潘 燕,陳奕瑾,劉國友,李東霞,高 明,弓曉杰
( 1.大連大學(xué)醫(yī)學(xué)院,大連116622;2.大連民族大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,大連116600;3.大連富生制藥有限公司,大連116600)
槐花是豆科植物槐(Sophora japonica L.)的花。 味苦,性微寒。歸肝、大腸經(jīng)[1]?;被ㄗ鳛樗幨硟捎玫乃幉?,在民間使用歷史悠久,大連地區(qū)盛產(chǎn)槐花,當(dāng)?shù)赜姓∫吧被▉砑庸な秤玫牧?xí)慣?;被ú粌H能涼血止血,清肝瀉火,還具有抗炎、抗病毒及真菌、阻滯心傳導(dǎo)系統(tǒng)、降血脂、抗腫瘤、致突變、凝血止血、解痙等藥理作用,主要用于治療痔瘡及并發(fā)癥,治療銀屑病、皮膚炎癥,還可用于舒張血管,治療燒傷和慢性潰瘍等。
目前為止關(guān)于槐花的藥理作用研究較多, 但研究營養(yǎng)成分和食用價值的較少。 無機(jī)元素為食物的七大營養(yǎng)素之一,槐花中含有大量的無機(jī)元素,這些無機(jī)元素雖然在人體內(nèi)的含量極微, 但對生理機(jī)能起著至關(guān)重要的作用,這些無機(jī)元素與槐花涼血止血、清肝瀉火的功能也緊密相關(guān)。 所以有必要對大連地區(qū)野生槐花中的無機(jī)元素進(jìn)行研究。
1.1 儀器
AA6100 原子吸收分光光度計 (天美科學(xué)儀器有限公司);WHG-630A 全自動流動注射氫化物發(fā)生器(北京瀚時儀器有限公司);WOS-20 無油空氣壓縮機(jī)(天津天偉宏業(yè)儀器設(shè)備有限公司)。
1.2 試劑與試藥
K、Na、Zn、Mg、Fe、Mn、Cu、Ca、Hg、As 原始濃度為1000g/mL 的單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(國家有色金屬及電子材料分析測試中心);硝酸、高氯酸、硫酸、鹽酸(優(yōu)級純,天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)。
1.3 藥材
槐花2018 年5 月采自遼寧省大連市開發(fā)區(qū)大黑山,經(jīng)大連大學(xué)醫(yī)學(xué)院中藥學(xué)系高松教授鑒定。
2.1 藥材處理
將采摘的槐花干燥至恒重,粉碎后過100 目篩,裝在密封袋中,并在干燥器中保存?zhèn)溆谩?/p>
2.2 供試品溶液制備
2.2.1 火焰法供試品溶液1 的制備
準(zhǔn)確稱取0.5000g 樣品置于125mL 縮口燒杯中,加入10.0mLHNO3和2.0mLHCLO4小心搖動, 直到樣品被混酸浸沒,靜置12h,在萬用爐上小心消化,觀察至棕色煙冒盡,繼續(xù)加熱至冒白煙,消化液呈現(xiàn)無色透明或淡黃色近干為止,冷卻至室溫后,轉(zhuǎn)入50mL 容量瓶中, 用0.5%HNO3洗滌消化3 次, 洗滌液并入容量瓶,用0.5%HNO3定容得待測樣品溶液,容量瓶用封口膜密封。 (測定K、Na、Zn、Mg、Fe、Mn、Cu 和Ca 元素)。
2.2.2 氫化物發(fā)生法測定As 元素供試品溶液2 制備
精密吸取2.2.1 中所得待測樣品溶液20mL, 置于50mL 容量瓶中,加入25%的碘化鉀溶液2mL,搖勻,再加入10%的抗壞血酸溶液2mL,搖勻,用10%的鹽酸溶液定容,搖勻,密封,放置于80℃水浴鍋中加熱3分鐘,取出,冷卻至室溫,得As 元素待測樣品溶液。
2.2.3 氫化物發(fā)生法測定Hg 元素供試品溶液3 制備
精密量取2.2.1 中所得待測樣品液10mL, 置于50mL 容量瓶中,加入20%的硫酸溶液10mL,搖勻,再加入5%的高錳酸鉀溶液1mL,再滴加5%的鹽酸羥胺溶液直至紫紅色剛好消失,用去離子水定容,得Hg 元素待測樣品溶液。
2.3 標(biāo)準(zhǔn)系列溶液制備
2.3.1 K、Na、Zn、Mg、Fe、Ca 標(biāo)準(zhǔn)系列溶液制備
分別移取2.50mL 的K、Na、Zn、Mg、Fe、Ca 元素的標(biāo)準(zhǔn)溶液于50mL 容量瓶中, 用0.5%的硝酸溶液定容,配置成質(zhì)量濃度為50μg/mL 的元素儲備液。
2.3.2 Mn、Cu 標(biāo)準(zhǔn)系列溶液制備
分別吸取0.50mL 的Mn、Cu 元素的標(biāo)準(zhǔn)溶液于50mL 容量瓶中,用0.5%的硝酸溶液定容,配置成濃度為10μg/mL 的元素儲備液。
2.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法
準(zhǔn)確吸取元素儲備液各適量, 用去離子水定容至50mL 容量瓶中,配制成相應(yīng)的濃度。8 種元素標(biāo)準(zhǔn)系列設(shè)置見表1。
表1 元素標(biāo)準(zhǔn)系列設(shè)置(μg/mL)
2.3.4 As 標(biāo)準(zhǔn)系列溶液制備
取5mL1000μg/mL As 標(biāo)準(zhǔn)液于50mL 容量瓶中,去離子水定容,其濃度為100μg/mL,精確量取該溶液1mL 于125mL 縮口燒杯中, 加入10mL 去離子水和5mL 濃鹽酸。 加入0.4g 碘化鉀,放置電爐上加熱呈微沸狀態(tài),冷卻至室溫,加入0.2g 抗壞血酸,溶液由黃色轉(zhuǎn)為無色, 將之轉(zhuǎn)移至50mL 茶色容量瓶中定容,得2μg/mL As3+的標(biāo)準(zhǔn)母液。 準(zhǔn)備4 個50mL 的容量瓶,分別加入0.1、0.2、0.3、0.4mL 的標(biāo)準(zhǔn)母液,用已配制好的10%的鹽酸定容至50mL。 得到分別為4、8、12、16ng/mL 的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。
2.3.5 Hg 標(biāo)準(zhǔn)系列溶液制備
取Hg 標(biāo)準(zhǔn)液各適量, 用4%的硫酸溶液定容,分別配制得到40、80、120、160ng/mL 的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。
2.4 還原劑溶液與氫化物發(fā)生法載液的制備
2.4.1 1%HCl 載液的制備
精密量取1mL 的濃鹽酸, 用去離子水定容至100mL 容量瓶中,制得1%的鹽酸載液。
2.4.2 As 還原劑溶液制備
精確稱量1.0000g 硼氫化鉀放至塑料瓶中, 加入0.2g 氫氧化鈉,用去離子水定容至100mL,封口膜密封保存。
2.4.3 Hg 還原劑溶液制備
精確稱量1.0000g 硼氫化鉀放至塑料瓶中, 加入0.1g 氫氧化鈉,用去離子水定容至100mL,封口膜密封保存。
2.5 儀器工作條件
各元素測定儀器工作條件見表2、表3。
表2 火焰原子吸收分光光度法測定儀器工作條件
表3 氫化物發(fā)生-原子吸收分光光度法測定儀器工作條件
2.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線
按照表1 所示的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度由低到高進(jìn)樣,記錄元素的吸光度值,繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線,其回歸方程與相關(guān)系數(shù)、檢出限見表4。
表4 各元素的線性方程、相關(guān)系數(shù)和檢出限
2.7 方法學(xué)考察
為了考察方法的可靠性,作了精密度實(shí)驗(yàn)、重復(fù)性實(shí)驗(yàn)、加樣回收率實(shí)驗(yàn)。 結(jié)果見表5 (測定次數(shù)n=5) 。
表5 各元素的精密度、重復(fù)性及加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果
3.1 測定結(jié)果
槐花中各無機(jī)元素的含量測定結(jié)果見表6。
表6 槐花藥材中無機(jī)元素測定結(jié)果(μg/g)
3.2 研究結(jié)果顯示, 大連野生槐花富含有益于人體健康的無機(jī)元素。 K、Na、Mg、Fe、Mn、Cu、Ca、Zn 的含量分別為1720.1μg/g、247,7μg/g、777.8μg/g、159.8μg/g、18μg/g、4.4μg/g、882.8μg/g、0.6μg/g。 其中K、Ca、Mg 含量最高,其次是Na、Fe、Mn、Cu、Zn。 而Hg、As 兩種有害重金屬未檢出,說明大連野生槐花不存在重金屬污染的問題。
3.3 槐花富含對人體有益的無機(jī)元素, 食用后有利于補(bǔ)充體內(nèi)缺乏的微量元素。 這些無機(jī)元素對人體生理機(jī)能起著至關(guān)重要的作用, 如鐵元素能參與人體血液內(nèi)氧氣的交換和運(yùn)輸,參與酶的合成,促進(jìn)人體生長發(fā)育[3];鎂元素能夠調(diào)節(jié)人體神經(jīng)與肌肉活動,擴(kuò)張血管從而具有降血壓作用[4];銅元素是各種酶的組成成分之一,它參與細(xì)胞氧化,參與人體造血過程,影響鐵的吸收和運(yùn)輸,并可調(diào)節(jié)呼吸,神經(jīng)和內(nèi)分泌系統(tǒng)[5]。
3.4 為了考察方法可靠性,本研究進(jìn)行了精密度、重復(fù)性、加樣回收率等內(nèi)容的考察。各無機(jī)元素的加樣回收率在95.14%~105.13%之間, 精密度RSD 在0.97%~2.44%,重復(fù)性RSD 在1.48%~2.36%,說明該方法符合檢測要求。
藥材的無機(jī)元素含量往往與藥材的道地性及藥效藥性之間有著密切的關(guān)系。此外,這些無機(jī)元素雖然在人體內(nèi)含量極微,但對生理機(jī)能具有不可或缺的作用,一旦出現(xiàn)了攝入不足就可能會引發(fā)疾病, 甚至危及生命。
本研究運(yùn)用AA6100 原子吸收分光光度計儀器,分別采用火焰原子吸收法和氫化物發(fā)生原子吸收法,對大連地區(qū)野生槐花中的K、Na、Zn、Mg、Fe、Mn、Cu、Ca 無機(jī)元素及As、Hg 兩種有害重金屬進(jìn)行了測定。研究結(jié)果表明, 槐花中有利于人類身體健康的無機(jī)元素含量豐富, 且大連地區(qū)的槐花中未檢出危害人體健康的兩種重金屬元素,說明大連地區(qū)野生槐花食用安全。大連地區(qū)盛產(chǎn)槐花, 當(dāng)?shù)赜姓∫吧被▉砑庸な秤玫牧?xí)慣。 因此對大連地區(qū)野生槐花中的無機(jī)元素進(jìn)行研究,有助于進(jìn)一步探索槐花的藥食兩用價值,為合理開發(fā)利用大連野生槐花資源提供參考。