周玉照，張小苗*，陳云明，蔡高萍，李亞琴，譚東，楊靜竹

(1.大理農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院，云南 大理 671003； 2. 臨滄市動物疫病預(yù)防控制中心，云南 臨滄 677000)

豬偽狂犬病(Pseudorabies，PR)是由偽狂犬病毒(Pseudorabiesvirus，PRV)引起的一種急性傳染病，臨床上主要表現(xiàn)為妊娠母豬流產(chǎn)、產(chǎn)死胎、木乃伊胎及弱仔，新生仔豬出現(xiàn)明顯的神經(jīng)癥狀以及腹瀉死亡，育肥豬突然發(fā)熱和呼吸困難等癥狀，是危害養(yǎng)豬業(yè)最嚴(yán)重的傳染病之一[1]。自2011年以來，我國不同地區(qū)豬場相繼出現(xiàn)接種 PRV 基因缺失弱毒疫苗后仍發(fā)生PR的現(xiàn)象，因此，加強PR的監(jiān)測及防控對促進和保障養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展有重要意義[2]。蘇琳琳[3]等對云南省部分地區(qū)規(guī)模豬場豬偽狂犬病進行流行病學(xué)調(diào)查，其結(jié)果顯示PRV gE 抗體陽性率為 13.5%；昆明市PRV gE 抗體陽性率為16.6%；曲靖市PRV gE抗體陽性率為8.2%；德宏州PRV gE抗體陽性率為20.3%；玉溪市PRV gE抗體陽性率為20.7%；紅河州PRV gE抗體陽性率為7.8%；楚雄市PRV gE抗體陽性率為21.8%；大理市的PRV gE 抗體陽性率為6.0%；宣威市PRV gE抗體陽性率為13.5%；西雙版納州PRV gE抗體陽性率為7.5%。說明云南省存在豬偽狂犬病病毒感染，但臨滄市近幾年沒有豬偽狂犬病病毒感染情況的報道。本試驗從臨滄市8個縣(區(qū))采集了豬的血清樣品，進行PRV gE抗體檢測，從而了解臨滄市近4年豬偽狂犬病病毒感染情況，為臨滄市豬偽狂犬病的防控提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 血清樣品

2016—2019年從臨滄市臨翔區(qū)、鳳慶縣、云縣、永德縣、雙江縣、滄源縣、耿馬縣、鎮(zhèn)康縣1 468個豬場中共采集免疫過PRV gE缺失疫苗的6 672份血清樣品，血清樣品置-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆?。見?。

1.2 主要試劑與儀器

豬偽狂犬病病毒gE糖蛋白阻斷ELISA抗體檢測試劑盒，購自北京天之泰生物科技有限公司； 酶標(biāo)儀 (型號為ELx800)，購自美國伯騰儀器有限公司；低速離心機(型號為 LD4-2A)，購自北京醫(yī)用離心機廠；電子恒溫水浴鍋(型號為 HHW21.600)，購自北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司。

1.3 方法

按照試劑盒說明書進行操作，最后于450nm處測定各孔的 OD 值。

1.4 結(jié)果判定

試驗成立的條件是陰性對照孔OD450 nm算術(shù)平均值與陽性對照孔OD450 nm算術(shù)平均值差異應(yīng)大于0.6；且陽性對照孔的抑制百分?jǐn)?shù)(IN%)應(yīng)大于60。

判定標(biāo)準(zhǔn):如果樣品孔的IN%<40.0，則判為陰性；如果40.0 ≤ IN% ≤ 45.0，則判為可疑；如果IN%>45.0，則判為陽性。

表1 2016—2019年臨滄市豬血清樣品采集情況

2 結(jié)果與分析

2.1 臨滄市規(guī)模豬場PRV gE抗體檢測結(jié)果

2016年從臨翔區(qū)、鳳慶縣、云縣、永德縣、耿馬縣8個規(guī)模豬場采集了160份血清樣品進行PRV gE抗體檢測，結(jié)果全為陰性。2017年從臨翔區(qū)、鳳慶縣、云縣、永德縣、耿馬縣8個規(guī)模豬場采集了70份血清樣品進行PRV gE抗體檢測，結(jié)果全為陰性。2018年從臨翔區(qū)、雙江縣、滄源縣、鎮(zhèn)康縣14個規(guī)模豬場采集了270份血清樣品進行PRV gE抗體檢測，結(jié)果檢出6份陽性樣品，其陽性率為2.22%。2019年從臨翔區(qū)、鳳慶縣、云縣、永德縣、滄源縣8個規(guī)模豬場采集了114份血清樣品進行PRV gE抗體檢測，結(jié)果全為陰性。2016—2019年臨滄市規(guī)模豬場PRV gE抗體總陽性率分別為0、0、2.22%、0。其中只有2018年雙江縣和鎮(zhèn)康縣檢測出PRV gE抗體陽性，陽性率分別為5.00%、1.00%。從檢測結(jié)果看，2018年臨滄市規(guī)模豬場存在PRV的感染，特別是雙江縣和鎮(zhèn)康縣。見表2。

表2 2016—2019年臨滄市規(guī)模豬場PRV gE抗體檢測結(jié)果

2.2 臨滄市散養(yǎng)戶豬場PRV gE抗體檢測結(jié)果

2016年從臨滄市8縣(區(qū))的455個散養(yǎng)戶豬場采集了1735份血清樣品進行PRV gE抗體檢測，結(jié)果滄源縣、耿馬縣、鎮(zhèn)康縣抗體陽性率分別為0.23%、0.67%、1.00%，其他縣均為陰性。2017年從臨滄市8縣(區(qū))的382個散養(yǎng)戶豬場采集了1528份血清樣品進行PRV gE抗體檢測，結(jié)果耿馬縣、鎮(zhèn)康縣抗體陽性率分別為8.42%和0.18%，其他縣均為陰性。2018年從臨滄市8縣(區(qū))的423個散養(yǎng)戶豬場采集了1709份血清樣品進行PRV gE抗體檢測，結(jié)果臨翔區(qū)、鳳慶縣、永德縣、滄源縣、耿馬縣、鎮(zhèn)康縣抗體陽性率分別為8.57%、5.49%、3.33%、1.27%、0.60%、3.30%，云縣和雙江縣均為陰性。2019年從臨滄市8縣(區(qū))的369個散養(yǎng)戶豬場采集了1122份血清樣品進行PRV gE抗體檢測，結(jié)果鳳慶縣、永德縣抗體陽性率分別為11.67%、3.89%，其他縣均為陰性。2016—2019年臨滄市散養(yǎng)戶豬場8個縣(區(qū))PRV gE抗體總陽性率分別為4.35%、6.86%、0、2.86%、0、0.39%、1.68%、1.21%，其中以鳳慶縣PRV gE抗體陽性率最高，而云縣和雙江縣PRV gE抗體陽性率均為0(圖1)。2016—2019年臨滄市散養(yǎng)戶豬場各年度PRV gE抗體總陽性率分別為0.58%、1.11%、2.87%、2.50%，其中以2018年P(guān)RV gE抗體陽性率最高。從結(jié)果可以看出臨滄市存在PRV的感染，而且每個縣的散養(yǎng)戶感染差異較大。見表3。

表3 2016—2019年臨滄市散養(yǎng)戶豬場PRV gE抗體檢測結(jié)果

圖1 2016-2019年臨滄市8個縣(區(qū))散養(yǎng)戶豬場PRV gE抗體總陽性率

3 討論與結(jié)論

PRV的感染給我國的生豬養(yǎng)殖生產(chǎn)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟損失。近年來，使用基因缺失疫苗進行免疫，有效地控制了該病的暴發(fā)，但不能夠控制該病的零星發(fā)生[4]。2011—2015 年我國PR的流行有持續(xù)上升的趨勢，樣品陽性率由 13.6%上升至41.3%，豬場陽性率由41.7%上升至78.1%[5]；楊孟鴻對贛州地區(qū)規(guī)?；i場豬偽狂犬病血清學(xué)流行病學(xué)調(diào)查，結(jié)果在 2014—2015 年P(guān)RV野毒感染率為 27.5%；在 2015—2016 年P(guān)RV野毒感染率為 64.8%[6]；何淑芝[7]等對廣東省規(guī)模化豬場偽狂犬病抗體檢測分析，結(jié)果顯示PRV gE 抗體陽性率為4.65%；何文峰對江蘇省豬偽狂犬病野毒感染的抗體調(diào)查，結(jié)果顯示PRV gE 抗體陽性率為37.8%[8]；張利平對河南省部分種豬場豬偽狂犬病血清學(xué)調(diào)查，結(jié)果顯示PRV gE 抗體總陽性率為 12.24%[9]；胡玲玲對貴州省豬偽狂犬病的分子流行病學(xué)調(diào)查及變異分析，結(jié)果顯示PRV gE 抗體陽性率為1.89%[10]；2019年李圣元對福建省龍巖市部分地區(qū)豬偽狂犬病野毒感染血清學(xué)調(diào)查，結(jié)果顯示樣品PRV gE 抗體總陽性率為 30.41%[11]；寧慧波[12]等對我國規(guī)?；i場偽狂犬病毒感染及傳播風(fēng)險因素調(diào)查，結(jié)果顯示華北、華東、華中地區(qū)的豬場陽性率、樣品陽性率相對較高；華南及西南地區(qū)的陽性率相對較低。

本試驗通過對2016—2019年臨滄市豬偽狂犬病病毒gE抗體進行檢測，結(jié)果表明，臨滄市存在豬偽狂犬病野毒的感染，2018年臨滄市規(guī)模豬場存在PRV的感染，2019年P(guān)RV gE 抗體全為陰性；2016—2019年臨滄市散養(yǎng)戶豬場每年都存在豬偽狂犬病野毒的感染。

研究表明，豬偽狂犬病毒新分離毒株存在變異現(xiàn)象且變異株的致病性有所增強，現(xiàn)有的 PRV基因缺失疫苗難以對新的流行毒株提供安全有效的保護，導(dǎo)致無法有效阻止 PRV 在豬群之間乃至地區(qū)之間的傳播循環(huán)，這很有可能是偽狂犬病野毒感染率居高不下的一個重要原因[13]。目前，加強豬場生物安全措施以及科學(xué)使用疫苗免疫接種仍是防控PR的主要方法。所以豬場應(yīng)當(dāng)選擇場內(nèi)流行或者區(qū)域內(nèi)流行的毒株作為 PRV 疫苗株，制定科學(xué)合理的免疫程序，定期開展 PRV gB 和PRV gE 抗體監(jiān)測及風(fēng)險評估，得到原始的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)資料，準(zhǔn)確分析豬場的免疫現(xiàn)狀，科學(xué)制定免疫方案，把控好每一個免疫環(huán)節(jié)，選擇質(zhì)量優(yōu)質(zhì)的疫苗，提升中和抗體水平，提高免疫效果[14]。同時定期開展血清抗體監(jiān)測，制定合理的免疫程序，及時淘汰PRV gE抗體陽性豬，確保疫苗的免疫保護效果，最終達到凈化目的[15]。臨滄市存在豬偽狂犬病野毒的感染，特別是散養(yǎng)戶豬場每年都存在豬偽狂犬病野毒的感染，應(yīng)加強對散養(yǎng)戶的疫苗免疫，及時淘汰PRV gE抗體陽性豬。