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        轉(zhuǎn)錄因子EZH2和RUNX3在骨巨細胞瘤中的表達及與復發(fā)的關系研究

        2021-10-27 00:36:40李鐵軍文華軍鄭鐵鋼張正孟王繼孟
        河北醫(yī)學 2021年10期
        關鍵詞:研究

        李鐵軍,文華軍,鄭鐵鋼,張 朋,張正孟,王繼孟

        (中國人民解放軍陸軍第八十一集團軍醫(yī)院骨科,河北 張家口 075000)

        骨巨細胞瘤由破骨細胞異常增殖、分化引起,是一種罕見良性腫瘤,但可能發(fā)展為向肺部轉(zhuǎn)移的惡性腫瘤,局部侵襲及復發(fā)率較高[1]。骨巨細胞瘤早期缺乏典型性臨床特征,隨著患者病情發(fā)展,可表現(xiàn)為溶骨性骨破壞,或發(fā)生病理性骨折,臨床治療難度增大,臨床首選治療方法為手術刮除術,但術后局部復發(fā)率較高,約為10%~30%,對患者的生活質(zhì)量造成嚴重影響[2]。zeste基因增強子同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)是一種研究廣泛的轉(zhuǎn)錄阻遏因子,具有高度保守性,可以通過核小體、染色體的修正及與其他轉(zhuǎn)錄因子相互影響起到調(diào)控轉(zhuǎn)錄的作用,EZH2在細胞核中呈現(xiàn)高表達往往導致抑癌基因表達沉默或降低,導致腫瘤持續(xù)惡化[3]。人類RUNT相關轉(zhuǎn)錄因子3(runt-related transcription factor 3,RUNX3)是RUNT家族的重要一員,是一種新型人類腫瘤抑制基因,與T細胞分化、背根神經(jīng)節(jié)的發(fā)育及多種腫瘤密切相關,RUNX3啟動子區(qū)域高頻甲基化及半合子表達缺失時,RUNX3表達受到抑制,促進腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[4]。轉(zhuǎn)錄因子EZH2和RUNX3與骨巨細胞瘤的關系尚不十分清楚,本研究就此展開。

        1 資料與方法

        1.1一般資料:選取本院2013年10月至2018年1月收治的53例骨巨細胞瘤患者為研究對象,患者均接受手術治療,術中收集患者瘤組織以及瘤旁組織(距瘤組織>3cm),年齡23~57歲,平均(38.25±10.11)歲,年齡≤40歲有37例,年齡>40歲有16例;其中男性33例,女性20例;腫瘤直徑1~6cm,平均(3.56±0.73)cm,腫瘤直徑≤3cm有9例,腫瘤直徑>3cm有44例;根據(jù)影像學檢查對腫瘤進行Campanacci分級[5],其中Ⅰ級13例,Ⅱ級25例,Ⅲ級15例;根據(jù)病理學檢查進行分級,Ⅰ級21例,Ⅱ級15例,Ⅲ級17例;根據(jù)是否存在組織浸潤分為,是31例,否22例。納入標準:①經(jīng)病理學確診為骨巨細胞瘤;②初次接受手術治療者;③近3個月未進行放、化療及藥物治療。排除標準:①合并其他惡性腫瘤者;②合并自身免疫系統(tǒng)疾病者;③因局部復發(fā)等原因入院治療者;④臨床資料不完整者。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準,所有研究對象均簽署知情同意書。

        1.2方 法

        1.2.1EZH2、RUNX3表達檢測:標本均為石蠟包埋,4μm厚度連續(xù)切片,采用免疫組織化學法檢測瘤組織及瘤旁組織中EZH2和RUNX3表達,試劑盒均采購自武漢博士德生物工程有限公司。染色結(jié)果由兩位有經(jīng)驗的病理科醫(yī)生采用雙盲法閱片,EZH2、RUNX3主要分布于細胞核內(nèi),鏡下出現(xiàn)棕黃色顆粒的細胞即為陽性細胞,將標本置于高倍視野下(×200),每張切片隨機選取10個視野,每個視野內(nèi)計數(shù)100個腫瘤細胞,根據(jù)細胞陽性率及染色程度的乘積計分。細胞陽性率計分標準:陽性率<5%計為0分,5%≤陽性率<25%計為1分,25%≤陽性率<50%計為2分,50%≤陽性率<75%計為3分;;陽性率≥75%計為4分。細胞染色程度計分標準:無色計為0分,淡黃色計為1分,黃色或棕黃色計為2分,棕褐色計為3分。細胞陽性率計分與染色程度計分的乘積為總分,總分<3分為陰性表達,總分≥3分為陽性表達[6]。

        1.2.2隨訪:以術后第1天作為隨訪起點,采用電話或門診方式進行隨訪,為期36個月,術后12個月內(nèi)每三個月進行一次隨訪,術后24~36個月每六個月隨訪一次,以骨巨細胞瘤患者出現(xiàn)復發(fā)為終點事件,出現(xiàn)終點事件或隨訪期滿則為隨訪終點(無失訪),隨訪期內(nèi)出現(xiàn)復發(fā)者為復發(fā)組,否則為未復發(fā)組。

        1.3統(tǒng)計學方法:采用SPSS22.0統(tǒng)計學軟件處理數(shù)據(jù)。計數(shù)資料以率(%)表示,采用卡方檢驗;采用Spearman進行相關性分析。P<0.05,為差異有統(tǒng)計學意義。

        2 結(jié) 果

        2.1瘤旁組織和瘤組織EZH2、RUNX3陽性表達率比較:與瘤旁組織相比,瘤組織中EZH2陽性表達率較高(P<0.05),RUNX3陽性表達率較低(P<0.05),見表1。免疫組織化學染色結(jié)果顯示,瘤組織EZH2、RUNX3主要分布于細胞核內(nèi),鏡下出現(xiàn)棕黃色顆粒的細胞為陽性細胞,如圖1所示。

        表1 瘤旁組織和瘤組織EZH2 RUNX3陽性表達率比較n(%)

        2.2瘤組織EZH2、RUNX3表達與臨床病理特征的關系:瘤組織EZH2、RUNX3表達與年齡、性別無關(P>0.05),與腫瘤直徑、影像學分級、病理學分級、組織浸潤程度均有關(P<0.05),見表2。

        表2 瘤組織EZH2 RUNX3表達與臨床病理特征關系n(%)

        圖1 瘤組織EZH2、RUNX3表達情況(免疫組織化學染色,200×)

        2.3瘤組織EZH2、RUNX3表達相關性分析:骨巨細胞瘤瘤組織中EZH2、RUNX3表達呈負相關(r=-0.544,P<0.05),見表3。

        表3 瘤組織EZH2 RUNX3表達相關性分析

        2.4EZH2、RUNX3表達與骨巨細胞瘤患者隨訪期內(nèi)復發(fā)關系分析:與未復發(fā)組相比,復發(fā)組EZH2陽性表達率較高(P<0.05),RUNX3陽性表達率較低(P<0.05),見表4。

        表4 未復發(fā)組和復發(fā)組EZH2 RUNX3陽性表達率比較n(%)

        3 討 論

        EZH2是多梳蛋白家族的核心成員,定位于人染色體7q35~7q36區(qū)間上,是重要的核轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子。EZH2可沉默基因表達及靶基因特定區(qū)域的組蛋白甲基化,導致靶基因轉(zhuǎn)錄失活,與食管癌的發(fā)展相關[7]。葉貝華等[8]研究發(fā)現(xiàn),EZH2過表達與鼻咽癌遠處轉(zhuǎn)移及患者預后不良有關。本研究發(fā)現(xiàn),與瘤旁組織相比,骨巨細胞瘤瘤組織EZH2陽性表達率較高,且與腫瘤直徑、影像學分級、病理學分級、組織浸潤程度及預后復發(fā)狀況相關。提示EZH2可能參與骨巨細胞瘤的發(fā)生及病情發(fā)展,或可成為反映患者臨床病情嚴重程度及預后評估的生物學指標,原因可能是高表達的EZH2對腫瘤抑制基因具有抑制作用,從而促進腫瘤的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移等。

        RUNX3是一種抑癌基因,定位于人染色體1p36.1區(qū)域,能夠調(diào)控宮頸癌細胞的生長、遷移和侵襲[9]。孫建莉等[10]研究發(fā)現(xiàn),胃癌組織中RUNX3陽性表達率較癌旁組織低,且與病理分期、浸潤程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關,在胃癌的發(fā)生、發(fā)展中扮演重要角色。喬莉等[11]研究認為,RUNX3基因與骨肉瘤存在必然的聯(lián)系,其中RUNX3啟動子甲基化不僅可抑制抑癌基因功能,同時其與骨肉瘤腫瘤血管也存在信號通路的調(diào)節(jié)關系,可作為治療骨肉瘤的新靶向藥物。本研究中,骨巨細胞瘤瘤組織RUNX3陽性表達率較瘤旁組織低,與患者腫瘤直徑、影像學分級、病理學分級、組織浸潤程度均有關。提示RUNX3可能與骨巨細胞瘤的發(fā)生及病情有關,RUNX3呈現(xiàn)低表達應可能與其啟動子富含的胞嘧啶-磷酸-鳥嘌呤基序過度甲基化有關[12]。同時本研究發(fā)現(xiàn),與未復發(fā)組相比,復發(fā)組RUNX3陽性表達率較低,提示RUNX3可能用于患者預后狀況的評估。

        Lian等[13]研究發(fā)現(xiàn),喉癌患者中EZH2過表達,RUNX3表達缺失,EZH2可通過調(diào)節(jié)RUNX3的表達促進喉癌細胞增殖。本研究Spearman相關分析結(jié)果顯示,骨巨細胞瘤瘤組織中EZH2、RUNX3表達呈負相關,原因可能是EZH2與RUNX3的啟動子結(jié)合,通過催化H3組蛋白第27位賴氨酸三甲基化達到抑制基因表達的作用,使RUNX3低表達或缺失,從而調(diào)控腫瘤細胞的增殖、分化,表現(xiàn)為EZH2對RUNX3的表達存在抑制作用,促進腫瘤細胞增殖[14]。

        綜上所述,骨巨細胞瘤瘤組織中EZH2為高表達,RUNX3為低表達,均與患者腫瘤直徑、影像學分級、病理學分級、組織浸潤程度相關,兩者呈負相關,可能成為骨巨細胞瘤的分子標志物,對病情及預后評估提供參考依據(jù)。本研究也存在一定的局限性,未對EZH2、RUNX3作用機制進行深入研究,在以后的工作中將圍繞此重點展開。

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