鮑云惠 呂鎖忠 曹昌娥 鄧 祎 楊 帆

云南省曲靖市中醫(yī)醫(yī)院，云南 曲靖 655000

梔榆洗劑為曲靖市中醫(yī)醫(yī)院自主研究純中藥制劑，原處方由本院皮膚科醫(yī)師張穎組方，其成份由地榆、梔子、大黃、白礬等11味中藥組成。具有清熱解毒涼血、祛風(fēng)燥濕止癢之功效，用于濕熱壅滯所致的皮膚紅腫、丘疹、瘙癢等。基于原處方顯著的臨床療效和多年大量積累的用藥資料，為方便患者使用，醫(yī)院特將該處方開發(fā)為院內(nèi)制劑，對(duì)其進(jìn)行了提取工藝的篩選研究。

1 儀器與材料

1.1 儀器 FA1104型0.1 mg電子天平(上海上平儀器公司)；AS306000BT型超聲波清洗機(jī)(天津奧特賽恩斯儀器有限公司)；GZX-9140MBE電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠)。

1.2 材料 所使用藥材由曲靖市中醫(yī)醫(yī)院提供，且均符合藥典要求。

2 方法

根據(jù)處方各中藥所含化學(xué)成分的特性[1-2]，結(jié)合臨床使用經(jīng)驗(yàn)，組方中大黃、白礬用滲漉法提??；其余地榆、梔子等9味中藥用煎煮法提取。

2.1 滲漉工藝篩選影響 滲漉工藝的主要因素包括溶媒、溶媒濃度、溶媒量、流速，該實(shí)驗(yàn)中溶媒為水，故用單因素實(shí)驗(yàn)法重點(diǎn)考察加水量、流速對(duì)大黃浸出物的影響。按處方比例稱取大黃、白礬中藥飲片共120 g，大黃粉碎為粗粉，共取6份，分別按照試驗(yàn)要求試驗(yàn)，收集滲漉液，濃縮為稠膏。精密稱取各試驗(yàn)項(xiàng)下稠膏10 g，分別置于恒重的扁形稱量瓶中，于105 ℃干燥至恒重，精密稱定，計(jì)算干膏得率。各因素水平見表1。

表1 滲漉因素水平表

2.1.1 加水量對(duì)大黃浸出物的影響 按處方比例稱取大黃、白礬中藥飲片共120 g，大黃粉碎為粗粉，以流速為5 mL/min·kg考察加水量對(duì)大黃浸出物的影響。大黃浸出物隨加水量的增加而增加，與5倍量的水相比，加6倍水及7倍水大黃浸出物分別增加4.94%(P<0.01)、7.11%(P<0.01)；與加6倍量的水相比，加7倍水大黃浸出物增加2.49%(P<0.01)，其中加6倍水量相比加5倍水量對(duì)大黃浸出物的影響較大，結(jié)合實(shí)際生產(chǎn)及成本，大黃滲漉工藝加水量為6倍水量。結(jié)果見表2。

表2 加水量對(duì)大黃浸出物的影響試驗(yàn)干膏得率

2.1.2 流速對(duì)大黃浸出物的影響 按處方比例稱取大黃、白礬中藥飲片共120 g，大黃粉碎為粗粉，選用6倍量的水作為溶媒來考察流速對(duì)大黃浸出物的影響。按處方比例稱取大黃、白礬中藥飲片共 120 g，大黃粉碎為粗粉，以流速為5 mL/(min·kg)考察加水量對(duì)大黃浸出物的影響。大黃浸出物的量與流速成反比，流速為3 mL/(min·kg)時(shí)，大黃浸出物為44.73%，相比流速為4 mL/(min·kg)、5 mL/(min·kg)時(shí)，浸出物分別增加0.24%(P<0.05)、1.79%(P<0.05)，結(jié)合實(shí)際生產(chǎn)，大黃滲漉工藝流速為3 mL/(min·kg)。結(jié)果見表3。

表3 流速對(duì)大黃浸出物的影響試驗(yàn)干膏得率

2.1.3 大黃滲漉工藝驗(yàn)證試驗(yàn) 根據(jù)加水量及流速對(duì)大黃浸出物的影響結(jié)果，對(duì)其最佳滲漉工藝進(jìn)行驗(yàn)證，通過3批試驗(yàn)，以大黃浸出物得率作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，確認(rèn)提取工藝操作重現(xiàn)性和可行性。大黃、白礬中藥飲片共120 g，大黃粉碎為粗粉，加6倍水，流速設(shè)定為3 mL/(min·kg)。結(jié)果見表4。

表4 大黃滲漉工藝驗(yàn)證試驗(yàn)干膏得率

2.1.4 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 通過驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，3組試驗(yàn)RSD為0.3%，證明被驗(yàn)證的滲漉工藝中的加水量及流速處于“控制狀態(tài)”，表明該滲漉工藝操作具有重現(xiàn)性和可行性。

2.2 煮提工藝研究

2.2.1 方法 按處方比例稱取除地榆、梔子的9味中藥飲片共120 g，共取9份，按正產(chǎn)表中各實(shí)驗(yàn)號(hào)對(duì)應(yīng)的條件安排試驗(yàn)，收集提取液，濃縮為稠膏。精密稱取各試驗(yàn)項(xiàng)下稠膏10 g，分別置已恒重的扁形稱量瓶中于105 ℃干燥至恒重，精密穩(wěn)定，計(jì)算干膏得率。

2.2.2 水煮提取工藝 篩選用L9(34)正交實(shí)驗(yàn)[3]對(duì)梔榆洗劑的煮提工藝進(jìn)行篩選，以確定最佳煮提工藝。本試驗(yàn)以地榆、梔子等9味中藥的加水量(A)、提取時(shí)間(B)、提取次數(shù)(C)和誤差因素(D)4個(gè)因素為考察對(duì)象，每個(gè)因素設(shè)3個(gè)水平，以提取物的干膏得率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，選用L9(34)正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，各因素水平見表5。

表5 煮提因素水平表

2.2.3 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)和測(cè)定結(jié)果 按處方比例稱取除地榆、梔子等的9味中藥飲片共120 g，共取9份，根據(jù)L9(34)正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)表，將飲片浸泡后按“2.1”項(xiàng)下操作步驟進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果見表6、表7。

表6 煮提工藝正交結(jié)果匯總表

表7 方差分析表

干膏得率方差分析結(jié)果表明：因素C(提取次數(shù))對(duì)浸膏的提取率有極顯著性影響(P<0.01)；因素A(用水量)對(duì)浸膏的提取率有顯著性影響(P<0.05)、因素B(提取時(shí)間)對(duì)浸膏的提取率無顯著性影響 (P>0.05),三個(gè)因素對(duì)浸膏提取率的影響順序?yàn)镃>A>B,各因素不同水平對(duì)浸膏提取率的影響順序?yàn)锳3>A2>A1，B3>B2>B1，C3>C2>C1，其最佳提取工藝為A3B1C3。但其中A為次要因素，A2與A3相比出膏率的差值僅為0.58 g，結(jié)合實(shí)際生產(chǎn)及操作成本考慮，綜合以上分析，加水量確定為7倍水量，因此確定梔榆洗劑的最佳提取工藝條件為A2B1C3，即每次加7倍量水，提取3次，每次提取時(shí)間為1 h。

2.2.4 最佳工藝提取工藝驗(yàn)證試驗(yàn) 為驗(yàn)證正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，以確保提取工藝合理可行，按上述工藝條件A2B1C3重復(fù)安排三批試驗(yàn)，結(jié)果見表8。三次驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果表明，檢測(cè)指標(biāo)數(shù)值穩(wěn)定，說明所有優(yōu)選的提取條件具有重現(xiàn)性和可行性。

表8 提取工藝驗(yàn)證試驗(yàn)數(shù)據(jù)匯總表

3 討論

梔榆洗劑是我院皮膚科用于治療銀屑病的協(xié)定方，目前正處于研發(fā)申報(bào)階段。研究[4]表明梔榆洗劑可降低尋常型銀屑病進(jìn)行期患者外周血中的IL-17和IL-23的水平，治療尋常型銀屑療效確切，能明顯改善患者癥狀，止癢效果好，復(fù)發(fā)率低，并且無刺激性、未見明顯不良反應(yīng)，療效安全可靠。

醫(yī)院制劑研發(fā)的協(xié)定方，均是經(jīng)臨床多年使用其藥效已經(jīng)得到了證明的處方。制劑研發(fā)是把臨床處方轉(zhuǎn)向?yàn)榭纱笠?guī)模生產(chǎn)處方的過程。研發(fā)過程中，使協(xié)定方和生產(chǎn)處方發(fā)揮藥效學(xué)的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)盡量保持一致，是需要優(yōu)先考慮的問題，因此梔榆洗劑采用了中藥傳統(tǒng)工藝制備方法，用水為溶媒進(jìn)行提取。在此基礎(chǔ)上再根據(jù)處方各藥味的特點(diǎn)，結(jié)合制劑生產(chǎn)實(shí)際條件，采取單因素試驗(yàn)法和正交試驗(yàn)法對(duì)提取工藝參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，最終確定了該制劑工藝關(guān)鍵參數(shù)。經(jīng)中試試驗(yàn)證明三批樣品均符合《中國(guó)藥典》(2015版 四部)洗劑項(xiàng)下有關(guān)要求，說明本工藝較穩(wěn)定，具規(guī)?；a(chǎn)可行性。