吳守業(yè)，林道炯，王亞洲

(海南省婦女兒童醫(yī)學(xué)中心兒科，海南 海口 570206)

呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)是急性下呼吸道感染(acute lower respiratory tract infections,ALRTIs)的最為常見病原菌，是引起支氣管肺炎、毛細(xì)支氣管炎、大葉性肺炎、間質(zhì)性肺炎及哮喘發(fā)展的主要原因，常表現(xiàn)為發(fā)熱、咳嗽咳痰、喘息等癥狀，可聞及肺部濕羅音或哮鳴音，RSV感染后可出現(xiàn)氣道黏膜水腫、黏液分泌增多、上皮細(xì)胞脫落，呈現(xiàn)為氣道高反應(yīng)、氣道慢性炎癥，是患兒出現(xiàn)反復(fù)感染喘息甚至哮喘的重要原因[1,2]。RSV可分為RSV-A和RSV-B兩種亞型，可引起不同的臨床流行病學(xué)特征，給患兒及家庭帶來了一定疾病負(fù)擔(dān)，嚴(yán)重影響患兒的生活質(zhì)量[3]。目前有關(guān)兒童RSV流行病學(xué)特征及疾病負(fù)擔(dān)的相關(guān)研究較多，而兒童不同亞型RSV臨床流行病學(xué)特征及氣候因素的系統(tǒng)性研究甚少。因此，本研究擬分析不同亞型RSV感染的流行特征、臨床特點及氣候因素的相關(guān)性研究，以期為RSV的預(yù)防控制及診治提供重要的參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1研究對象:選擇2018年1月至2020年12月我院住院RSV感染急性下呼吸道感染患兒309例，男188例(60.84%)，女121例(39.16%)，平均年齡為5.05(2.02～13.56)月，所有研究對象均進(jìn)行鼻咽分泌物病毒檢測。入選標(biāo)準(zhǔn)：病程在1個月內(nèi)存在急性下呼吸道感染及哮喘發(fā)作的患兒，鼻咽分泌物檢測存在RSV感染者。排除標(biāo)準(zhǔn)：存在先天性心臟病、支氣管發(fā)育不良、肺大泡、肺膿腫、支氣管擴(kuò)張、其他系統(tǒng)性疾病患兒；鼻咽分泌物檢測非RSV感染者。

1.2方 法

1.2.1鼻咽分泌物采集:一側(cè)鼻腔咽部以下插入一次性無菌吸痰管快速吸取，將鼻咽分泌物置于2mL無菌生理鹽水中稀釋，進(jìn)行病原學(xué)檢測，先震蕩混勻，將標(biāo)本移至離心管中，500rmp，離心5min，棄上清，加入PBS 300μL吹打為懸液。

1.2.2免疫熒光法檢測RSV:取25mL懸液于干燥玻片上，干燥箱干燥1h，加入冷丙酮溶液固定細(xì)胞，采用美國Chemicon公司呼吸道病毒檢測試劑盒檢修檢測，在玻片上加入10μL熒光標(biāo)記的呼吸道病毒單抗，37℃孵育30min，PBS洗3次，干燥后加入固定液，蓋上蓋玻片后于顯微鏡下觀察，在200倍熒光顯微鏡下≥5個熒光細(xì)胞為RSV感染陽性。

1.2.3熒光定量PCR檢測RSV分型:將鼻咽部分泌物用Trizol(美國Invitrogen公司)裂解充分后，加入200μL氯仿，震蕩混勻，12000rpm離心10min，取上層液至新的EP管中，加入100μL異丙醇，充分震蕩混勻后離心，棄上清，采用乙醇洗后離心，加入無酶水制為RNA，采用逆轉(zhuǎn)錄酶(南京諾唯贊公司)逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，采用Xpert Xpress Flu/RSV Assay檢測盒對RSV亞型檢測，進(jìn)行熒光定量PCR擴(kuò)增(RT-PCR)，引物：RSV-AF：5’-AGATCACTTCTGTCATCCAGCAA-3’、RSV-AR:5’-TTCTGCACATCATAATTAGGAG-3’，RSV-A探針:CACCATCCAACGGAGCACAGGAGAT，RSV-BF:5’-AAGATGCAAATCATAAATTCACAGGA-3’，RSV-BR:5’-TGATATCCAGCATCTTTAAGTA-3’，RSV-B探針：TTTCCCTTCCTAACCTGGACATA，反應(yīng)條件：95℃ 30s 預(yù)變性，95℃ 10s，60℃ 30s，40個循環(huán)，37℃ 5S結(jié)束。S型擴(kuò)增曲線為相應(yīng)HSV亞型陽性，典型S型曲線設(shè)定閾值為循環(huán)次數(shù)CT值≤40?；旌细腥緳z測：采用熒光定量PCR對HSV陽性患兒進(jìn)行流感病毒、副流感病毒、腺病毒、偏肺病毒、冠狀病毒、鼻病毒、博卡病毒等檢測。

1.2.4觀察指標(biāo):收集所有研究對象的一般臨床資料(月齡、出生體重、性別、生產(chǎn)方式、足月兒、濕疹史、過敏史、喘息史)、流行特征(年份、年齡、季節(jié)、病情程度)、臨床特點(發(fā)熱、咳嗽、喘息、混合感染、病程和住院時間)及氣候因素，病情程度依據(jù)2013年版社區(qū)獲得性肺炎管理指南判斷輕度和重度患兒[4]，氣候因素包括平均氣溫(℃)、月總降雨量(mm)、月相對濕度(%)、月日照時間(h)、月平均風(fēng)速(m/s)、空氣污染PM2.5(μg/m3)、PM10(μg/m3)、O3(μg/m3)、SO2(μg/m3)、NO2(μg/m3)、CO(mg/m3)的含量。

2 結(jié) 果

2.1不同RSV亞型感染的一般臨床資料分析:309例RSV患兒中，RSV-A患兒186例(60.19%)，RSV-B患兒123例(39.81%)，以RSV-A型為優(yōu)勢，兩組患者在月齡、出生體重、性別、生產(chǎn)方式、足月兒、濕疹史、過敏史、喘息史等一般臨床資料上比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)，見表1。

表1 不同亞型RSV感染患兒一般臨床資料比較n(%)

2.2不同 RSV亞型感染的流行特征分析:流行病學(xué)特征分析中，RSV-A和RSV-B組在不同年份、不同季節(jié)上差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)，2018年和2019年以RSV-B感染為優(yōu)勢，2020年以RSV-A感染為優(yōu)勢，RSV-A和RSV-B感染患兒以3歲以內(nèi)、冬春季感染和輕度癥狀為主，RSV-A和RSV-B組在不同月齡、病情程度上差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)，見表2。

表2 不同亞型RSV感染患兒流行病學(xué)特征分析n(%)

2.3不同 RSV亞型感染的臨床特點分析:臨床特點分析中，RSV-A和RSV-B組在發(fā)熱、咳嗽、喘息、混合感染等臨床癥狀、病程及住院時間上差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)，見表3。

表3 不同亞型RSV感染患兒臨床特點

2.4不同RSV亞型感染與氣候因素的相關(guān)性分析:經(jīng)Spearman相關(guān)性分析示，RSV-A感染與PM2.5、PM10、SO2、NO2、CO呈正相關(guān)(r=0.658，P<0.001；r=0.612，P=0.002；r=0.501，P=0.008；r=0.728，P=0.001；r=0.642，P<0.001)，與平均氣溫、月總降雨量、月平均風(fēng)速及O3呈負(fù)相關(guān)(r=-0.592，P=0.001；r=-0.502，P=0.005；r=-0.618，P=0.002；r=-0.654，P<0.001)，與月相對濕度、月日照時間無明顯相關(guān)性(P>0.005)；RSV-B感染與CO呈正相關(guān)(r=0.559，P<0.001)，與月平均溫度、月總降雨量及O3呈負(fù)相關(guān)(r=-0.581，P=0.001；r=-0.368，P=0.025；r=-0.598，P<0.001)；與月相對濕度、月日照時間、月平均風(fēng)速、PM2.5、PM10、SO2、NO2無明顯相關(guān)性(P>0.05)，見表4。

表4 不同亞型RSV感染患兒與氣候因素的Spearman相關(guān)性分析

3 討 論

RSV是導(dǎo)致嬰幼兒ALRTIs的主要病因，主要表現(xiàn)為毛細(xì)支氣管炎、間質(zhì)性肺炎和哮喘急性發(fā)作，由于嬰幼兒免疫功能相對薄弱，發(fā)生感染機率增加，易導(dǎo)致暴發(fā)流行和重復(fù)感染，而RSV的反復(fù)感染最為常見，尤其是2歲以內(nèi)兒童至少經(jīng)歷過一次RSV感染[5]。RSV屬于副黏病毒科的肺病，由基質(zhì)蛋白、疏水性小蛋白和糖基化表面蛋白(F蛋白和G蛋白)等構(gòu)成的包膜，可根據(jù)G蛋白的記憶特性和對抗體的反應(yīng)，可分為RSV-A和RSV-B型[6]。近年來，世界范圍內(nèi)流行的RSV-A株為ON1基因型，RSV-B株為BA基因型[7]。不同國家及地區(qū)RSV感染存在一定特征，因此，本研究通過分析海南地區(qū)不同亞型RSV感染的流行特征、臨床特點及氣候特征，為該病的防治提供重要的臨床流行病學(xué)特征。

本研究中，分析了2018年至2020年兒童RSV感染的流行病學(xué)特征，研究發(fā)現(xiàn)RSV-A患兒186例(60.19%)，RSV-B患兒123例(39.81%)，以RSV-A型為優(yōu)勢，與大部分國家支持的觀點以RSV-A感染為流行株，可能是RSV-A患兒基因型內(nèi)的遺傳變異度高，致病性更高，易引起A亞型的流行[8]。通過不同年齡段分析不同亞型RSV感染的流行特征中，2018年和2019年以RSV-B感染為優(yōu)勢，2020年以RSV-A感染為優(yōu)勢，冬春季感染為主，表明RSV存在兩亞型交叉循環(huán)感染趨勢，在每個流行季以一個亞型為優(yōu)勢群，而發(fā)病主要集中在春秋季。另外，RSV-A和RSV-B感染患兒以3歲以內(nèi)感染為主，尤其是1歲以內(nèi)嬰幼兒感染占72.49%(224/309)，但RSV-A和RSV-B組在不同月齡上無顯著差異，與既往研究報道存在一致性[9,10]?？梢?，RSV感染好發(fā)于小年齡的嬰幼兒，可能是嬰幼兒各系統(tǒng)尚未發(fā)育完全，免疫系統(tǒng)尚不成熟，針對融合蛋白F和吸附蛋白G的IgA、IgM、IgG等抗體較少，而胎兒通過胎盤傳遞的母體IgG抗體不足，機體免疫力低下，易引起RSV感染增加[11]。

既往研究提示，不同亞型RSV感染所引起的病情嚴(yán)重度存在差異，而不同地區(qū)報道存在不一致性[11]。在本研究中，以輕度癥狀為主，RSV-B型病情嚴(yán)重度稍高，但兩組間在病情嚴(yán)重度上尚未達(dá)到統(tǒng)計學(xué)意義。在臨床特點分析中，相對較高比例的患者出現(xiàn)咳嗽和喘息等癥狀，發(fā)熱、混合感染癥狀少見，但兩組不同亞型RSV感染中在發(fā)熱、咳嗽、喘息、混合感染等臨床癥狀、病程及住院時間上無顯著差異，今后需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量和多中心進(jìn)行臨床特點分析，以及分析不同亞型RSV感染的基因型特點。

研究表明，RSV流行與氣溫、降水等氣候特征密切相關(guān)，而不同亞型RSV感染與氣溫、降雨量、日照時間及風(fēng)速存在相關(guān)性[12]。海南地區(qū)處于熱帶地區(qū)，四季溫差小，常年日照時間長，夏季高溫濕熱，低風(fēng)速和降雨量較多，全年相對濕度變化不大，冬春季節(jié)溫度有所降低可引起上呼吸道黏膜血管收縮，纖毛擺動下降，氣道分泌物的排除下降，易導(dǎo)致RSV感染。大氣中O3是一種強氧化劑，可與RSV發(fā)生反應(yīng)，阻止病毒輔助，可將紫外線轉(zhuǎn)化為熱能，具有保護(hù)作用。SO2長期接觸可引起氣道黏膜水腫、滲出增多，有利于RSV的粘附復(fù)制?？臻g中PM2.5、PM10顆粒物質(zhì)易在肺內(nèi)沉積，可導(dǎo)致呼吸道黏膜破壞，造成感染幾率增加。本研究發(fā)現(xiàn)RSV-A感染與氣溫、降雨量、風(fēng)速和O3呈負(fù)相關(guān)，與空氣PM2.5、PM10、SO2、NO2、CO呈正相關(guān)，RSV-B感染與CO呈正相關(guān)，與月平均溫度、月總降雨量及O3呈負(fù)相關(guān)，提示不同亞型RSV-A感染與氣候特征存在明顯相關(guān)性。

綜上，RSV-B感染在2018年和2019年流行，RSV-A感染在2020年流行，RSV-A和RSV-B感染患兒以3歲以內(nèi)、冬春季感染和輕度癥狀為主，主要表現(xiàn)為咳嗽和喘息等臨床癥狀，不同亞型RSV感染與氣候環(huán)境因素存在相關(guān)性，RSV-A與氣溫、降雨量、風(fēng)速和空氣質(zhì)量相關(guān)性，RSV主要與氣溫、降雨量、O3及CO相關(guān)。這些不同亞型RSV感染的2018年至2020年RSV感染的流行病學(xué)、臨床特征及氣候特點，為早期防控RSV感染患兒提供重要的理論依據(jù)。