雷浩 楊文榮 李仲華

三陰性乳腺癌(triple negative breast cancer，TNBC)是一種孕激素受體(progesterone，PR)、雌激素受體(estrogen，ER)、人表皮生長(zhǎng)因子受體2(human epithelial growth factor receptor-2,HER-2)均表達(dá)較少或無(wú)表達(dá)的疾病，具有較高的異質(zhì)性、較強(qiáng)的侵襲能力并易向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，且治療方法有限、存活率較低、預(yù)后較差[1-3]。目前乳腺癌發(fā)病率約占所有惡性腫瘤的23%，且世界以每年130萬(wàn)增量不斷增多，死亡率較高，而TNBC病人占乳腺癌病人的比例為15%～20%[4-5]。化療是TNBC較常見(jiàn)的治療方法，但有些病人對(duì)于常規(guī)化療無(wú)反應(yīng)或者惡心。目前應(yīng)用較廣泛的治療方法大都集中于新輔助化療，其不但能清除微小轉(zhuǎn)移灶提高保乳率、降低耐藥性，而且能降低腫瘤分期甚至能提高病理完全緩解(pathologic complete response，pCR)病人的遠(yuǎn)期生存[6-7]。但因基因不同導(dǎo)致個(gè)體差異較大，新輔助化療效果也不盡相同?；騉CA2又名酪氨酸酶基因，和酪氨酸代謝有關(guān)，在白化病治療中被廣泛研究[7]。此外，OCA2對(duì)于惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展意義重大，OCA2的變異能引起乳腺癌病人治療效果的差異。本研究通過(guò)對(duì)基因OCA2的核苷酸序列rs4778137多態(tài)性的研究，探討其與新輔助化療效果的相關(guān)性。

對(duì)象與方法

一、對(duì)象

經(jīng)本院倫理委員會(huì)同意，選取2016年2月～2020年3月在本院確診為T(mén)NBC女性病人72例為研究對(duì)象，年齡33～74歲，平均年齡(48.6±5.7)歲，絕經(jīng)32例，未絕經(jīng)40例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移37例，病程6天～3年，平均病程(1.9±0.8)年，體質(zhì)量指數(shù)(23.6±2.0)kg/m2。TNBC病人pCR標(biāo)準(zhǔn)為治療后病理結(jié)果顯示乳房及腋窩處均不存在癌殘留。

納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)病理結(jié)果顯示ER、PR、HER-2均為陰性的乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌病人，且TNM分期為Ⅱb～Ⅲc期的局部晚期乳腺癌；(2)臨床病理學(xué)資料完整；(3)無(wú)其他腫瘤病史；(4)年齡20～80歲；(5)病人及家屬自愿參與研究，并簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)患有重大心、肺、腎疾病；(2)入組前1個(gè)月服用過(guò)治療乳腺癌的藥物；(3)患有精神疾?。?4)中途退出研究；(5)炎性乳腺癌、鱗癌病人、男性乳腺癌；(6)對(duì)新輔助化療過(guò)程使用藥物過(guò)敏或不愿接受新輔助化療。

二、方法

1.新輔助化療方法：采用環(huán)磷酰胺(國(guó)藥準(zhǔn)字H32024654，江蘇盛迪醫(yī)藥有限公司)聯(lián)合鹽酸表柔比星[國(guó)藥準(zhǔn)字H20000496，輝瑞制藥(無(wú)錫)有限公司，規(guī)格：10mg/瓶]續(xù)貫紫杉醇(國(guó)藥準(zhǔn)字H20064299，揚(yáng)州奧賽康藥業(yè)有限公司,規(guī)格：16.7ml ·100 mg/瓶)方法：用5%的葡萄糖溶液10 ml稀釋紫杉醇至175 mg/m2，并使用振蕩器(貨號(hào)：Vortex 3000，北京乾明基因技術(shù)有限公司)震蕩10分鐘，待其溶解后轉(zhuǎn)移至500 ml的葡萄糖溶液中，靜脈注射3小時(shí)；環(huán)磷酰胺注射液靜脈注射按體表面積每次500 mg/m2，加生理鹽水20～30 ml，鹽酸表柔比星10 ml,溶解為65 mg/m2，緩慢注射，1周期20天，連續(xù)治療6～8周期后接受手術(shù)治療[8]。

2.檢測(cè)方法：(1)DNA序列檢測(cè)方法。試管中提前加入血液抗凝劑(貨號(hào)：CD-02843-ML，武漢純度生物科技有限公司)，早晨抽取受試者空腹?fàn)顟B(tài)下靜脈血10 ml，用DNA提取檢測(cè)試劑盒(貨號(hào)：FG0310-T，江蘇凡知醫(yī)療科技有限公司)提取，嚴(yán)格按照試劑盒使用說(shuō)明操作，同時(shí)設(shè)計(jì)擴(kuò)增rs4778137的引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR擴(kuò)增方法：95 ℃預(yù)變性15分鐘，95 ℃變性10分鐘,55 ℃退火30 s，75 ℃延伸5分鐘。最后對(duì)擴(kuò)增PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行基因型檢測(cè)。(2)生化指標(biāo)檢測(cè)方法。使用全自動(dòng)生化分析儀(型號(hào)：Selectra E Chemistry Analyzer，上海玉研科學(xué)儀器有限公司)檢測(cè)手術(shù)前病人甘油三酯(triglyceride，TG)、總膽固醇(total cholesterol，TCH)、總膽紅素(total bilirubin，TBIL)、空腹血糖(fasting blood-glucose，F(xiàn)BG)、尿素氮(blood urea nitrogen，BuN)、高密度脂蛋白(high density lipoprotein，HDLP)、尿酸(uric acid，UA)、白蛋白(albumin，ALB)水平。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

結(jié)果

1.病人病理資料、生化指標(biāo)與pCR相關(guān)性比較：術(shù)后32例達(dá)pCR，pCR和非pCR病人年齡、N分期、月經(jīng)狀態(tài)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。病程在2年以上的病人，pCR病人比率(26.3%)小于病程低于2年的病人比率(67.6%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。病人T1和T2期pCR病人比率(53.3%、56.5%)高于T3和T4期(36.4%、25.0%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病人，pCR病人比率(60.0%)高于淋巴轉(zhuǎn)移病人(18.9%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 TNBC病人基本資料與pCR相關(guān)性(例,%)

術(shù)后pCR和非pCR病人TG、TCH、TBIL、FBG、BUN、HDLP比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，UA和ALB比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 生化指標(biāo)與pCR相關(guān)性

2.OCA2 rs4778137多態(tài)性和pCR的相關(guān)性：rs4778137位點(diǎn)上CC、GC、GG基因型頻率分別為20.8%、29.2%、50.0%，pCR病人GG基因型頻(52.8%)高于非pCR(47.2%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 OCA2 rs4778137多態(tài)性和pCR相關(guān)性(例，%)

3.TNBC病人pCR率影響因素的Logistic回歸分析：TNBC病人病程不是pCR率的獨(dú)立影響因素(P>0.05)。而T分期、淋巴轉(zhuǎn)移、rs4778137多態(tài)性、UA、ALB是TNBC病人pCR率的獨(dú)立影響因素(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 不同因素對(duì)TNBC病人pCR率的Logistic回歸分析

討論

隨著生活節(jié)奏加快，乳腺癌已成為我國(guó)較常見(jiàn)的惡性腫瘤疾病之一，且每年增速達(dá)4%[9]。TNBC是乳腺癌的一種，其發(fā)病機(jī)制尚不明確，可能與家族史、生殖因素、性激素、營(yíng)養(yǎng)與飲食、環(huán)境、乳腺癌相關(guān)基因等有關(guān)[10-11]。

基因核苷酸多態(tài)性可致使腫瘤產(chǎn)生多種生物學(xué)表現(xiàn)[10-12]?；騉CA2 是人體內(nèi)一種包含內(nèi)含子總長(zhǎng)度約為345kb的基因片段，在惡性腫瘤中發(fā)揮重要作用。有研究表明，基因OCA2的遺傳和變異能影響乳腺癌的發(fā)生及病情進(jìn)展[13]，對(duì)于乳腺癌的預(yù)后有重大意義。此外，基因OCA2核苷酸多態(tài)性還與皮膚癌以及器官移植后皮膚鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生有關(guān)，OCA2基因rs1800407位點(diǎn)多態(tài)性亦能造成皮膚黑色素瘤[13]。早在1982年，乳腺癌開(kāi)始新輔助化療，目前新輔助化療已經(jīng)被廣泛應(yīng)用到乳腺癌的治療中。

本研究中，pCR率為44.4%，稍高于既往研究[13]，可能與病例數(shù)少有關(guān)，郭俊強(qiáng)等[13]研究證實(shí)，TNBC新輔助化療的pCR率高于其他類型乳腺癌，為35.7%。本研究顯示，pCR和非pCR病人年齡、N分期、月經(jīng)狀態(tài)差異不顯著，說(shuō)明TNBC病人年齡、N分期、月經(jīng)狀態(tài)對(duì)pCR率影響不大。TNBC病人病程越長(zhǎng)pCR率越低，可能是因?yàn)榛疾r(shí)間較長(zhǎng)，腫瘤在體內(nèi)轉(zhuǎn)移較多，導(dǎo)致機(jī)體防御系統(tǒng)抵抗能力降低，使pCR率較差，說(shuō)明及時(shí)發(fā)現(xiàn)并及時(shí)治療意義重大。TNBC病人T1和T2期pCR病人比率比T3和T4期高(P<0.05)，并隨著分期推進(jìn)pCR病人比率不斷降低，說(shuō)明T分期可能通過(guò)一定機(jī)制影響機(jī)體pCR病人比率，能通過(guò)T分期間接反映病人發(fā)病程度。TNBC病人pCR病人比率與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)[14]，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移說(shuō)明癌癥處于擴(kuò)散狀態(tài)，侵襲機(jī)體防御系統(tǒng)，導(dǎo)致人體免疫能力降低，進(jìn)而pCR病人比率下降。此外，術(shù)后pCR和非pCR病人TG、TCH、TBIL、FBG、BUN、HDLP水平差異不顯著(P>0.05)，而UA和ALB有明顯差異(P<0.05)。TNBC會(huì)引起機(jī)體免疫系統(tǒng)作用，進(jìn)而影響機(jī)體內(nèi)炎癥指標(biāo)及生化指標(biāo)，本結(jié)果顯示結(jié)果不一致，可能是樣本量較少或受試者生活環(huán)境及飲食不同導(dǎo)致的。本研究結(jié)果顯示，pCR病人GG基因型頻顯著高于非pCR，病人OCA2基因rs4778137多態(tài)性影響TNBC病人pCR率(P<0.05)，說(shuō)明OCA2基因rs4778137遺傳和變異可能參與調(diào)控TNBC病人緩解過(guò)程。Logistic回歸分析顯示，TNBC病人病程不是pCR率的獨(dú)立影響因素(P>0.05)，而T分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、rs4778137多態(tài)性、UA、ALB是TNBC病人pCR率的危險(xiǎn)因素，應(yīng)該從以上幾方面對(duì)病人進(jìn)行保護(hù)和預(yù)防。

綜上所述，rs4778137多態(tài)性和TNBC病人新輔助化療pCR率有關(guān)，GG基因型病人有較高的pCR率。病程在2年以上、處于T3和T4期、存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病人的pCR率較低。T分期、淋巴轉(zhuǎn)移、OCA2基因rs4778137多態(tài)性是TNBC病人pCR率的獨(dú)立影響因素。