楊深應(yīng) 劉常遜 上官云蘭 陶明寶 柴連周 趙興蕊

摘要：目的 建立高效液相色譜法（HPLC）同時(shí)測(cè)定感冒疏風(fēng)丸中蛇床子素和二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯含量的方法。方法 采用Agilent 5TC-C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈-水（49∶51），流速1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)330 nm，柱溫30.0 ℃。結(jié)果 蛇床子素和二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯線(xiàn)性范圍分別為0.0451～1.3533μg（r=0.9999）和0.0164～0.4911μg（r=0.9999）;平均回收率分別為98.74%和97.09%，RSD分別為0.35%和0.29%。結(jié)論 該方法專(zhuān)屬性強(qiáng)、結(jié)果準(zhǔn)確、操作簡(jiǎn)便，可用于感冒疏風(fēng)丸的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：感冒疏風(fēng)丸;高效液相色譜法;蛇床子素;二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯;含量測(cè)定

中圖分類(lèi)號(hào)：R285.5?? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A?? 文章編號(hào)：1007-2349（2021）09-0072-04

Simultaneous Determination of Osthol and Dihydrooxanol AngelicaAcid Ester in Ganmao Shufeng Pills by HPLC

YANG Shen-ying1， LIU Chang-xun2， SHANG-guan Yun-lan3，TAO Ming-bao1， CHAI Lian-zhou2， ZHAO Xing-rui2

（1. Food and Drug Inspection and Testing Center of Baoshan City， Baoshan 678000， China;2. Baoshan Junior College of Traditional Chinese Medicine， Baoshan 678000， China; 3. School of Pharmacy， Dali University， Dali 671000， China）

【Abstract】Objective： To establish a high-performance liquid chromatography （HPLC） method for the simultaneous determination of osthol and dihydrooxanol angelica acid ester in Ganmao Shufeng Pills. Methods： An agilent 5TC-C18 column （4.6 mm×250 mm， 5 μm） was used， the mobile phase was acetonitrile-water （49：51）， the flow rate was 1.0 mL/min， the detection wavelength was 330 nm， and the column temperature was 30.0 ℃. Results： The linear ranges of osthole and dihydrooxanol angelica acid este were 0.0451～1.3533μg （r=0.9999） and 0.0164～0.4911μg （r=0.9999）， respectively and the average recoveries were 98.74% and 97.09% respectively， and the RSDs were0.35% and 0.29%. It is 0.35% and 0.29% respectively. Conclusion： The method has strong specificity， accurate results and simple operation， and can be used for the quality control of Ganmao Shufeng Pills.

【Key words】Ganmao Shufeng Pills; High Performance Liquid Chromatography; Osthole; Dihydrooxanol Angelica Acid Ester; Content Determination

感冒疏風(fēng)丸收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十三冊(cè)》，由麻黃絨（炙）、苦杏仁、桂枝、獨(dú)活等十二味藥組成，具有辛溫解表、宣肺和中的功效，用于風(fēng)寒感冒、發(fā)熱咳嗽、頭痛怕冷、鼻流清涕、骨節(jié)酸痛、四肢倦怠等癥[1]。處方中獨(dú)活為傘形科植物重齒毛當(dāng)歸Angelica pubescens Maxim.f.biserrata Shan et Yuan的干燥根，具有祛風(fēng)除濕，通痹止痛的功效[2]。感冒疏風(fēng)丸有水蜜丸和大蜜丸2種劑型，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中僅有顯微鑒別及芍藥苷的薄層色譜鑒別，無(wú)含量測(cè)定項(xiàng)目[1]，不利于控制藥品的質(zhì)量?，F(xiàn)參考有關(guān)文獻(xiàn)[2-10]，建立了高效液相色譜（HPLC）法同時(shí)測(cè)定感冒疏風(fēng)丸中獨(dú)活的有效成分蛇床子素和二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯含量的方法，為提高感冒疏風(fēng)丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1260型高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司）;Sartorius BP211D型電子天平（德國(guó)賽多利斯公司）;SK2510LHC型超聲波清洗器（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）;A2S-10-BE超純水機(jī)（美國(guó)艾科浦國(guó)際有限公司）。

1.2 試藥 蛇床子素對(duì)照品（批號(hào)：110822-201710，純度為99.5%），二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯對(duì)照品（批號(hào)：111583-201605，純度為98.6%），均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院;感冒疏風(fēng)丸（昆明中藥廠(chǎng)有限公司生產(chǎn)，水蜜丸規(guī)格為6 g/袋，批號(hào)為200717，280780，281810，280262，271362，27128;大蜜丸規(guī)格為9 g/丸，批號(hào)為100070，180138，190024，190089，180136，190116，180187）;乙腈為色譜純（默克股份兩合公司）;水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent 5TC-C 18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）;流動(dòng)相：乙腈-水（49∶51）;檢測(cè)波長(zhǎng)：330 nm;流速：1.0 mL/min;柱溫：30.0 ℃;進(jìn)樣量：10 μL;理論塔板數(shù)按二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯峰計(jì)算應(yīng)不低于6 000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取蛇床子素對(duì)照品22.67 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解定容至刻度，得蛇床子素對(duì)照品儲(chǔ)備液;精密稱(chēng)取二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯對(duì)照品16.60 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解定容至刻度，得二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯對(duì)照品儲(chǔ)備液。再分別精密量取蛇床子素對(duì)照品儲(chǔ)備液2 mL、二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯對(duì)照品儲(chǔ)備液1 mL，置20 mL容量瓶中，加甲醇制成每1 mL含蛇床子素45.11 μg和二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯16.37 μg的混合對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取水蜜丸，研細(xì)，取約3 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中;或取重量差異項(xiàng)下的大蜜丸，剪碎，混勻，取20 g，精密稱(chēng)定，精密加入硅藻土10 g，研勻，取7.5 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，稱(chēng)定重量，超聲處理（功率250W，頻率40kHz）40 min，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備 按處方比例及工藝配制缺獨(dú)活的陰性樣品，按供試品溶液制備方法，制備陰性對(duì)照溶液。

2.3 專(zhuān)屬性試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各10 μL，依法測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果陰性對(duì)照色譜圖中在與對(duì)照品以及供試品色譜相對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間處無(wú)色譜峰出現(xiàn)，表明該方法專(zhuān)屬性好。色譜圖見(jiàn)圖1。

2.4 線(xiàn)性關(guān)系考察 分別精密吸取每1 mL含蛇床子素45.11 μg和二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯16.37 μg的混合對(duì)照品溶液1、5、10、15、20、25、30μL，進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積，以對(duì)照品進(jìn)樣質(zhì)量為橫坐標(biāo)（X）、色譜峰峰面積為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)行線(xiàn)性回歸，分別得蛇床子素和二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯回歸方程為Y=3144.66X+7.68，r=0.9999（n=7）;Y=2767.62X+2.15，r=0.9999（n=7）。結(jié)果表明，蛇床子素、二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯進(jìn)樣質(zhì)量分別在0.0451～1.3533μg和0.0164～0.4911μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下的混合對(duì)照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6 次，記錄峰面積。結(jié)果蛇床子素、二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯峰面積的RSD分別為0.62%和0.66%（n=6），表明該儀器精密度良好。

1.蛇床子素;2.二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯;A.對(duì)照品;B.供試品;C.陰性對(duì)照?qǐng)D1 高效液相色譜圖

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取“2.2.2”項(xiàng)下制備好的同一供試品溶液，分別在0、2、4、8、16、24、32h進(jìn)樣10 μL，記錄峰面積。結(jié)果蛇床子素和二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯峰面積的RSD分別為1.44%和1.19%，表明供試品溶液在32h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱(chēng)取同一批樣品（批號(hào)：200717）6份，按“2.2.2”項(xiàng)下制備供試品溶液，測(cè)定蛇床子素和二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯的平均含量為0.2102mg/g和0.0803mg/g，RSD分別為0.71%和0.73%（n=6）。表明方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 稱(chēng)取已知含量的感冒疏風(fēng)丸（批號(hào)：200717）6份，每份約1.5 g，精密稱(chēng)定，分別置具塞錐形瓶中，精密加入每1mL分別含蛇床子素0.0632mg、二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯0.0242mg的混合對(duì)照品溶液液5mL，再精密加入甲醇20mL，按“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液制備方法操作，進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.9 樣品含量測(cè)定 取不同批號(hào)的樣品，按供試品溶液制備方法制備溶液，按擬訂色譜條件測(cè)定樣品中蛇床子素、二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯的含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

3 討論

3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 采用二極管陣列檢測(cè)器在190～400 nm波長(zhǎng)下對(duì)蛇床子素、二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯對(duì)照品溶液進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果蛇床子素在322 nm處有最大吸收，二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯在330 nm處有最大吸收，參考《中華人民共和國(guó)藥典》2020年版一部“獨(dú)活”項(xiàng)下含量測(cè)定的檢測(cè)波長(zhǎng)，故本實(shí)驗(yàn)選用330 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2 提取條件的選擇 經(jīng)查閱文獻(xiàn)，選擇提取溶劑為甲醇;考察了超聲、加熱回流2種提取方式，結(jié)果表明兩者提取效率相當(dāng)，但超聲提取操作簡(jiǎn)便，故選用超聲提取;分別考察了超聲30、40、50、60 min的提取情況，結(jié)果表明超聲40 min待測(cè)成分已提取完全，因此確定超聲時(shí)間為40 min。

3.3 流動(dòng)相的選擇 本實(shí)驗(yàn)考察了甲醇-水體系、乙腈-水體系，結(jié)果表明乙腈的洗脫能力更強(qiáng)，峰形較好，通過(guò)考察不同比例的流動(dòng)相，最終選擇以乙腈-水（49∶51）為流動(dòng)相，該流動(dòng)相基線(xiàn)較平穩(wěn)，保留時(shí)間適中，分離度、拖尾因子等色譜參數(shù)都能達(dá)到要求。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)建立的HPLC法測(cè)定感冒疏風(fēng)丸中蛇床子素、二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯含量的方法，操作簡(jiǎn)便，重復(fù)性好，專(zhuān)屬性高，可作為感冒疏風(fēng)丸的質(zhì)量控制的檢測(cè)方法。

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（收稿日期：2021-04-22）