周育蕾,陳艷潔,劉澤民,李艷琴,段玉香,張鳳蓮

(河北省唐山市人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科,河北 唐山 063000)

阿爾茨海默病(Alzheimer's disease，AD)是以進(jìn)行性認(rèn)知功能障礙和行為損害為主要特征的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性病變[1]。錯(cuò)誤折疊β-淀粉樣蛋白(Aβ)于大腦中沉積形成的淀粉樣蛋白斑塊和Tau蛋白過(guò)度磷酸化導(dǎo)致的神經(jīng)纖維糾纏是AD最主要的兩大病理特征[2]。微小RNAs(microRNAs，miRNAs)是一類非編碼RNA分子，調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄后表達(dá)，通過(guò)多種途徑參于AD發(fā)生[3]。研究發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)元中富含miR-137，其中海馬體分子層和皮質(zhì)層含量較多，腦干和小腦含量較少，與海馬區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞增殖、分化相關(guān)[4]。提示miR-137參與神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育，可能與神經(jīng)系統(tǒng)疾病有關(guān)。研究表明，膽固醇代謝異常在Aβ產(chǎn)生中發(fā)揮重要作用，與AD發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[5]。三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白7(ABCA7)是一種全分子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，在膽固醇的逆轉(zhuǎn)中發(fā)揮重要作用。已有研究表明，ABCA7是AD易患基因，其基因多態(tài)性和散發(fā)性與AD發(fā)生發(fā)展相關(guān)[6]。因此。本研究分析AD患者血清miR-137、ABCA7水平變化，探討二者對(duì)AD的診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1一般資料:選取我院2019年1月至2020年12月收治的138例AD患者為AD組，其中男76例，女62例；年齡54～86(65.25±8.14)歲；體質(zhì)指數(shù)18～28(23.54±2.17)kg/m2；病程1～11(5.24±1.18)年；文化程度：66例高中及以上，72例高中及以下。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《美國(guó)精神障礙診斷與統(tǒng)計(jì)手冊(cè)(第五版)》[7]AD診斷標(biāo)準(zhǔn)；②MRI或CT腦改變或腦萎縮者；③臨床資料完整者；④患者監(jiān)護(hù)人均知情研究；⑤無(wú)嚴(yán)重軀體疾病者；⑥無(wú)攻擊行為或自殺傾向者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①精神活性藥物濫用史者；②腦血管疾病、顱腦外傷等導(dǎo)致的認(rèn)知功能損害者；③嚴(yán)重感染疾病者；④合并自身免疫性疾病者；⑤合并心、肝、腎等器質(zhì)性病變者；⑥其他精神疾病者。另選取同期64名體檢健康者為對(duì)照組，其中男35例，女30例；年齡48～84(64.88±7.36)歲；體質(zhì)指數(shù)18～28(23.47±2.20)kg/m2；文化程度：32例高中及以上，32例高中及以下。兩組基線資料比較無(wú)差異，具有可比性(P>0.05)。本研究經(jīng)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2血清指標(biāo)檢測(cè):采集AD患者入院時(shí)、對(duì)照組體檢時(shí)靜脈血，3000r/min離心10min(半徑10cm)，取上清，置于-80℃冰箱中待檢。TRIzol試劑盒(武漢科昊佳生物科技有限公司，貨號(hào)：15596-026)提取血清總RNA，TakaRa逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(杭州?；锛夹g(shù)有限公司，貨號(hào)：K1622)轉(zhuǎn)錄合成cDNA，加入miR-137引物序列(正向引物：5'-TCCTCTGACTCTCTTCGGTG-3'，反向引物：5'-TGCCGCTGGTACTCTCCT-3')，qPCR檢測(cè)，反應(yīng)條件：95℃ 90s、95℃ 30s、63℃ 30s、72℃ 15s(40個(gè)循環(huán))，以U6做內(nèi)參校正(正向引物：5'-CTCGCTTCGGCAGCACA-3'，反向引物：5'-AACGCTTCACGAATTGCGT-3')，反應(yīng)結(jié)束后得到各反應(yīng)管Ct，2-ΔΔCt法計(jì)算血清miR-137相對(duì)表達(dá)量。酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定血清ABCA7、Aβ42、Aβ40水平，計(jì)算Aβ42/Aβ40比值，試劑盒由上海梵態(tài)生物科技有限公司提供，貨號(hào)：FT-P35284R、FT-P37292R、FT-P37293R。貝克曼庫(kù)爾特AU5800全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清總膽固醇(total cholesterol，TC)、甘油三酯(triglycerides，TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平。

1.3病情程度分級(jí):采用臨床癡呆評(píng)定量表(clinical dementia rating，CDR)簡(jiǎn)體中文版[8]對(duì)AD患者進(jìn)行分級(jí)，分為輕度組(n=48)、中度組(n=59)、重度組(n=31)。

1.4認(rèn)知功能評(píng)估:采用簡(jiǎn)易精神狀態(tài)量表(MMSE)[9]評(píng)估受試者認(rèn)知功能，包括6個(gè)維度共30個(gè)條目，分值0～30分，分值越高則認(rèn)知功能越好，中學(xué)及以上<24分，小學(xué)<20分，文盲<17分表示認(rèn)知功能障礙。

2 結(jié) 果

2.1兩組血清miR-137、ABCA7水平比較:AD組血清miR-137水平明顯低于對(duì)照組，ABCA7水平明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 兩組血清miR-137 ABCA7水平比較[M(QL,QU)]

2.2不同病情程度AD患者血清miR-137、ABCA7水平比較:輕度組、中度組、重度組血清miR-137水平逐漸降低，ABCA7水平逐漸升高(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 不同病情程度AD患者血清miR-137 ABCA7水平比較[M(QL,QU)]

2.3兩組血清Aβ42、Aβ40、Aβ42/Aβ40、血脂水平和MMSE評(píng)分比較:AD組血清Aβ42、Aβ42/Aβ40、HDL-C和MMSE評(píng)分明顯低于對(duì)照組，Aβ40、TC、LDL-C水平明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。兩組TG水平比較無(wú)差異(P>0.05)。見(jiàn)表3。

表3 兩組血清Aβ42 Aβ40 Aβ42/Aβ40 血脂水平和MMSE評(píng)分比較

2.4AD組血清miR-137、ABCA7水平與血清Aβ42、Aβ40、Aβ42/Aβ40、血脂和MMSE、CDR評(píng)分的相關(guān)性:Spearman相關(guān)性分析顯示，AD組血清miR-137水平與Aβ42、Aβ42/Aβ40、HDL-C水平和MMSE評(píng)分呈正相關(guān)，與Aβ40、TC、LDL-C水平、CDR評(píng)分呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)；血清ABCA7水平與Aβ42、Aβ42/Aβ40、HDL-C和MMSE評(píng)分呈負(fù)相關(guān)，與Aβ40、TC、LDL-C水平、CDR評(píng)分呈正相關(guān)(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 AD組血清miR-137 ABCA7水平與血清Aβ42 Aβ40 Aβ42/Aβ40 血脂和MMSE CDR評(píng)分的相關(guān)性

2.5血清miR-137、ABCA7水平對(duì)AD的診斷價(jià)值:ROC曲線顯示，血清miR-137、ABCA7水平診斷AD的AUC、最大約登指數(shù)、截?cái)嘀?、敏感度、特異度?.837(95%CI：0.778～0.885)、0.609、0.51、90.58%、70.31%和0.823(95%CI：0.763～0.873)、0.508、1.36、80.43%、70.31%。miR-137+ABCA7診斷AD的AUC為0.925(95%CI：0.880～0.957)，明顯大于miR-137、ABCA7單獨(dú)診斷(Z=3.242、3.723，P=0.001、P<0.001)，最大約登指數(shù)、敏感度、特異度為0.699、85.51%、84.37%。見(jiàn)圖1。

圖1 血清miR-137、ABCA7水平診斷AD的ROC曲線

3 討 論

miR-137位于人染色體1p22，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)尤其是海馬齒狀回和分子層有廣泛表達(dá)，能影響新生神經(jīng)元產(chǎn)生和大腦可塑性[4]。本研究顯示，AD組血清miR-137水平明顯低于對(duì)照組，且隨著病情程度加重而降低，提示血清miR-137降低參與AD發(fā)生發(fā)展。結(jié)果還顯示，AD組血清miR-137水平與Aβ42、Aβ42/Aβ40和MMSE評(píng)分呈正相關(guān)，與Aβ40水平、CDR評(píng)分呈負(fù)相關(guān)，進(jìn)一步說(shuō)明miR-137參與了AD病理過(guò)程。分析與miR-137能抑制絲氨酸棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶長(zhǎng)鏈1表達(dá)，降低細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)酰胺，影響Aβ內(nèi)源性生成及從頭合成有關(guān)[10]。本研究結(jié)果顯示，AD組血清miR-137水平與HDL-C呈正相關(guān)，與TC、LDL-C呈負(fù)相關(guān)，說(shuō)明miR-137還與AD患者膽固醇代謝異常有關(guān)。

ABCA7基因位于染色體19q13.3，與大多成員一樣具有脂質(zhì)運(yùn)輸功能，且小膠質(zhì)細(xì)胞中ABCA7 mRNA表達(dá)較神經(jīng)元高10倍。Satoh等[11]通過(guò)轉(zhuǎn)染ABCA7發(fā)現(xiàn)，在不存在或存在載脂蛋白受體情況下，ABCA7能增加細(xì)胞內(nèi)基礎(chǔ)膽固醇流出量，說(shuō)明ABCA7可改變細(xì)胞膜膽固醇含量。本研究結(jié)果顯示，AD組血清ABCA7水平升高，且隨著病情程度加重而提升，推測(cè)高表達(dá)ABCA7可能是機(jī)體一種代償反應(yīng)，ABCA7能通過(guò)增加細(xì)胞內(nèi)基礎(chǔ)膽固醇流出量，降低細(xì)胞膜膽固醇表達(dá)，減少“脂筏”數(shù)量，抑制Aβ生成和聚集[12]。本研究結(jié)果顯示，AD組血清ABCA7水平與TC、LDL-C水平呈正相關(guān)，與HDL-C水平呈負(fù)相關(guān)，進(jìn)一步說(shuō)明ABCA7能影響膽固醇表達(dá)。結(jié)果還顯示，AD組血清ABCA7水平與Aβ42、Aβ42/Aβ40和MMSE評(píng)分呈負(fù)相關(guān)，與Aβ40水平、CDR評(píng)分呈正相關(guān)，提示血清ABCA7水平高表達(dá)還與AD患者Aβ沉積、認(rèn)知功能障礙密切。ROC曲線顯示，血清miR-137、ABCA7水平診斷AD的AUC均大于0.80，二者聯(lián)合診斷AUC顯著增加，說(shuō)明miR-137聯(lián)合ABCA7能提升AD診斷價(jià)值。

綜上所述，AD患者血清miR-137水平降低，ABCA7水平升高，與AD患者Aβ沉積、膽固醇代謝異常、認(rèn)知功能障礙密切相關(guān)，可能成為AD診斷、評(píng)估標(biāo)志物，二者聯(lián)合檢測(cè)價(jià)值更高。但本研究樣本量有限，且有關(guān)miR-137、ABCA7與AD的作用機(jī)制尚未完全明確，還需進(jìn)一步研究。