王 蕊,魏 莉,盧洪濤,李冉冉

(山東省棗莊市婦幼保健院醫(yī)學(xué)遺傳與產(chǎn)前篩查科,山東 棗莊 277100)

作為妊娠期特有疾病，子癇前期主要是指孕婦在妊娠期間發(fā)生的血清蛋白、血壓以及血脂的異常情況，其發(fā)病率高達(dá)6%～8%，是孕產(chǎn)婦及圍產(chǎn)兒死亡的主要因素。子癇前期發(fā)病機(jī)制尚不明確，考慮與母胎界面免疫平衡失調(diào)、血管內(nèi)皮損傷、滋養(yǎng)細(xì)胞遷移受限有關(guān)。作為一種炎性細(xì)胞因子，高遷移率族蛋白B1(HMGB1)與細(xì)胞表面受體結(jié)合后可推動(dòng)介導(dǎo)炎癥反應(yīng)，進(jìn)而在炎癥形成及發(fā)展中發(fā)揮作用[1]。晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(RAGE)則是HMGB1主要受體，其與HMGB1親和力高，兩者結(jié)合后會(huì)對核轉(zhuǎn)錄因子-kB(NF-KB)信號(hào)通道產(chǎn)生活化作用，進(jìn)而對炎癥因子分泌產(chǎn)生刺激[2]。目前，臨床關(guān)于HMGB1-RAGE信號(hào)通路在子癇前期中的參與作用研究較少。為探究兩者相關(guān)性，此次研究收集2019年1月至2021年1月我院64例子癇前期患者作為研究對象，并總結(jié)匯報(bào)研究結(jié)果。

1 資料與方法

1.1一般資料:前瞻性收集我院子癇前期患者64例，來源時(shí)間范圍為2019年1月至2021年1月，根據(jù)疾病程度分組，輕度組與重度組分別為34例、30例，平均年齡分別為(29.63±4.02)歲(22～37歲)、(29.53±4.09)歲(21～38歲)；孕周分別為(32.39±1.14)周(25～35周)、(34.95±1.21)周(26～36周)。研究設(shè)計(jì)將病例組與正常對照組做對照，選擇同期健康孕婦(n=30)作為對照組，最大年齡孕婦36歲，最小年齡是23歲，年齡平均(29.18±4.21)歲，孕周(33.84±1.64)周(25～36周)。三組有可比性(P>0.05)。

1.2納入與排除標(biāo)準(zhǔn):入組標(biāo)準(zhǔn)：①所有入組對象B超顯示為單胎。②子癇前期診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《妊娠期高血壓和子癇前期指南2019版》[3]；③患者及家屬已明確研究目標(biāo)及流程，自愿參與研究并在知情同意書簽字，醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)掌握研究相關(guān)事項(xiàng)，并批準(zhǔn)。④產(chǎn)婦年齡≥18歲，可正常交流。排除標(biāo)準(zhǔn)：①心臟受損或肝腎異常者；②合并精神異常、心理障礙或意識(shí)喪失患者；③合并原發(fā)性高血壓、糖尿病及心腦血管疾病患者；④聽力喪失、語言溝通不順暢，對研究無法做到順利配合患者。

1.3方 法

1.3.1樣本采集:產(chǎn)婦分娩前與清晨空腹?fàn)顟B(tài)下采集患者外周靜脈血，以2mL為宜，按照3000r/min離心速率實(shí)施離心處理，時(shí)間以5min為宜，提取血清，保存于-80℃冰箱環(huán)境中，留作批量待測。產(chǎn)婦剖宮產(chǎn)時(shí)于采集胎盤母體面中央組織3塊，規(guī)格為1cm×1cm×1cm，需要注意的是要避開梗死及鈣化區(qū)域，采用生理鹽水進(jìn)行漂洗，并將其固定溫度為4℃、濃度為40g/L多聚甲醛溶液中，另外兩塊組織保存于無菌凍存管中，放置于-80℃冰箱中。

1.3.2檢測方法:胎盤組織及血清HMGB1、RAGE、NF-kBp65檢測采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測，試劑盒購自凱斯勒生物醫(yī)藥揚(yáng)州有限公司，按照試劑盒操作標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行各項(xiàng)檢測流程，保障檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。采用免疫組化法對胎盤組織HMGB1、RAGE、NF-kBp65進(jìn)行定位，嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

1.4觀察指標(biāo):檢測三組血清及胎盤組織中HMGB1、RAGE、NF-kBp65表達(dá)情況，對胎盤組織中HMGB1、RAGE、NF-kBp65蛋白定位進(jìn)行免疫組化試驗(yàn)，根據(jù)染色結(jié)果計(jì)分，+、++、+++分別表示弱陽性、中度陽性與強(qiáng)陽性。分析HMGB1、RAGE、NF-kBp65與子癇前期相關(guān)性。

2 結(jié) 果

2.1三組血清中HMGB1、RAGE、NF-kp65含量比較:與對照組及輕度組相比，重度組患者血清HMGB1、RAGE、NF-kp65含量明顯較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 三組血清中HMGB1 RAGE NF-Bp65含量比較

2.2三組胎盤組織中HMGB1、RAGE、NF-kp65 mRNA比較:三組胎盤組織中HMGB1、RAGE表達(dá)重度組最高，對照組最低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 三組胎盤組織中HMGB1 RAGE NF-kp65 mRNA比較

2.3三組胎盤組織中HMGB1、RAGE、NF-kBp65蛋白定位表達(dá)比較:重度組HMGB1、RAGE、NF-kBp65強(qiáng)陽性表達(dá)均高于輕度組及對照組(P<0.05)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表3。

表3 三組胎盤組織中HMGB1 RAGE NF-kBp65蛋白定位表達(dá)比較

2.4HMGB1、RAGE、NF-kBp65相關(guān)性分析:子癇前期孕婦血清HMGB1、RAGE與NF-kBp65呈現(xiàn)出明顯的正相關(guān)(r=0.387，P<0.05)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 討 論

子癇前期多發(fā)于妊娠20周后，患者常伴隨高血壓及蛋白尿癥狀，部分合并全身臟器功能受損，呈現(xiàn)出動(dòng)態(tài)性發(fā)展，隨著病情進(jìn)展，會(huì)誘發(fā)HELLP綜合征、胎兒宮內(nèi)窘迫、腦出血等，增加心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)，威脅到母嬰生命安全。以往有學(xué)者在研究中發(fā)現(xiàn)子癇前期孕婦娩出胎盤后，子癇前期癥狀能夠得到不同程度好轉(zhuǎn)，但母體血管內(nèi)皮損傷癥狀可持續(xù)長達(dá)10年，部分會(huì)發(fā)展為慢性高血壓，因此子癇前期發(fā)病主要源于胎盤[4]。在缺血缺氧狀態(tài)下，滋養(yǎng)細(xì)胞炎性因子釋放會(huì)大量增加，作用于胎盤，使得胎盤缺血損傷加重。

作為損傷相關(guān)模式分子，HMGB1在炎癥及免疫調(diào)節(jié)中有著重要的參與作用，其與傳統(tǒng)白介素、腫瘤壞死因子等早期炎性因子相比，盡管作用時(shí)間晚但能夠持續(xù)較長時(shí)間，參與組織損傷及細(xì)胞死亡，具有促炎作用[5]。文獻(xiàn)報(bào)道，HMGB1是多功能蛋白質(zhì)，細(xì)胞分化、細(xì)胞外信號(hào)傳導(dǎo)及DNA修復(fù)等均有HMGB1的參與，不僅如此其還參與了固有免疫應(yīng)答[6]。近年來，有學(xué)者在研究中發(fā)現(xiàn)胎盤組織中也有HMGB1表達(dá)，隨著胎盤炎癥表達(dá)增加而升高[7]。此次研究檢測了三組孕婦胎盤中HMGB1 mRNA表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)重度組患者HMGB1 mRNA最高，顯著高于對照組與輕度組。正常孕婦HMGB1主要定位于滋養(yǎng)細(xì)胞細(xì)胞核，而合并子癇前期孕婦除滋養(yǎng)細(xì)胞外，在細(xì)胞質(zhì)中也呈現(xiàn)出高表達(dá)，提示HMGB1存在核漿轉(zhuǎn)移，可能是子癇前期的重要病理過程。從本研究結(jié)果看，重度組患者血清HMGB1水平明顯高于輕度組與對照組，考慮母體血清中HMGB1會(huì)隨著胎盤組織HMGB1的升高而升高。HMGBI在外周血中的大量存在，會(huì)對母體心血管系統(tǒng)產(chǎn)生一定的影響，增加血管壁通透性，誘發(fā)血壓升高，加重缺氧缺血癥狀，形成子癇前期。作為HMGB1的特異性受體，RAGE在正常生理狀態(tài)下的蛋白水平及mRNA為低表達(dá)，當(dāng)出現(xiàn)RAGE配體堆積后，會(huì)經(jīng)受體依賴作用使得RAGE上調(diào)，活化細(xì)胞，對配體生物學(xué)作用起到放大作用，與HMGB1結(jié)合后會(huì)對炎癥細(xì)胞產(chǎn)生激活作用，引起組織細(xì)胞受損。NF-KB能夠?qū)Χ喾N炎性因子表達(dá)產(chǎn)生調(diào)控作用，是炎癥反應(yīng)的核心因子，既往研究證實(shí)其能夠?qū)L-2、IL-6、TNF-α等炎癥因子產(chǎn)生調(diào)控作用，通過對炎性細(xì)胞因子的誘導(dǎo)形成組織損傷，在NF-KB通路作用下，形成一個(gè)局部炎癥微環(huán)境[8]。NF-KBP65術(shù)后NF-KB的其中一個(gè)亞基，其激活模式始于P65亞基的激活，因此NF-KB轉(zhuǎn)錄活性可以通過p65表達(dá)得以反映。此次研究研究發(fā)現(xiàn)患者血清及胎盤組織中RAGE、NF-KBP65在重度組表達(dá)最高，子癇前期孕婦血清HMGB1、RAGE與NF-kBp65呈現(xiàn)出明顯的正相關(guān)(r=0.387，P<0.05)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示HMGB1、RAGE通過NF-kB信號(hào)通路參與了子癇前期的病理過程。但由于樣本少、精力有限，關(guān)于子癇前期病因機(jī)制還有待大量研究證實(shí)，后續(xù)研究應(yīng)擴(kuò)大規(guī)模，引入更多因子，深入探究子癇前期發(fā)病機(jī)制，為臨床提供更多可靠的依據(jù)。

綜上所述，HMGB1-RAGE信號(hào)通路與子癇前期發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)，在患者胎盤及血清中呈現(xiàn)高表達(dá)，可將上述指標(biāo)作為診斷、評估子癇前期的可靠指標(biāo)，以便早期診斷、治療，增強(qiáng)患者預(yù)后。