馬俊娥，崔湘鏵，劉 芮，韓 歡，鄔開朗，劉 芳，祝成亮

（1.武漢大學(xué)人民醫(yī)院檢驗科,武漢 430060; 2 武漢大學(xué)病毒學(xué)國家重點實驗室,武漢 430072）

2019年12月在湖北省武漢市發(fā)現(xiàn)多例不明原因的病毒性肺炎病例，經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)是由一種新型冠狀病毒所致[1],大多數(shù)初始患者曾接觸過中國武漢華南海鮮批發(fā)市場的商品，提示該疾病是一種人畜共患病[2]。2020年2月11日，國際病毒分類學(xué)委員會將該新型冠狀病毒命名為嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒2 (severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-COV-2),同日，世界衛(wèi)生組織將這種病毒感染引起的疾病稱為2019 冠狀病毒?。╟oronavirus disease-2019，COVID-19）[3]。近年來，冠狀病毒已多次引起較為嚴(yán)重的疫情,如2003年首先在廣東省暴發(fā)的嚴(yán)重急性呼吸系統(tǒng)綜合征（severe acute respiratory syndrome，SARS）疫情，隨后蔓延至全球，引起全球流行，病死率接近10%[4]

；2012年阿拉伯半島暴發(fā)中東呼吸綜合征（Middle East respiratory syndrome，MERS）疫情，病死率高達(dá)37.1%[5]。與這些疾病不同的是：新型冠狀病毒感染引起的肺炎傳染性更強，已成為全球衛(wèi)生緊急事件[6]。冠狀病毒是一種RNA 病毒，在人類宿主中引起廣泛的呼吸道、胃腸道和神經(jīng)系統(tǒng)疾病[7],該病毒感染的患者會出現(xiàn)發(fā)熱、不適、干咳、肌肉酸痛，嚴(yán)重者甚至出現(xiàn)呼吸困難[8]。如果這種疾病沒有迅速得到治療和控制，可能會有更多的人被感染乃至死亡。因此，找到更好地快速診斷、治療和預(yù)防該病的方法尤為重要。對于COVID-19 的實驗室診斷已有多項研究，如梁穎等[9]人通過回顧性分析探討了COVID-19 患者抗體檢測的診斷價值，陳星等[10]人觀察分析患者多種血液學(xué)指標(biāo)的變化，為臨床診療提供依據(jù)；研究已經(jīng)證實，COVID-19 患者體內(nèi)有炎癥因子、細(xì)胞因子的升高，尤其是重癥和危重癥患者[11]。因此，本文重點研究了血漿CRP，PCT 和IL-6 水平在COVID-19 診斷中的作用，為今后臨床診斷和治療提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取2020年1月1日～2月2日武漢大學(xué)人民醫(yī)院收治的96 例COVID-19 患者，并按嚴(yán)重程度分類，確診病例及分類標(biāo)準(zhǔn)均符合國家衛(wèi)生健康委員會發(fā)布的《新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案（試行第五版）》[12]。根據(jù)上述分類標(biāo)準(zhǔn)，將患者分為普通型41例，其中男性22例、女性19例，平均年齡62.3±14.0 歲；重型45 例，其中男性24 例、女性21 例，平均年齡63.7±12.7 歲；危重型10 例，其中男性5 例、女性5 例，平均年齡55.4±11.3 歲。另選取40 例健康者作為對照組，其中男性20 例、女性20 例，平均年齡61.5±12.5 歲。四組研究對象年齡、性別比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=1.058，P=0.369；F=0.151，P=0.984）。對照組與試驗組做相同的檢查，包括一般臨床檢查、CT，實時逆轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)，檢測新型冠狀病毒。本研究通過武漢大學(xué)人民醫(yī)院臨床研究倫理委員會審核（WDRY2020-K066），所有對象調(diào)查前均簽署知情同意書。

1.2 儀器與試劑 采用巴迪泰(Boditech Med Inc)公司iCHROMATMReader 免疫熒光分析儀(韓國Boditech 公司)及配套試劑檢測CRP 水平;Cobas e601 全自動電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀及其配套試劑(Cobas e601,Roche,Switzerland)檢測PCT 水平；多功能自動血細(xì)胞分析儀及其配套試劑 (Sysmex XN900,Kobe,Japan)檢測IL-6 水平。

1.3 方法 采集空腹?fàn)顟B(tài)患者的靜脈血3～5ml，3 500 r/min 離心15 min,收集血清用于檢測。檢測方法嚴(yán)格按照相應(yīng)儀器及試劑說明書進(jìn)行。各指標(biāo)的正常值范圍分別為：CRP:0～10 mg/L，PCT:0.00～0.05 ng/ml，IL-6:0～7 pg/ml。收集各指標(biāo)檢測結(jié)果進(jìn)行相應(yīng)的統(tǒng)計學(xué)分析。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 采用IBM SPSS 25.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料（性別）以n表示，組間比較采用χ2檢驗，對計量資料進(jìn)行正態(tài)性檢驗、方差齊性檢驗，正態(tài)分布的計量資料（年齡）以均數(shù) ± 標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，非正態(tài)分布資料（各指標(biāo)值）以中位數(shù)[ 四分位數(shù)間距]表示，多組間比較采用Kruskal-Wallis 檢驗，兩組間比較采用Mann-Whitney 檢驗，P<0.05 為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 COVID-19 組患者和對照組的PCT 和CRP 水平 見表1 和圖1。COVID-19 組患者的PCT 和CRP 水平均明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（均P< 0.05）。

圖1 COVID-19 組與對照組PCT，CRP 水平比較

表1 COVID-19 組與對照組PCT，CRP 水平比較[M(P25～P75)]

2.2 普通型、重型和危重型患者的PCT，IL-6 和CRP 水平比較 見表2 和圖2。PCT，IL-6 和CRP水平在普通型、重型和危重型之間進(jìn)行組間比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜ 0.05）。多重比較發(fā)現(xiàn)，普通型的PCT和CRP水平明顯低于重型和危重型，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（PCT:Z=-3.556，-2.480，均P＜ 0.05;CRP:Z=-4.576，-2.875，均P＜ 0.05），但重型和危重型之間兩者差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（PCT:Z=-0.667，CRP:Z=-0.240,均P>0.05）；普通型的IL-6 水平明顯低于危重型，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（Z=-3.118，P＜ 0.05），但普通型與重型，重型與危重型之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（Z=-2.161,-1.954,均P>0.05）。

表2 三型COVID-19 患者PCT，IL-6，CRP 水平比較[M(P25～P75)]

圖2 三型COVID-19 患者的PCT，IL-6 和CRP 水平

2.3 診斷COVID-19 患者的潛在標(biāo)志物 見表3 和圖3。ROC 曲線顯示，PCT 和CRP 診斷COVID-19患者的AUC 分別為0.754 和1.000，CRP 診斷COVID-19 患者的曲線下面積較大；CRP 濃度為2.97 mg/L 是診斷COVID-19 的臨界值(敏感度100%，特異度97.5%)。

表3 PCT 和CRP 診斷COVID-19 患者的曲線下面積

圖3 PCT 和CRP 診斷COVID-19 患者的ROC 曲線

2.5 評估重型和危重型COVID-19 患者的潛在標(biāo)志物 見表4 和圖4。PCT，IL-6，CRP 評估重型和危重型COVID-19 患者的AUC 分別為0.728，0.666和0.788，CRP 評估重型和危重型COVID-19 患者的曲線下面積最大；CRP 濃度72.70 mg/L 為最佳臨界值 ，敏感度為63.6%，特異度為82.9%。采用logistic 回歸分析建立聯(lián)合診斷模型，三指標(biāo)聯(lián)合診斷的ROC 曲線下面積為0.814，敏感度65.5%，特異度90.2%。

表4 評估重型和危重型COVID-19 患者的曲線下面積

圖4 評估重型和危重型COVID-19 患者的ROC 曲線

2.6 評估危重型COVID-19 患者的潛在標(biāo)志物 見表5和圖5。PCT，IL-6 和CRP 評估危重型COVID-19患者的AUC 分別為0.637，0.749 和0.644，IL-6評估危重型COVID-19 患者的ROC 曲線下面積最大;IL-6 濃度26.90 pg/ml 為診斷臨界值 (敏感度52.7%，特異度80.5%)。通過logistic 回歸分析建立聯(lián)合診斷模型，結(jié)果顯示聯(lián)合診斷并沒有提高診斷效率。

圖5 評估危重型COVID-19 患者的ROC 曲線

表5 評估危重型COVID-19 患者的曲線下面積

3 討論

COVID-19 作為突發(fā)公共衛(wèi)生事件，傳染性強，病情變化迅速，雖然我國疫情已得到有效控制，但國外疫情依舊廣泛蔓延，如果不及時診斷和治療，這種疾病可能會變得更加嚴(yán)重。目前該疾病主要通過核酸檢測進(jìn)行診斷，但受方法學(xué)局限以及采樣樣本和所選試劑等因素的影響，存在部分假陰性結(jié)果[13]，雖然影像學(xué)檢查也可輔助診斷，但也缺乏特異性。許多炎癥反應(yīng)細(xì)胞以及細(xì)胞因子與病毒感染的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[14]，其中包括CRP，PCT 和IL-6。CRP 是急性時相反應(yīng)蛋白之一，發(fā)生感染后其值升高，比正常值高幾百倍甚至上千倍，升高的幅度與感染的程度呈正相關(guān)，臨床上可用于自身免疫性及感染性疾病的診斷和檢測。PCT 與機體感染和炎癥介質(zhì)的釋放密切相關(guān)，越來越多的證據(jù)支持通過檢測血清PCT 濃度可早期診斷感染病原體的種類、評價感染的嚴(yán)重程度、指導(dǎo)用藥及判斷預(yù)后。IL-6 是一種功能廣泛的多效性細(xì)胞因子，可調(diào)節(jié)多種細(xì)胞的生長與分化，具有調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答、急性期反應(yīng)的功能，并在機體的抗感染免疫反應(yīng)中起重要作用。有研究表明，COVID-19 患者也有細(xì)胞因子分泌增加，最嚴(yán)重的患者會出現(xiàn)細(xì)胞因子風(fēng)暴，其觸發(fā)免疫系統(tǒng)來攻擊身體[15]，因此檢測這些生物標(biāo)志物可能對于COVID-19 的診斷具有一定的價值。

本文旨在研究CRP，PCT 和IL-6 是否可作為COVID-19 的診斷或預(yù)后指標(biāo)，結(jié)果顯示：COVID-19 患者的CRP 和PCT 水平明顯高于健康受試者，因此PCT 和CRP 對COVID-19 患者具有較高的診斷價值；同時通過比較三個指標(biāo)的ROC 曲線下面積，其中CRP 評估重型、危重型COVID-19的效能最好，并且這三個指標(biāo)聯(lián)合檢測可以提高評估效能，IL-6 對于評估危重型COVID-19 效能最好。我們的研究結(jié)果與之前新冠肺炎實驗室診斷相關(guān)研究所得結(jié)論基本一致[16-17]，均可說明在COVID-19患者中，有細(xì)胞因子以及炎癥因子的升高，且不同嚴(yán)重程度的患者，升高水平不同，因此這些指標(biāo)可用于患者預(yù)后的評估。

綜上所述，我們得到CRP，PCT 和IL-6 在COVID-19 患者的診斷中發(fā)揮重要作用，并且其血漿水平可以評估疾病的嚴(yán)重程度，三個指標(biāo)聯(lián)合檢測具有較高的預(yù)測價值。本研究為COVID-19 的臨床診治提供了重要的依據(jù)。