劉永紅，李教社，張 和，張軍義，謝江冰

(1.西安職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生物工程系,陜西 西安 710077； 2.楊凌森禾農(nóng)業(yè)科技有限公司, 陜西 楊凌 712100； 3.陜西云嶺生態(tài)農(nóng)業(yè)科技有限公司,陜西 商洛 711406)

南五味子Schisandrasphenanthera和北五味子Schisandrachinensis分別是木蘭科植物華中五味子和五味子的干燥成熟果實[1]。北五味子主產(chǎn)于我國東北和河北部分地區(qū)，北五味子在種質(zhì)資源、品種選育、栽培技術(shù)和病蟲害防治等領(lǐng)域的研究已趨于成熟[2]。南五味子主要產(chǎn)于我國于我國東南部和西南部，目前關(guān)于南五味子的技術(shù)研發(fā)及推廣應(yīng)用相對匱乏[3]。秦嶺山脈野生南五味子資源不能滿足市場需求，開展南五味子品質(zhì)資源研究[4～6]，可以為其一步的開發(fā)提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

樣品1、2、3、4(北五味子)于2019年7月采自陜西省柞水縣豐北河鎮(zhèn)土橋村。樣品5(南五味子)于2019年7月采自陜西省柞水縣豐北河鎮(zhèn)土橋村。樣品6(南五味子)于2019年8月底采自陜西省鎮(zhèn)安縣月河鎮(zhèn)東陽村。樣品7(南五味子)于2019年8月底采自陜西省寶雞市隴縣八渡鎮(zhèn)桃園村；樣品8(南五味子)于2019年8月底采自陜西省西安市藍田縣；樣品9(南五味子)于2019年8月底采自陜西省西安市戶縣。對照樣品10(北五味子)于2018年9月采自陜西省柞水縣豐北河鎮(zhèn)土橋村。

1.2 方法

1.2.1 顯微鑒定[7]取五味子樣品，分別研磨成粉，過20目篩，取少量細粉于載玻片上，滴2-3滴水合氯醛至粉末上，至酒精燈上加熱，至水合氯醛沸騰，反復(fù)2～3次，至顯微鏡下觀察。

1.2.2 總糖、總酸、粗蛋白、粗脂肪的測定[8]采用費林氏試劑法測定總糖的含量，酸堿滴定法測定總酸的含量；粗蛋白測定(凱氏定氮法，GB5009.5-2003標準)；粗脂肪測定(索氏抽提法，GB5009.6-2003標準)。

1.2.3 五味子甲素、五味子酯甲測定[9，10]

1.2.3.1 供試品溶液的制備。精密稱定各樣品粉末0.500 g，置50 mL量瓶中，用無水甲醇提取，超聲處理20 min，搖勻，濾過，即得。

1.2.3.2 色譜條件。五味子甲素、五味子乙素的流動相為無水甲醇-水(75∶25，V/V) ; 五味子甲素和五味子乙素檢測的波長為 224 nm。

2 結(jié)果與分析

2.1 顯微結(jié)構(gòu)觀察

《中國藥典》記載，五味子種皮表皮石細胞表面觀呈多角形或長多角形。種皮內(nèi)層石細胞呈多角形、類圓形或不規(guī)則形。果皮表皮細胞表面觀類多角形，較小，垂周壁略呈連珠狀增厚，表面有角質(zhì)線紋，含淀粉粒，表皮中散有油細胞，螺紋導(dǎo)管[11]。

我們在此藥典標準的描述基礎(chǔ)上，詳細鑒定了不同品種南、北五味子的顯微結(jié)構(gòu)及區(qū)別。

圖1 1號樣品(a 外表石細胞； b 內(nèi)層石細胞； c 分泌細胞及角質(zhì)層紋理；d 導(dǎo)管；e 胚乳細胞及脂肪油；f 種皮內(nèi)層石細胞 )

圖2 2號樣品(a分泌細胞及角質(zhì)層紋理； b 脂肪油； c 導(dǎo)管；d 淀粉粒；e外表石細胞；f 導(dǎo)管)

圖3 3號樣品(a 外表石細胞； b 內(nèi)層石細胞； c 淀粉粒分泌細胞及角質(zhì)層紋理；d 胚乳細胞及脂肪油；e 分泌細胞及角質(zhì)層紋理；f 導(dǎo)管)

圖4 4號樣品(a 外表石細胞； b 內(nèi)層石細胞； c 胚乳細胞及脂肪油；d導(dǎo)管；e 分泌細胞及角質(zhì)層紋理；f 脂肪油)

圖5 5號樣品(a 外表石細胞； b 內(nèi)層石細胞； c 胚乳細胞及脂肪油；d導(dǎo)管；e 結(jié)晶；f分泌細胞及角質(zhì)層紋理)

圖6 6號樣品(a 淀粉粒； b分泌細胞及角質(zhì)層紋理； c 導(dǎo)管；d胚乳細胞及脂肪油；e內(nèi)層石細胞；f外表石細胞)

圖7 7號樣品(a淀粉粒；b 脂肪油； c分泌細胞及角質(zhì)層紋理；d外表石細胞；e導(dǎo)管；f 種皮外層石細胞)

圖8 8號樣品(a分泌細胞及角質(zhì)層紋理； b 內(nèi)層石細胞； c 外表石細胞；d胚乳細胞及脂肪油；e 導(dǎo)管；f 淀粉粒)

圖9 9號樣品(a 淀粉粒； b胚乳細胞及脂肪油； c分泌細胞及角質(zhì)層紋理；d導(dǎo)管；e外表石細胞；f 脂肪油; g 結(jié)晶; h 內(nèi)層石細胞)

五味子粉末顯微結(jié)構(gòu)普遍含有果皮碎片的分泌細胞及角質(zhì)層紋理，種皮外表皮石細胞及內(nèi)層石細胞，胚乳細胞，導(dǎo)管，淀粉粒，脂肪油等，5號和9號五味子樣品觀察到了結(jié)晶。定性觀察發(fā)現(xiàn)不同樣品在石細胞形狀，導(dǎo)管、淀粉粒數(shù)量，脂肪油含量等方面有一定差異，如表1。

表1 9個五味子樣品的顯微特征

2.2 成分測定

五味子含有無機鹽、有機酸、維生素、木質(zhì)素、三萜、多糖等化學(xué)成分[12]。五味子具有降酶保肝，斂肺生津，補腎養(yǎng)心，收斂固澀等功效而備受重視[13]?！吨袊幍洹?015版中，北五味子是以其所含的五味子醇甲作為藥材的質(zhì)量控制指標，南五味子是以其所含的五味子酯甲作為藥材的質(zhì)量控制指標，而五味子甲素亦是南、北五味子重要的木脂素類成分之一。南五味子(樣品6，7，8，9)與北五味子(樣品10) 各項指標測定結(jié)果見表2。結(jié)果顯示除總酸外，南五味子所含總糖、粗蛋白、粗脂肪、五味子甲素及五味子酯甲含量不低于北五味子。

表2 北五味子與不同南五味子樣品成分比較

3 討論

顯微測定結(jié)果表明，1號北五味子內(nèi)層石細胞明顯，和其早熟的特性有一定的對應(yīng)性。2號北五味子脂肪油多，層紋較少，淀粉粒多，推測其含有的糖分和揮發(fā)性成分較高。3號北五味子淀粉粒多，聚集存在，導(dǎo)管不明顯，角質(zhì)層紋多，明顯。4號北五味子有淀粉粒，較少，導(dǎo)管少且不明顯，和其晚熟的特性有一定關(guān)系。5號樣品成熟最晚，不斷成熟過程中推測其顯微結(jié)構(gòu)會發(fā)生變化，但其和其它4個北五味子樣品的顯微結(jié)構(gòu)有較明顯區(qū)別，外層石細胞較黑。8月底采自秦嶺不同地帶的6、7、8、9號南五味子顯微結(jié)構(gòu)定性觀察有一定區(qū)別：6號南五味子采自鎮(zhèn)安，角質(zhì)層紋明顯但少。7號南五味子采自寶雞，角質(zhì)層紋較多，明顯。8號南五味子采自藍田，種皮內(nèi)層石細胞難以觀察。9號南五味子采自周至，有別的五味子沒有的不明結(jié)構(gòu)，脂肪油少，導(dǎo)管為梯形導(dǎo)管，且少。有類似結(jié)晶的物質(zhì)。在后續(xù)的研究中，綜合顯微特征、有效成分含量及其它生理指標，篩選出優(yōu)質(zhì)品種，為規(guī)范化栽培推廣打下基礎(chǔ)。

8月底采自秦嶺不同地帶的6、7、8、9號4個南五味子的總糖、總酸、粗蛋白及粗脂肪檢測結(jié)果表明，樣品6總糖含量最高，達15.8 g·100 g-1，樣品8總糖含量最低，達11.0 g·100 g-1，4個樣品的總糖含量差別不大。樣品9總酸含量最高，達54.65 g·kg-1，樣品8總酸含量最低，達9.89 g·kg-1，4個樣品的總酸含量差別顯著。樣品9粗蛋白量最高，達9.94 g·100 g-1，樣品6粗蛋白含量最低，達6.66 g·100 g-1，4個樣品的粗蛋白含量差別不大。樣品8粗脂肪含量最高，達18.3 g·100 g-1，樣品9粗脂肪含量最低，達8.6 g·100 g-1，4個樣品的粗脂肪含量差別較大。 樣品6、7、8所含五味子甲素含量差別不大，分別為3.70 mg·g-1、4.23 mg·g-1、3.64 mg·g-1，而樣品9五味子甲素含量最高，為5.23 mg·g-1。樣品6、7、8的五味子酯甲含量差別不大，分別為2.02 mg·g-1、1.93 mg·g-1、2.26 mg·g-1，而樣品9五味子酯甲含量最高，為4.20 mg·g-1。五味子的五味子醇甲、酯甲、甲素是五味子中木酯素的主要成分，也是評價五味子質(zhì)量標準的依據(jù)[14～15]， 4個南五味子的五味子甲素和五味子酯甲含量并不低于北五味子[16]，這表明秦嶺地帶南五味子品質(zhì)優(yōu)良，開展南五味子優(yōu)質(zhì)品種選育，進行規(guī)范化栽培推廣有一定現(xiàn)實意義。另外，西起寶雞隴縣東至西安藍田的秦嶺區(qū)域內(nèi)，采自周至的9號南五味子綜合各種成分含量最高，其顯微結(jié)構(gòu)也明顯異于其它南五味子品種，推測和南五味子的初加工方式有關(guān)：6、7、8號南五味子都是采后陰干，而9號南五味子是采后在開水中浸煮幾秒，再撈出曬干。我們推測，這種五味子初加工方法不僅使樣品干燥迅速，而且可以提高某些有效成分含量。