣管肺泡灌洗，以YX930D 型負壓吸引器（上海寶佳醫(yī)療器械有限公司）回收灌洗液30 ml，送檢驗科進行T-SPOT、SAT-TB 檢測。

T-SPOT 檢測：收集肝素抗凝肺泡灌洗液10 ml，以雙層紗布過濾，去除灌洗液內雜質，在離心機內以離心半徑5 cm、離心速度1200 r/min 離心10 min，去除上層清液，留下層濃液，分離其中單核細胞，調節(jié)細胞數(shù)達2.5×105/ml，選擇T-SPOT 試劑盒，根據(jù)說明書進行操作，步驟如下：將單核細胞分離，和培養(yǎng)濾過蛋白CFP-10、結核特異性抗原分泌靶向抗原ESAT-6放于抗γ-干擾素抗體預包被板內孵育，恒溫37℃，孵育16～20 h。使用ELR06IFL 型自動讀板儀（德國艾迪公司）對斑點計數(shù)，無反應對照0～5 孔點，有反應標本為：抗原A/B 點數(shù)-無反應對照孔6 點為陽性；若無反應對照孔點≥6，有反應標本為：抗原A/B 點數(shù)≥無反應對照孔的2 倍為陽性。

SAT-TB 檢驗：在肺泡灌洗液內添加4%氫氧化鈉溶液，使灌洗液內黏液液化，采用檢測試劑盒檢測，并依照說明書操作。注意：液化體積不高于標本量1 倍。

1.3 觀察指標及評價標準

①觀察涂陰組與涂陽組患者肺泡灌洗液T-SPOT檢測陽性率，陽性率=陽性例數(shù)/總例數(shù)。②以分子生物學檢查結果為金標準，觀察T-SPOT 與SAT-TB 在涂陰肺結核檢測中的準確率、靈敏度、特異度、陽性預測值（positive predictive value，PPV）與陰性預測值（negative predictive value，NPV）。準確率=（真陽性+真陰性）例數(shù)/總例數(shù)×100%，靈敏度=真陽性/（真陽性+假陰性）×100%，特異度=真陰性/（真陰性+假陽性）×100%，PPV=真陽性/（真陽性+假陽性）×100%，NPV=真陰性/（真陰性+假陰性）×100%。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 21.0 統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料用均數(shù)±標準差（±s）表示，兩組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料用率表示，兩組間比較采用χ2檢驗，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者肺泡灌洗液T-SPOT 檢測結果的比較

涂陽組患者的陽性率為97.14%（34/35），高于涂陰組的75.56%（34/45），差異有統(tǒng)計學意義（χ2=7.196，P=0.007）。

2.2 涂陰組患者T-SPOT 與SAT-TB 在涂陰肺結核中檢驗結果的比較

T-SPOT 檢測的準確率為93.33%（42/45），高于SAT-TB 檢測的80.00%（36/45），差異有統(tǒng)計學意義（χ2=7.688，P=0.006）（表1）。

表1 涂陰組患者T-SPOT 與SAT-TB 在涂陰肺結核中的檢驗結果（例）

2.3 T-SPOT 與SAT-TB 檢測涂陰肺結核的靈敏度、特異度、PPV 與NPV

T-SPOT 檢測的靈敏度、NPV 高于SAT-TB 檢測，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。兩種檢測方式的特異度、PPV 比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）（表2）。

表2 T-SPOT 與SAT-TB 檢測涂陰肺結核的靈敏度、特異度、PPV與NPV[%（n/N）]

3 討論

目前結核病仍是全球主要傳染病之一，致死率高，危害性大，若能夠及早發(fā)現(xiàn)結核病并治療，對控制結核病具有重要意義[4-6]。結核桿菌的確診，離不開細菌學、病理學，細菌學應用較為廣泛，但是，部分細菌檢測為陰性者也可能感染肺結核，易發(fā)生診斷疏漏，不利于結核病篩查與控制，而病理學檢測雖然準確，但耗時長，不利于普及。隨著微創(chuàng)技術的完善和腔鏡器械的廣泛應用，已有諸多研究[7-9]證實肺泡灌洗液相關檢測可顯著提升結核病診斷陽性率。

T-SPOT 作為酶聯(lián)免疫斑點檢測技術，以結核患者特異性T 細胞的免疫應答作為基礎，檢驗抗原釋放的γ-干擾素，當受檢人體內受到結核桿菌的抗原刺激，T 淋巴細胞致敏，并再次與同類抗原相遇，將釋放γ-干擾素[10-12]。通過檢測單細胞內分泌γ-干擾素的數(shù)目，判斷受檢人是否感染結核桿菌。并且，活動性肺結核患者的特異性T 細胞擴大與克隆會濃縮于患者病灶部位，因此，以T-SPOT 檢測受檢人的肺泡灌洗液，能夠準確區(qū)分受檢人為活動性結核或者潛伏性結核[13]。本研究結果顯示，T-SPOT 檢測下，涂陽組的陽性率（97.14%）高于涂陰組（75.56%），差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。對涂陰組檢測時，T-SPOT 檢測涂陰肺結核的陽性率（94.29%）高于SAT-TB 檢測（77.14%），差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；T-SPOT 檢測的靈敏度、NPV 高于SAT-TB 檢測，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；兩種檢測方式的特異度、PPV 比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），提示T-SPOT 檢測效果更加準確，值得推廣。在王琳等[14]的研究中，T-SPOT 檢查的靈敏度較高，為91.1%，與本研究結果一致。T-SPOT 檢測用時短，特異度高，可能和涂陰肺結核的結核桿菌數(shù)量較少相關，即使利用灌洗液在病灶處收集結核桿菌，結核桿菌的數(shù)量依然有限，而T-SPOT 檢測技術主要檢測單個核細胞內抗原致敏T 細胞的數(shù)量，并非檢測細菌數(shù)量，因此，與其他檢測方式比較，T-SPOT 檢測的特異性高，敏感性強，診斷價值高[15-18]。

綜上所述，肺泡灌洗液效應T 細胞檢測在涂陰肺結核中的靈敏度高，且檢測速度快，在肺結核篩查中具有重要意義，值得推廣。