王運盛，楊明海，國欣欣，李祥翔，趙素芬，蔣鵬，盧巖，張成林,*

(1.北京動物園，北京 100044； 2.圈養(yǎng)野生動物技術(shù)北京市重點實驗室，北京 100044)

在導(dǎo)致野生動物患病的眾多生物性致病因素中，寄生蟲最為常見，但由于缺乏有效的野生動物寄生蟲診斷標(biāo)準(zhǔn)，導(dǎo)致寄生蟲感染的圈養(yǎng)野生動物缺乏及時有效的治療手段，造成預(yù)后不良，給野生動物的飼養(yǎng)繁育工作增加了極大的困難[1]。在野生動物寄生蟲病的診斷工作中，病理學(xué)診斷的應(yīng)用較為少見，可以作為診斷參考的野生動物寄生蟲病的病理學(xué)資料相對匱乏。本文對北京動物園內(nèi)由于絳蟲感染死亡的烏鴉組織樣本進行病理學(xué)觀察，為今后野生動物寄生蟲病的病理學(xué)診斷提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 病料

游客在北京動物園內(nèi)游覽期間撿到死亡烏鴉一只，送至北京動物園獸醫(yī)院進行死后診斷。

1.2 方法

1.2.1病理樣本采集

烏鴉剖檢后取肝、腸、胰腺組織，迅速投入10%的福爾馬林液，進行病理組織切片前處理。

1.2.2 H.E.染色

石蠟切片分別經(jīng)二甲苯Ⅰ、Ⅱ脫蠟5min，之后浸入無水乙醇/二甲苯(1∶1)混合液中5min，依次經(jīng)無水乙醇Ⅰ、無水乙醇Ⅱ、95%乙醇、85%乙醇、75%乙醇、50%乙醇梯度復(fù)水，下行至雙蒸水中，蘇木精染色 10min，1%鹽酸酒精分色數(shù)秒，水洗返藍15min，再依次通過50%乙醇、75%乙醇、85%乙醇、95%乙醇梯度脫水后，伊紅染色1min，95%乙醇洗滌3次，再經(jīng)無水乙醇Ⅰ、Ⅱ各5min，二甲苯Ⅰ、Ⅱ各透明5min，最后用中性樹膠封片。切片放置于37℃溫箱內(nèi)過夜烘干后鏡檢，光學(xué)顯微鏡下觀察烏鴉組織病理學(xué)變化情況。

2 結(jié)果

2.1 臨床剖檢觀察

肝臟表面被膜增厚；腸道臌脹，腸黏膜水腫充血；腸道中有大量寄生蟲，肉眼觀察寄生蟲呈條帶狀乳白色、扁平，根據(jù)觀察到的寄生蟲顏色、大小、形態(tài)結(jié)構(gòu)等特征，參照《獸醫(yī)寄生蟲學(xué)》[2]中的相關(guān)內(nèi)容進行比對鑒定，確診為禽絳蟲。

2.2 組織病理學(xué)觀察

肝臟：鏡下觀察可見肝被膜高度增生，肝被膜結(jié)締組織水腫，淋巴細(xì)胞浸潤，少量紅細(xì)胞，肝細(xì)胞排列紊亂，肝竇中紅細(xì)胞增多；肝組織瘀血出血現(xiàn)象嚴(yán)重。多數(shù)肝細(xì)胞腫脹，細(xì)胞發(fā)生顆粒變性、壞死(圖1A)。

胰腺：鏡下觀察可見胰腺發(fā)生壞死，壞死的胰腺細(xì)胞正常結(jié)構(gòu)消失，與未發(fā)生壞死的胰腺細(xì)胞形成明顯分界；大多壞死區(qū)域腺泡組織細(xì)胞消失，僅見殘存的細(xì)胞核碎片和多量淋巴細(xì)胞，未壞死區(qū)域大量紅細(xì)胞充斥于胰腺細(xì)胞之間(圖1B)。

腸道：低倍鏡下腸絨毛全部消失，僅殘存腸腺組織；腸壁變薄,腸黏膜下層結(jié)締組織松散，部分淋巴細(xì)胞分散其中(圖1C)。腸內(nèi)容物為大量絳蟲，鏡下可見絳蟲體節(jié)呈片片分節(jié)狀(圖1D、圖1E)；高倍鏡下可見絳蟲節(jié)片內(nèi)的睪丸和卵巢組織(圖1F)。

圖1 烏鴉臟器病理學(xué)觀察

3 診斷

經(jīng)組織病理學(xué)診斷，本病例烏鴉由于在絳蟲的持續(xù)感染下，出現(xiàn)肝被膜水腫增厚、肝細(xì)胞壞死，胰腺壞死，腸絨毛脫落、壞死，最終導(dǎo)致烏鴉死亡。

4 討論

禽絳蟲屬于危害禽類較為嚴(yán)重的一種寄生蟲，在養(yǎng)殖業(yè)，禽絳蟲多見于感染雞，故禽絳蟲病也稱之為雞絳蟲病[3]。禽絳蟲病在養(yǎng)殖業(yè)中呈高傳播率的主要原因為環(huán)境因素(家禽在養(yǎng)殖過程中食入絳蟲卵囊感染的螞蟻、蝸牛、甲蟲等[4])，禽類吞食絳蟲卵囊后，卵囊在禽腸道(主要是十二指腸)內(nèi)發(fā)生溶解，幼蟲脫卵囊后通過吸盤和頂突在小腸壁上附著、生長；造成十二指腸發(fā)生腸黏膜脫落，腸道出血、水腫、腸炎；絳蟲不斷繁殖，搶奪腸道內(nèi)營養(yǎng)，破壞腸道對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，臨床上感染禽類表現(xiàn)出腹瀉、血便；持續(xù)性消瘦、營養(yǎng)不良；此時病禽抵抗力降低，極易感染其他禽類疫病(如禽流感、新城疫、傳染性支氣管炎等)，造成大面積發(fā)病，甚至死亡[2]。

近年來，隨著養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，我國已有多個省、市、自治區(qū)報道過禽絳蟲的傳播、感染，由于絳蟲引起的禽類發(fā)病率和死亡率呈逐年上升趨勢[5]，給養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。在圈養(yǎng)野生動物領(lǐng)域，由于野生動物的特殊性以及各地圈養(yǎng)條件的參差不齊，導(dǎo)致相關(guān)寄生蟲病原檢查工作嚴(yán)重滯后，缺少關(guān)于圈養(yǎng)野生動物絳蟲病的系統(tǒng)性調(diào)查論述，這給該病的防治工作帶來了極大的挑戰(zhàn)。在禽絳蟲病的診斷工作中，更多的還是依靠臨床剖檢診斷、病理學(xué)診斷、糞便蟲卵檢查等方法。由于專業(yè)野生動物病理學(xué)診斷平臺的欠缺，相關(guān)疾病的病理學(xué)診斷可用的鑒別、參考資料幾乎沒有。

因此，在對寄生蟲導(dǎo)致野生動物死亡進行診斷時，對寄生蟲進行快速分類、辨別，并結(jié)合病理診斷結(jié)果確定后續(xù)治療措施，可成為今后野生動物死后診斷的一個發(fā)展方向。