王海蘋，李懷平，單玉剛*，李 鑫，張文高

(1.金訶藏藥(山東)健康產(chǎn)業(yè)有限公司，山東 濟(jì)南 250101；2.山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東 濟(jì)南 250355)

香囊外治療法，也叫香佩療法，屬于中醫(yī)學(xué)“衣冠療法”，它利用藥材芳香發(fā)揮避疫祛穢、調(diào)養(yǎng)正氣、治未病作用。《山海經(jīng)》記載薰草“佩之可以已癘”[1]，清代吳尚先《理瀹駢文》記載:“辟瘟囊方、抗癆丸佩囊等，辟瘟囊以羌活、大黃、柴胡、蒼術(shù)、細(xì)辛、吳茱萸各一錢，共研細(xì)末，絳囊盛之，佩于胸前，用于四時(shí)感冒，可避瘟疫?！贬槍?duì)2020年新型冠狀病毒肺炎疫情，張文高教授分析新冠肺炎患者病因病機(jī)，參考藏醫(yī)《四部醫(yī)典》《理瀹駢文》《清宮外治醫(yī)方精華》[2～3]，結(jié)合個(gè)人臨床經(jīng)驗(yàn)，精選蒼術(shù)、艾葉、藿香、紅景天、檀香、防風(fēng)等20味藥材研制出避疫祛穢藏藥香囊。本文開展避疫祛穢藏藥香囊制備工藝及體外空氣殺菌研究，旨在為香囊配方工藝及其臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1 避疫祛穢藏藥香囊制備工藝研究

1.1 儀器與試藥

1.1.1 儀 器

日本島津LC-20AT液相色譜儀,SPD-20A紫外檢測(cè)器,KQ5200B型超聲儀。烘箱、電子天平、電熱套、粉碎機(jī)。

1.1.2 試 藥

樣品：避疫祛穢藏藥香囊配方藥材；丁香酚對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110725-201716)；甲醇為色譜純；水為超純水；其他試劑均為分析純。

1.1.3 檢測(cè)方法

1.1.3.1 丁香酚含量測(cè)定

高效液相色譜條件[4]以甲醇-水(55∶45)為流動(dòng)相，以280 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，色譜柱為Agilent ZORBAX SB-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)，柱溫35 ℃，進(jìn)樣量10 μL。

1.1.3.2 溶液制備

對(duì)照品溶液制備：精密稱取丁香酚對(duì)照品適量，置于棕色容量瓶中，使用70 %乙醇溶解并稀釋至刻度，制成濃度約為0.5 mg/mL的溶液。

供試品溶液制備：精密稱取本品0.5 g，置于50 mL棕色容量瓶中，加入40 mL 70 %乙醇溶液，密封，超聲處理20 min。超聲完畢后，放冷，用70 %乙醇定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品測(cè)定溶液。

1.1.3.3 揮發(fā)油含量測(cè)定[5]

檢驗(yàn)依據(jù)：《中國(guó)藥典》2015版四部通則2204。

實(shí)驗(yàn)方法：精密稱取香囊內(nèi)容物50.0 g，加入10倍量水，加熱至微沸后固定電壓在150 V持續(xù)加熱5 h，靜置后讀取揮發(fā)油的量，并進(jìn)行計(jì)算。

1.2 不同粉碎目數(shù)的篩選

按照香囊配方稱取藥材共計(jì)500 g，此為一份，共配制三份，分別粉碎，第一份粉碎過20目篩，第二份粉碎過30目篩，第三份粉碎過40目篩，各自混合均勻，精確稱取15 g裝入香囊布袋中，將上述制備好的香囊放置于100 m3的空間內(nèi)，分別在0 d、3 d、7 d測(cè)定藥粉中揮發(fā)油含量(%)以及丁香酚含量(%)。根據(jù)含量測(cè)定結(jié)果，篩選最佳過篩目數(shù)。見表1。

表1 不同粉碎目篩考察

由表1數(shù)據(jù)可知，20目粉碎粒徑較大，藥材中的揮發(fā)性成分散出慢，不能在理想時(shí)間內(nèi)達(dá)到較好的效果。而40目粉碎粒徑較小，藥材中揮發(fā)性有效成散發(fā)出快，效果與30目粉碎后效果差距不大，但會(huì)縮短使用時(shí)間，造成藥材不必要的浪費(fèi)，因此，選擇粉碎30目過篩。

1.3 粉碎溫度對(duì)藥材的影響

香囊主要以藥材揮發(fā)油成分發(fā)揮藥效作用，而粉碎過程中會(huì)產(chǎn)生高溫，產(chǎn)生熱量，進(jìn)而造成揮發(fā)性成分和不耐熱成分的損失，為保證藥材中揮發(fā)性成分最大限度地保留，我們對(duì)粉碎溫度進(jìn)行考察，按照配方比例稱取500 g藥材，共取四份：第一份控制粉碎溫度為50 ℃，粉碎后過30目篩，混合均勻，測(cè)定揮發(fā)油及丁香酚含量；第二份控制粉碎溫度為60 ℃，粉碎后過30目篩，混合均勻，測(cè)定揮發(fā)油及丁香酚含量；第三份控制粉碎溫度為70 ℃，粉碎后過30目篩，混合均勻，測(cè)定揮發(fā)油及丁香酚含量；第四份控制粉碎溫度為80 ℃，粉碎后過30目篩，混合均勻，測(cè)定揮發(fā)油及丁香酚含量。見表2。

表2 不同粉碎溫度考察

表2數(shù)據(jù)表明，隨著粉碎溫度的升高，藥材中總揮發(fā)油量及丁香酚含量在逐漸降低，50 ℃與60 ℃粉碎時(shí)，揮發(fā)油總量以及丁香酚含量無顯著性差異。因此，為了保證香囊效果，綜合考慮確定藥材在粉碎過程中溫度不能高于60 ℃。

1.4 避疫祛穢藏藥香囊穩(wěn)定性研究

1.4.1 放置條件

選擇2個(gè)格局相同的100 m3房間，分別放置已經(jīng)包裝好的香囊，其中一個(gè)房間保持密閉，另外一個(gè)房間開窗通風(fēng)，按照設(shè)定放置時(shí)間點(diǎn)分別測(cè)定丁香酚含量及總揮發(fā)油含量指標(biāo)，根據(jù)測(cè)定結(jié)果計(jì)算各指標(biāo)成分的變化率。變化率(%)=(0天測(cè)試數(shù)值—取樣天測(cè)定數(shù)值)×100 %。

1.4.2 放置時(shí)間

分別放置0、3、7、14、21、28 d。

1.4.3 檢測(cè)項(xiàng)目

丁香酚含量、總揮發(fā)油量。

1.4.4 檢測(cè)結(jié)果(見表3～表4)

表3 密閉空間穩(wěn)定性測(cè)定結(jié)果

表4 開放式空間穩(wěn)定性測(cè)定結(jié)果

表3、表4數(shù)據(jù)表明，①香囊藥包中揮發(fā)油成分和丁香酚成分隨時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸釋放；放置2周時(shí)丁香酚揮發(fā)30 %左右，總揮發(fā)油揮發(fā)70 %左右；放置4周時(shí)間丁香酚揮發(fā)40 %～50 %，總揮發(fā)油量揮發(fā)90 %左右。②開放式的空間里香囊揮發(fā)油以及丁香酚揮發(fā)速度明顯高于封閉式空間，這說明空氣流通能夠加速香囊中揮發(fā)油揮發(fā)速度。綜合上述分析，建議香囊藥袋使用2周～4周后進(jìn)行更換。

2 避疫祛穢藏藥香囊體外殺菌實(shí)驗(yàn)研究

現(xiàn)代研究顯示：香囊配方所含揮發(fā)油等活性成分可以抑制細(xì)菌病毒，改善鼻腔呼吸道黏膜功能，增強(qiáng)機(jī)體免疫力，改善睡眠，增強(qiáng)食欲，進(jìn)而起到增強(qiáng)身體抵抗力、預(yù)防疾病作用[6～9]。為驗(yàn)證香囊殺菌效果，本文開展避疫祛穢藏藥香囊對(duì)空氣細(xì)菌的體外殺菌實(shí)驗(yàn)研究。

2.1 材 料

2.1.1 樣 品

避疫祛穢藏藥香囊藥包，生產(chǎn)日期2020年3月11日，金訶藏藥(山東)健康產(chǎn)業(yè)有限公司。

2.1.2 培養(yǎng)基

營(yíng)養(yǎng)瓊脂，壓力蒸汽滅菌后備用。

2.1.3 儀 器

電熱恒溫培養(yǎng)箱，六級(jí)空氣微生物采樣器。

2.1.4 實(shí)驗(yàn)場(chǎng)所

30 m3密閉空間。

2.2 方 法

2.2.1 檢驗(yàn)依據(jù)

WS/T648-2019《空氣消毒機(jī)通用衛(wèi)生要求》附錄B。

2.2.2 實(shí)驗(yàn)方法

將避疫祛穢藏藥香囊若干置于30 m3測(cè)試房間中，將采樣器放于房間中心，離墻壁>0.5 m,離地面1.0 m。采樣(流量28.3l/min)5 min，為實(shí)驗(yàn)前樣本，打開香囊，放置至規(guī)定時(shí)間后進(jìn)行采樣，為實(shí)驗(yàn)后樣本。取樣后，按照WS/T648-2019《空氣消毒機(jī)通用衛(wèi)生要求》附錄B項(xiàng)下微生物培養(yǎng)方法進(jìn)行培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后對(duì)細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)，統(tǒng)計(jì)分析。

2.3 結(jié) 果

所檢避疫祛穢藏藥香囊，2個(gè)香囊對(duì)體積約30 m3市內(nèi)空氣分別作用8 h、24 h、48 h，自然菌消亡率分別為98.48 %、99.58 %、>99.99 %；4個(gè)香囊對(duì)體積約30 m3室內(nèi)空氣分別作用2 h、4 h、8 h，自然菌消亡率分別為76.52 %、98.09 %、99.74 %。見表5。

表5 避疫祛穢藏藥香囊空氣消毒現(xiàn)場(chǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

由表5數(shù)據(jù)結(jié)果可知，避疫祛穢藏藥香囊對(duì)空氣自然菌有抑制和殺滅作用，在48 h內(nèi)，隨著時(shí)間延長(zhǎng)，香囊配方中揮發(fā)性成分逐漸減少，實(shí)驗(yàn)空間內(nèi)自然菌逐漸減少，自然菌消亡率接近100 %，表明避疫祛穢藏藥香囊空氣殺菌效果顯著。

3 討 論

香囊防御疾病，歷史悠久，療效滿意。但是傳統(tǒng)香囊多為手工制作，產(chǎn)量小，質(zhì)量參差不齊。前期研究發(fā)現(xiàn)，藥材粉碎目數(shù)以及粉碎溫度對(duì)配方中的揮發(fā)油成分有較大影響，粒度太大，揮發(fā)性成分不宜很快散出，粒度太小則揮發(fā)油散發(fā)較快，影響使用周期。為確保香囊活性成分作用效果，本文以總揮發(fā)油及丁香酚含量為指標(biāo)，開展工藝優(yōu)化研究，確定最佳工藝參數(shù)。在穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)香囊揮發(fā)性成分因空間通風(fēng)，數(shù)據(jù)有一定差異，密閉空間揮發(fā)性相對(duì)較慢，當(dāng)香囊放置4周以后，香囊活性成分揮發(fā)90 %左右，綜合考慮，避疫祛穢藏藥香囊藥包建議2周～4周更換1次。

體外殺菌實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，避疫祛穢藏藥香囊對(duì)空氣中自然細(xì)菌具有很好的殺菌作用，將配方制作成香囊后便于攜帶，可以懸掛于臥室、客廳、辦公室、車內(nèi)，改善周圍空氣。避疫祛穢藏藥香囊，氣味自然清新、芳香怡人，具有醒脾化濕作用，長(zhǎng)期使用可舒緩情緒，改善食欲和睡眠，增強(qiáng)免疫能力，扶正祛邪，提高機(jī)體抵抗能力。