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        佐劑用于大鼠外周神經(jīng)阻滯的安全性研究*

        2021-10-23 08:02:44曹驥吳凡鐘蕓羅和國
        關(guān)鍵詞:佐劑咪定美托

        曹驥 吳凡 鐘蕓 羅和國#

        (1江西省南昌市第一醫(yī)院 南昌 330008;2廣東省深圳市婦幼保健院 深圳 518028)

        精準(zhǔn)麻醉的外周神經(jīng)阻滯在臨床中應(yīng)用越來越廣泛[1]。外周神經(jīng)阻滯中可通過加入腎上腺素、右美托咪定等佐劑增強(qiáng)阻滯效果和延長阻滯時(shí)間,但這些佐劑的應(yīng)用無明確標(biāo)準(zhǔn),對(duì)神經(jīng)等造成的影響情況不明,用藥安全性不確定[2~4]。為明確佐劑臨床應(yīng)用安全性,本研究通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)探討佐劑用于大鼠外周神經(jīng)阻滯的神經(jīng)毒性或神經(jīng)保護(hù)作用,為佐劑的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

        1 動(dòng)物與方法

        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物以坐骨神經(jīng)功能正常的84只成年雄性SD大鼠為研究對(duì)象,大鼠體質(zhì)量220~250 g(購自北京華阜康生物科技有限公司)。大鼠購買后均適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)1周后進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究,采用標(biāo)準(zhǔn)飼料和純凈水喂養(yǎng),12 h晝夜交替,每3天進(jìn)行1次墊料更換,保持飼養(yǎng)環(huán)境安靜舒適,溫度控制在25~27℃,自由攝食飲水。

        1.2 分組對(duì)84只SD大鼠進(jìn)行編號(hào),通過隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照羅哌卡因組(R組)、咪達(dá)唑侖組(R+M組)、右美托咪定組(R+D1組)、地塞米松組(R+D2組)、腎上腺素組(R+A組)、芬太尼組(R+F組)、碳酸氫鈉組(R+S組)7組,每組12只。舒適環(huán)境下飼養(yǎng)3 d,不限制飲食,12 h晝夜交替。

        1.3 藥物暴露各組大鼠均于坐骨神經(jīng)分叉處注射相應(yīng)藥物,建立局部麻醉藥加佐劑急性暴露模型。采用60 mg/kg的4%戊巴比妥鈉進(jìn)行腹腔注射麻醉,麻醉后固定大鼠下肢,常規(guī)進(jìn)行消毒,通過直剪從踝關(guān)節(jié)處始至臀部縱向剪開小腿及大腿皮膚,暴露肌肉,以手指探查大腿部位股骨位置,以之為骨性標(biāo)志,剪開股骨淺層的皮膚,注意切口位置在股骨于體表投影位置上。打開皮膚可見一條明顯白線,此為肌肉間的筋膜,筋膜剪開一個(gè)小口,血管鉗沿白線方向進(jìn)行鈍性分離,暴露兩肌肉之間的坐骨神經(jīng)干,以坐骨神經(jīng)分叉處為注射點(diǎn),通過29 G胰島素注射針頭于筋膜下神經(jīng)周圍注射0.2 ml的各組藥物混合液(根據(jù)大鼠分組情況進(jìn)行注射,各組藥物濃度見表1)。藥物混合液注射完畢后采用10-0 Nylon microsuture線進(jìn)行注射處標(biāo)記,采用6-0 Vicryl縫線縫合肌肉并通過4-0 Nylon縫線閉合皮膚,完成藥物暴露操作。

        表1 各組藥物濃度

        1.4 坐骨神經(jīng)元病理檢查分別在藥物暴露后12 h、24 h、72 h時(shí)各取4只大鼠,常規(guī)麻醉后切開組織暴露已標(biāo)記的坐骨神經(jīng),小心剝離并剪斷坐骨神經(jīng),放在玻璃板上,每組每個(gè)時(shí)間點(diǎn)均取4個(gè)標(biāo)本,取材完成后,用過量戊巴比妥鈉處死。將獲取的標(biāo)本進(jìn)行切片制備,通過玻璃分針纏脫脂棉沾樂氏液將神經(jīng)干的纖維膜性組織擦去,神經(jīng)干放置在培養(yǎng)皿內(nèi)的濾紙上,濾紙上浸樂氏液以保持神經(jīng)濕潤,0.5 h后通過4%多聚甲醛固定液在4℃環(huán)境中固定4 h,行OCT包埋,切制為5μm厚度切片,每個(gè)標(biāo)本每個(gè)取樣時(shí)間段取3張切片。切片常規(guī)進(jìn)行蘇木精-伊紅染色法(HE染色)操作,二甲苯處理15 min后行梯度乙醇(100%、100%、95%、80%,各5 min)處理,蘇木精液染色5 min,0.5%伊紅液染色3 min,行梯度乙醇(80%30 s、95%1 min、95%1 min、100%3 min、100%3 min)處理,二甲苯處理3 min,中性樹膠封固后,光鏡下進(jìn)行坐骨神經(jīng)元病理觀察。

        1.5 觀察指標(biāo)觀察坐骨神經(jīng)元病理學(xué)結(jié)果并進(jìn)行病理學(xué)評(píng)分,病理學(xué)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[5]:正常神經(jīng)元結(jié)構(gòu)為0分;神經(jīng)元或軸突腫脹和/或周圍間隙增加為1分;神經(jīng)元或軸突腫脹及核固縮為2分;神經(jīng)元廣泛壞死及溶解甚至海綿狀空泡結(jié)構(gòu)為3分。異常神經(jīng)元標(biāo)準(zhǔn)為病理學(xué)評(píng)分≥1分。藥物暴露后12 h、24 h、72 h取下的任意標(biāo)本切片出現(xiàn)神經(jīng)元異常時(shí)該大鼠均記為神經(jīng)元異常,計(jì)算比較各組神經(jīng)元異常率,神經(jīng)元異常率(%)=異常神經(jīng)元大鼠數(shù)/大鼠總數(shù)×100%。

        1.6 數(shù)據(jù)分析方法采用SPSS17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料采用%表示,采用Fisher確切概率檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較。P<0.05時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        與R組比較,R+D1組和R+D2組神經(jīng)元異常率更低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.001、0.009);R組與R+M組、R+A組、R+F組和R+S組神經(jīng)元異常率比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);R+D1組神經(jīng)元異常率低于R+M組、R+A組、R+F組和R+S組(P=0.005、0.005、0.005、0.014);R+D2組神經(jīng)元異常率低于R+M組、R+A組、R+F組和R+S組(P=0.009、0.009、0.009、0.025);但R+D1組和R+D2組神經(jīng)元異常率比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);R+M組、R+A組、R+F組和R+S組神經(jīng)元異常率,比較,差異亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2、表3。

        表2 藥物暴露后12 h、24 h、72 h各組神經(jīng)元病理學(xué)評(píng)分比較(例)

        表3 藥物暴露后12 h、24 h、72 h各組神經(jīng)元異常情況比較

        3 討論

        近年來國家醫(yī)療衛(wèi)生體制不斷改革,醫(yī)療衛(wèi)生和醫(yī)療質(zhì)量需求急劇增加,醫(yī)療成本降低需求迫切,加速康復(fù)外科理念應(yīng)運(yùn)而生[6]。加速康復(fù)外科理念的實(shí)現(xiàn)離不開精準(zhǔn)麻醉,外周神經(jīng)阻滯屬于精準(zhǔn)麻醉的范疇,其應(yīng)用由于門診手術(shù)的普及以及臨床安全需要而越來越廣泛[7~8]。在外周神經(jīng)阻滯中可通過加入適當(dāng)佐劑來延長阻滯時(shí)間和增強(qiáng)阻滯效果,局麻藥配伍地塞米松、腎上腺素、右美托咪定、阿片類藥物、碳酸氫鈉、苯二氮 類藥物等佐劑目前已然成為一種局部麻醉用藥趨勢(shì)[9~10]。然而藥物的毒副作用對(duì)其應(yīng)用具有較大影響,而這些佐劑藥物對(duì)心腦血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)等的毒性作用尚不明確。目前各種佐劑的添加應(yīng)用較為隨意,甚至有出現(xiàn)超說明書使用的情況,明確佐劑用于配伍局麻藥在外周神經(jīng)阻滯中應(yīng)用安全性從而指導(dǎo)佐劑的安全應(yīng)用迫在眉睫。

        為明確不同佐劑應(yīng)用于外周神經(jīng)阻滯的安全性,本研究以大鼠為研究對(duì)象,建立局部麻醉藥加佐劑急性暴露模型,設(shè)立不同佐劑藥物配伍方案。在藥物暴露后12 h、24 h、72 h時(shí)取坐骨神經(jīng)進(jìn)行坐骨神經(jīng)元病理學(xué)檢查,觀察坐骨神經(jīng)元是否出現(xiàn)異常,從而確定不同佐劑用于大鼠外周神經(jīng)阻滯中神經(jīng)毒性或神經(jīng)保護(hù)作用。本研究結(jié)果顯示,羅哌卡因外周神經(jīng)阻滯中,添加咪達(dá)唑侖、右美托咪定、地塞米松、腎上腺素、芬太尼、碳酸氫鈉等不同佐劑藥物均未出現(xiàn)神經(jīng)元異常率增加情況,初步認(rèn)為佐劑用于大鼠外周神經(jīng)阻滯無神經(jīng)毒性作用,而添加右美托咪定、地塞米松大鼠的神經(jīng)元異常率均有降低,因此在羅哌卡因外周神經(jīng)阻滯中添加右美托咪定、地塞米松可能對(duì)神經(jīng)發(fā)揮保護(hù)作用。這與周斌等[11]的右美托咪定抗藥物神經(jīng)毒性損傷的研究結(jié)論一致,與解建等[12]地塞米松可以預(yù)防麻醉藥物神經(jīng)毒性損傷的研究結(jié)論總體一致,但與鄒振宇等[13]右美托咪定硬膜外給藥對(duì)兔脊髓和脊神經(jīng)存在劑量相關(guān)神經(jīng)毒性損傷的研究結(jié)論不一致,這可能與研究用藥劑量、用藥方式、用藥對(duì)象等不一致有關(guān)。

        綜上所述,大鼠外周神經(jīng)阻滯中佐劑藥物的應(yīng)用無明顯神經(jīng)毒性作用,而右美托咪定和地塞米松具有神經(jīng)保護(hù)作用。外周神經(jīng)阻滯中可根據(jù)具體情況根據(jù)說明書進(jìn)行佐劑藥物的應(yīng)用,右美托咪定、地塞米松可以作為首選佐劑藥物以減少神經(jīng)毒性損傷的發(fā)生。

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