晏和國 侯建婷 尹朝蘭 楊 博 陳婉麗 李 軍*

1.云南省昭通市中醫(yī)醫(yī)院，云南 昭通 657000；2.昆明市中醫(yī)醫(yī)院，云南 昆明 650011

糖尿病周圍神經(jīng)病變(Diabetic peripheral neuropathy，DPN)是指周圍神經(jīng)功能障礙，是糖尿病最常見的慢性并發(fā)癥之一，亦是DPN中最常見的類型。研究報道我國DPN患病率為52.97%。DPN臨床癥狀[1]早期常表現(xiàn)肢體麻木、疼痛、感覺異常等，并隨著糖尿病病程逐漸進展[2-3]，可出現(xiàn)運動神經(jīng)、感覺神經(jīng)、自主神經(jīng)均可受累，常表現(xiàn)為感覺缺失、腱反射消失，同時也可出現(xiàn)其他并發(fā)癥?，F(xiàn)代醫(yī)學對DPN發(fā)病機制尚不明確，糖尿病并發(fā)癥統(tǒng)一機制學說認為:高糖狀態(tài)引起線粒體中超氧陰離子生成過多，從而導致組織細胞發(fā)生氧化應激是糖尿病周圍神經(jīng)病變發(fā)病機制[4-5]。西醫(yī)對DPN的治療主要是針對病因治療和針對神經(jīng)病變的發(fā)病機制治療，針對病因治療包括積極嚴格地控制高血糖并保持血糖穩(wěn)定和使用甲鈷胺、神經(jīng)生長因子進行神經(jīng)修復，針對神經(jīng)病變的發(fā)病機制治療包括抑制醛糖還原酶抑制劑、多元醇通路增強等對癥治療[6-8]。前期研究[9-12]表明糖周靈膠囊可以改善DPN大鼠坐骨神經(jīng)的傳導性、降低血糖、恢復對熱輻射敏感性、抑制正常大鼠體內(nèi)血栓形成作用及鎮(zhèn)痛作用；糖周靈膠囊中的多種藥物均具有抑制神經(jīng)細胞氧化應激的作用。本研究針對糖周靈膠囊低、中、高劑量與抗氧化劑維生素C、模型組、正常對照組相比，對機械性痛閾的影響進行研究，現(xiàn)報道如下。

1 實驗材料

1.1 動物 8～9周的SPF級雄性SD大鼠，體重：220～260 g，購自湖南斯萊克景達實驗動物有限公司， 動物許可證號:SCXK (湘)2016-0002，在云南中醫(yī)藥大學動物實驗公共平臺實驗室飼養(yǎng)，許可證：SYXK(滇)K2017-0005。

1.2 材料 糖周靈膠囊(主要由黃芪、三七、全蟲等藥物組成)由昆明市中醫(yī)醫(yī)院制劑室生產(chǎn)。 維生素C 片(100 mg/片，昆明振華制藥廠有限公司)，鏈脲佐菌素(STZ，批號：CAS1883-66-4，美國Sigma公司)，4279血糖試紙(批號：TD-18F130-BED，中國臺灣泰博科技股份有限公司)。Von Frey觸覺刺痛套件。

2 方法

2.1 實驗分組及培養(yǎng) 將60只雄性SD大鼠適應性飼養(yǎng)1周后,采用隨機對照方法-用電子計算機隨機編碼法隨機分為正常對照組和造模組，其中正常組(10只)，造模組分為糖尿病組、糖周靈小劑量組、中劑量組、高劑量組、維生素c組各10只；造模成功后，糖周靈小劑量組以糖尿病0.44 g/(kg·d)給藥；中劑量組按0.88 g/(kg·d)給藥；大劑量組按1.75 g/(kg·d)給藥，維生素C組按0.05 g/(kg·d)給藥，糖尿病組及對照組給予等量蒸餾水，給藥時間為16周，16周后用Von Frey測量儀測定機械痛閾值。

2.2 指標檢測及方法 觀察SD大鼠一般情況(毛色、精神狀態(tài)等)，測定治療前、治療后4周、8周、12周、16周大鼠體重、大鼠尾尖血血糖，用Von Frey儀測量測定灌胃16周后大鼠機械痛閾值并記錄。

3 結(jié)果

3.1 一般情況 正常組大鼠毛色純白,精神狀態(tài)良好,有光澤,動作自如，進食、飲水量、尿量均正常，體重明顯增加。模型組大鼠出現(xiàn)毛色枯黃，精神萎靡，動作遲緩，出現(xiàn)明顯的多飲、多食、多尿癥狀。維C組、糖周靈低中高劑量組均出現(xiàn)類似模型組癥狀，但程度都較輕。為防止各組出現(xiàn)不明原因死亡，影響實驗結(jié)果，故每組均選取造模成功的12只大鼠進行實驗。模型組2只死亡，維C組、糖周靈小中高劑量組各1只死亡，均考慮為長期高血糖導致。糖周靈大劑量組1只大鼠因灌胃操作不當死亡。

3.2 糖周靈膠囊對血糖影響 在空腹血糖指標來看：在治療4周、8周、12周、16周后，與正常對照組相比，模型組、維C組、糖周靈小、中、高各治療組均明顯升高(P<0.01)；與模型組相比，維C 組及糖周靈小、中、高劑量組均無明顯差異差異(P>0.05)。見表1。

表1 各組大鼠血糖比較

3.3 糖周靈對體重影響 各組體重在治療前無明顯的差異(P>0.05)，在治療4周、8周、12周、16周后，與正常對照組相比，模型組、維C組、糖周靈各治療組體重均下降(P<0.01)；與模型組相比，維C 組、糖周靈各濃度組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，與維C組相比，糖周靈各濃度組無明顯差異(P>0.05)。見表2。

表2 各組大鼠體重比較

3.4 糖周靈膠囊對糖尿病神經(jīng)病變大鼠感覺閾值影響 正常對照組與維生素C組存在明顯差異(P<0.05)；正常對照組、模型組與小劑量組存在顯著差異(P<0.01)；模型組與小劑量組、中劑量組、大劑量組存在顯著差異(P<0.01)，與維C組相比，糖周靈小、中、大劑量組存在明顯差異(P<0.05)，與糖周靈大劑量相比，糖周靈小、中劑量無明顯差異(P>0.05)。見表3。

表3 機械痛閾值比較

4 討論

糖周靈膠囊是云南省昆明市中醫(yī)醫(yī)院院內(nèi)制劑，主要功用是益氣養(yǎng)血、活血通絡、搜風止痛，其方藥由黃芪、三七、當歸、川芎、雞血藤、全蟲、牛膝等藥物組成，其中黃芪、三七為君，健脾益氣活血，通絡止痛；當歸、川芎、雞血藤為臣，養(yǎng)血活血，行氣止痛，祛瘀通絡，舒筋活絡；全蟲等為佐藥，搜風通絡，溫經(jīng)止痛，祛風散寒等；使以牛膝滋養(yǎng)肝腎，載藥下行。其配伍特點有：其一，先擬扶正，以達到治療未病，截斷延緩干血癥瘕的形成的目的；其二，在健脾益氣養(yǎng)血的基礎上，施以活血祛瘀，溫陽通絡；其三，結(jié)合 DPN絡脈“以通為用” 的特點 ，佐以辛香蟲蟻之品搜剔絡中混處之邪；其四，考慮消渴病多始于陰虛的特點，使以滋養(yǎng)肝腎、引邪下行之品?，F(xiàn)代藥理研究[9-12]表明：黃芪、三七、當歸、葛根具有降血糖作用；三七、羌活、細辛等則具有較強的抗炎鎮(zhèn)痛作用；牛膝具有改善紅細胞變形能力，降低纖維蛋白原水平的作用。大部分中藥均具有擴張血管、改善微循環(huán)、抑制血小板聚集、抗氧化、抗血栓形成、降低血粘度、抗動脈硬化的作用。

糖尿病神經(jīng)病變是一種神經(jīng)退行性疾病，可導致部分糖尿病患者功能、情緒和睡眠的改變。本研究發(fā)現(xiàn)糖尿病模型組機械痛閾值最低，糖周靈膠囊一定程度上可以提高糖尿病大鼠機械痛閾值，改善糖尿病神經(jīng)病變神經(jīng)功能，對糖尿病周圍神經(jīng)病變具有一定保護作用。糖尿病神經(jīng)病變的發(fā)病機制包括:神經(jīng)鞘病變、多元醇通路活性、糖基化終末產(chǎn)物積累、蛋白激酶活性、己糖胺通路通量增加、氧化應激、一氧化氮和炎癥等[13]。DPN主要表現(xiàn)為多樣性異常感覺，包括感覺過敏、自發(fā)痛、痛覺過敏等。研究[14]證實高血糖時，機體對機械刺激的反應呈一個增強的過程。本研究發(fā)現(xiàn)糖尿病模型組的機械痛閾值最低，說明該組大鼠對機械刺激反應最高，此研究亦證實這一點。糖尿病并發(fā)癥統(tǒng)一機制學說認為:高糖狀態(tài)引起線粒體中超氧陰離子生成過多，引起組織細胞發(fā)生氧化應激,是導致包括 DPN在內(nèi)的糖尿病慢性并發(fā)癥的共同機制[15-16]。細胞凋亡是通過線粒體內(nèi)ROS生成增多可誘導線粒體內(nèi)膜去極化，膜電位下降，線粒體膜通透性增加，導致釋放細胞色素等凋亡相關蛋白入胞漿,進而與凋亡蛋白酶激活因子和 procaspase-9 結(jié)合，使后者活化為有活性的 Caspase-9，從而進一步使下游的 procaspase-3激活為Caspase-3，導致細胞凋亡[17-19]。糖尿病神經(jīng)病變可導致終身殘疾，目前尚無有效的治療方法或?qū)⒒颊叩耐纯嘟档阶畹?，因此制定糖尿病的治療策略勢在必行。由于氧化應激、線粒體功能障礙、細胞凋亡和炎癥是DPN發(fā)展和進展的關鍵機制[20]，有研究[21]發(fā)現(xiàn)對糖尿病神經(jīng)病變的保護作用可能是由于糖尿病周圍神經(jīng)病變大鼠坐骨神經(jīng)中SOD(超氧化歧化酶)的含量顯著下降而MAD(丙二醛)、ROS(活性氧簇)含量明顯增高，Caspase-3蛋白表達增加，氧化應激啟動后細胞凋亡明顯增加，通過上調(diào)糖尿病周圍神經(jīng)病變大鼠SOD 水平，下調(diào) MAD、ROS 水平，抑制 Caspase-3蛋白的表達，達到抗氧化應激和細胞凋亡的作用。

本研究發(fā)現(xiàn)，在糖尿病神經(jīng)病變模型建立，糖周靈膠囊灌胃16周后，發(fā)現(xiàn)糖尿病模型組機械痛閾值最低，糖周靈膠囊一定程度上可以提高糖尿病大鼠機械痛閾值，改善糖尿病神經(jīng)病變神經(jīng)功能，對糖尿病周圍神經(jīng)病變具有一定保護作用，可能是由于糖周靈膠囊上調(diào)糖尿病周圍神經(jīng)病變大鼠SOD水平，下調(diào)MAD、ROS水平，抑制Caspase-3蛋白的表達，達到抗氧化應激和細胞凋亡的作用來實現(xiàn)對糖尿病周圍神經(jīng)病變的保護作用。其作用機制尚不明確，有待作進一步深入研究。