董全星

河南省焦作市中醫(yī)院，河南 焦作 454000

半夏是臨床常用的中藥，來源于天南星科半夏屬植物。生半夏毒性較大，多外用，功效為消腫散結(jié)、燥濕化痰、降逆止嘔[1]。半夏植物廣泛分布于我國長江流域、東北、華北等地區(qū)。該植物喜潮濕陰涼，多生于草坡、疏林下。半夏入藥部位為其干燥塊莖，在諸多醫(yī)學(xué)典籍中，均有半夏入藥的記載，其藥效已達成共識[2]。半夏成分包含氨基酸、揮發(fā)油脂肪及膽堿等，還存在煙堿、毒芹堿等成分。半夏具有顯著的功效，但是含有有毒成分，生食少量半夏，出現(xiàn)口舌麻木，大量食用生半夏，可出現(xiàn)咽喉疼痛、嘔吐、聲音嘶啞及呼吸困難等中毒癥狀，甚至死亡。實驗研究顯示，半夏有毒成分為草酸鈣針晶，可產(chǎn)生刺激毒性。生半夏不能內(nèi)服，內(nèi)服制劑需要炮制，炮制后半夏毒性降低，根據(jù)炮制的方法不同，臨床上常用的有法半夏、姜半夏及清半夏[3]。藥理學(xué)研究顯示，炮制后的半夏毒性在用藥安全范圍。藥物研究[4]顯示，草酸鈣針晶難于溶于水，需要反復(fù)加熱，才能破壞其結(jié)構(gòu)，常規(guī)采用姜制并不能完全消除其毒性；經(jīng)過白礬炮制的半夏，毒性較小?！吨袊幍洹?2020版)記載，白礬功效有止血止瀉、解毒殺蟲，可用于炮制半夏，制約半夏毒性成分。白礬為鋁的復(fù)合物，水解為氫氧化鋁，在水溶液中，白礬呈凝膠狀態(tài)，可以吸附半夏有毒成分。恰當(dāng)?shù)呐谥品椒纫ＷC半夏的功效，又要降低半夏的毒性，還需要控制白礬的含量。本試驗采用不同的方法對半夏進行炮制，比較不同方法對半夏安全性和有效性的影響。

1 儀器與材料

1.1 儀器 高效液相色譜儀(生產(chǎn)廠家：安捷倫科技有限公司，Agilent 1260)、熱電色譜柱(生產(chǎn)廠家：賽默飛世爾科技公司，HYPERSIL C18)、天平(生產(chǎn)廠家：德國賽多利斯集團，BSA124S)。

1.2 材料 生半夏來源于焦作市中醫(yī)院藥學(xué)部采購半夏干燥塊莖。白礬(徐州醫(yī)藥股份有限公司)。乙醇、HCL溶液、草酸基試劑、氫氧化鈉滴定液、二甲酚橙指示液、醋酸-醋酸銨緩沖液、氨試液等。

2 實驗方法

2.1 樣本制備 A組清半夏傳統(tǒng)炮制方法，稱取100 g生半夏飲片，放入不銹鋼鍋內(nèi)，加入純凈水300 mL浸泡，每日換水2次，直至半夏內(nèi)無干心，60 ℃下進行干燥處理，備用。B組清半夏藥典炮制方法：稱取生半夏100 g，放入不銹鋼鍋內(nèi)，加入8%的白礬(20 g)，加純凈水300 mL浸泡，至半夏內(nèi)無干心，品嘗舌頭稍有麻木感，60 ℃下進行干燥處理，備用。

2.2 草酸鈣針晶含量測定

2.2.1 色譜條件 流動相：0.5 mmol/L叔丁醇水溶液，0.5% KH2PO4，采用磷酸調(diào)節(jié)pH值，柱溫：32.0 ℃，流速：1.0 mL/min。

2.2.2 制備對照品溶液 取10 mg標(biāo)準(zhǔn)品 H2C2O4·2H2O 放入100 mL容量瓶內(nèi)，蒸餾水進行定容，將濃度調(diào)整至0.2 mg/ mL，備用。

2.2.3 制備供試溶液 將半夏粉碎篩選，稱取100 mg藥粉，放于錐形瓶內(nèi)，加入5 mL蒸餾水，充分震蕩，攪拌混合均勻，在60 ℃水浴加熱，以3500 r/min離心速度離心5 min，取離心殘渣，加入2 mL蒸餾水，再次洗滌、離心，重復(fù)2次，收集殘渣，加入3.0 mL蒸餾水和0.2 mLHCL溶液混合均勻，60 ℃水浴加熱，再次攪拌離心，反復(fù)處理2次，離心取上清液2 mL，放置于容量瓶中，定容至10 mL，備用。

2.2.4 方法學(xué)檢驗 取備用溶液，每次吸取10 mL，連續(xù)5次。檢測峰面積RSD為0.15%，表示測量儀器精密度較好。吸取供試品溶液10 mL，分別在0、4、8、12 h內(nèi)測定樣本，檢測峰面積RSD為1.35%，顯示樣本穩(wěn)定性良好。重復(fù)性試驗：檢測RSD為1.18%，加樣回收率檢測，檢測其峰面積的RSD為1.16%。見表1、圖1。結(jié)果顯示符合測定要求。

圖1 清半夏HPLC特征圖譜

表1 樣本回收率檢測

2.2.5 樣本成分測定 將兩組樣品分別稱取 0.1 mg，按照上述方法，分別制備供試品溶液，分別取供試品溶液10 mg，注入液相色譜儀，測定草酸峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線來計算樣本草酸含量。草酸分子量為126，草酸鈣針晶分子量為146，草酸鈣針晶含量計算公式：草酸含量(%)×146/126,計算草酸鈣針晶含量。見表2。

2.3 琥珀酸含量測定 精密稱取5 g清半夏粉末，放于錐形瓶中，加入乙醇溶液，持續(xù)加熱回流1 h，重復(fù)提取2次，將處理后的溶液冷卻、過濾、合并，蒸干收集殘渣，加氫氧化鈉滴定液，超聲處理30 min，將溶液置入50 mL容量瓶中，攪拌均勻，備用；取供試品溶液20 mL，檢測溶液總游離有機酸含量，采用電位滴定法，鹽酸滴定液滴定。1個樣品平行3份。記錄消耗鹽酸滴定液體積和電位值，繪制滴定曲線圖，顯示滴定終點明顯。檢測結(jié)果見表2。

表2 清半夏兩種炮制方法所含成分的比較

2.4 白礬含量測定 稱取樣品5 g，至于坩堝內(nèi)，加熱至碳化，將溫度調(diào)至500 ℃，持續(xù)灰化4 h，冷卻后，加入鹽酸溶液10 mL，密封后，在60 ℃水浴中加熱，持續(xù)10 min；純水洗滌坩堝、濾渣，收集洗液和濾液，加入甲基紅乙醇溶液調(diào)整溶液顏色。加入醋酸-醋酸銨緩沖液，加入二甲酚橙指示液、鋅滴定液等。記錄消耗滴定液體積和電位值，并以此為坐標(biāo)，繪制滴定曲線圖，顯示滴定終點明顯。白礬測定結(jié)果見于表2。

3 討論

3.1 半夏的現(xiàn)代研究 半夏是臨床上常用的中藥材，功效有消腫散結(jié)、鎮(zhèn)咳止嘔。用于治療呼吸系統(tǒng)、消化系統(tǒng)疾病，還具有抗病毒、抗炎作用[5]。諸多醫(yī)學(xué)典籍中，均有半夏入藥的記錄，在中醫(yī)經(jīng)典著作《黃帝內(nèi)經(jīng)》中記載“半夏湯”治療不臥、不暝等疾病，并且記載半夏的用法，但是對于半夏的炮制和毒性未見記載[6]。誤食半夏可導(dǎo)致中毒，表現(xiàn)為口腔、舌頭、咽喉部麻辣感，嚴重者，可出現(xiàn)惡心、嘔吐、腹痛及胸前區(qū)壓迫感等癥狀[7]。少量生半夏，即可引起中毒癥狀。

3.2 炮制對有毒成分的影響 半夏炮制的目的是為了降低或消除毒性，保證安全用藥，其炮制方法除了水洗外，還常用到白礬、石灰、生姜等輔料，經(jīng)過適宜的輔料處理，達到解除半夏毒性的目的[8]。隨著中醫(yī)藥的快速發(fā)展，半夏的炮制方法借助現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)也多種多樣，根據(jù)炮制輔料的不同，可分為清半夏、姜半夏、法半夏及相關(guān)中藥顆粒劑型[9]。臨床中藥學(xué)十分重視對半夏的炮制工藝和毒性研究，其炮制方法也一直在完善。半夏有效成分復(fù)雜，包括氨基酸、鳥苷、揮發(fā)油脂肪及生物堿等。半夏所含有的草酸鈣針晶屬于有毒成分，草酸鈣針晶多以單一形態(tài)存在。半夏生品中含有大量草酸鈣針晶，服用后，刺激口腔、胃腸道黏膜，中毒后，表現(xiàn)為針刺樣疼痛、黏膜紅腫。嚴重者可導(dǎo)致腹瀉、失音等后果。炮制后半夏入藥，減少草酸鈣針晶含量，降低了半夏的毒性，但是不同的炮制方法影響半夏的質(zhì)量。選擇最大限度的保留有效成分，減少毒性成分的炮制方法。經(jīng)過長期的藥材炮制實踐，采用白礬溶液吸附半夏的草酸鈣針晶等有毒成分，降低其毒性，該炮制方法得到廣泛應(yīng)用[10]。

中藥材質(zhì)量是中醫(yī)藥發(fā)展的基礎(chǔ)，中藥從業(yè)者一直致力于優(yōu)選制備優(yōu)質(zhì)的中藥材，該工作也是臨床中藥研究的重點。實驗室做了很多半夏成分和毒性研究，但是各成分含量較低，并且存在諸多不穩(wěn)定性。不同炮制方法的半夏成分含量缺乏精準(zhǔn)性，這也是我國中藥飲片難以進入國際市場的主要難題。實驗研究顯示，半夏所含草酸鈣針晶與其毒性呈正相關(guān)，不同半夏炮制方法可以影響其含量[11]。

3.3 白礬對清半夏質(zhì)量的影響 白礬作為輔料降低半夏的毒性，國內(nèi)學(xué)者做了諸多深入細致的研究，本試驗選擇傳統(tǒng)清半夏炮制方法和《藥典》炮制規(guī)范進行對比，檢測發(fā)現(xiàn)，兩種炮制方法其游離酸和草酸鈣針晶存在差異，結(jié)果顯示，兩種炮制方法的有效成分均達到標(biāo)準(zhǔn)，其中《藥典》(2020版)中的炮制方法炮制的清半夏游離酸含量較高，而草酸鈣針晶含量較低，結(jié)果優(yōu)于傳統(tǒng)炮制方法，符合清半夏的安全和藥用標(biāo)準(zhǔn)。臨床研究[12]顯示，炮制后清半夏毒性降低，化痰止咳作用增強，但是常存在鋁金屬殘留，而控制白礬含是炮制的重要環(huán)節(jié)。鋁金屬含量超標(biāo)，適得其反，反而危害生命健康，因此，在清半夏炮制過程中，要嚴格控制白礬含量，同時嚴格遵循相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。