楊豪，曾范慧

駐馬店市中心醫(yī)院，河南 駐馬店 463400

骨質(zhì)疏松是由于骨量低、骨微結(jié)構(gòu)遭破壞而引發(fā)的全身性骨骼疾病。老年人群較為常見，絕經(jīng)后的女性發(fā)病率也較高［1］。隨著老齡化日益加重，骨質(zhì)疏松患者發(fā)病率也逐年上升［2］。有文獻(xiàn)報道，僅骨質(zhì)疏松所致髖部骨折患者中1年內(nèi)因并發(fā)癥致死率約20%，50%左右患者致殘，嚴(yán)重影響患者的生活［3］。目前增強骨質(zhì)的常見藥物有雌激素、降鈣素、生長激素等，但是長期使用藥物引起的不良反應(yīng)不容忽視［4］。牛膝具有補肝腎、強筋骨、活血化瘀的功效［5］。牛膝多糖為牛膝的主要成分之一。研究表明，牛膝多糖可促進(jìn)關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞增殖，可應(yīng)用于骨性關(guān)節(jié)炎［6］。Wnt/β-連環(huán)蛋白（β-catenin）通路在骨發(fā)育、分化及修復(fù)等過程中具有重要調(diào)節(jié)作用。研究發(fā)現(xiàn)，激活Wnt/β-catenin通路可以調(diào)節(jié)骨代謝，促進(jìn)骨折愈合［7］。本研究基于Wnt/βcatenin通路探討牛膝多糖對骨質(zhì)疏松骨折大鼠骨代謝的調(diào)控作用，為臨床治療骨質(zhì)疏松骨折提供依據(jù)。

1 材料

1.1 動物清潔級SD雌鼠60只，體質(zhì)量270～290 g，購自上海吉輝實驗動物飼養(yǎng)有限公司，許可證號：SCXK（滬）2019-0001。飼養(yǎng)條件：12 h光照12 h黑暗，溫度（25±2）℃，相對濕度40%～60%，自由飲食和進(jìn)水。倫理批號：ZMDCH201902-03。

1.2 藥物與試劑牛膝多糖（純度≥98%，蘭州沃特萊斯生物科技有限公司，批號：130415）；尼爾雌醇（安徽圣鷹藥業(yè)有限公司，批號：190412）。生理鹽水（遼寧民康制藥有限公司，批號：20181204）；RNA提取試劑盒、反轉(zhuǎn)錄試劑盒（北京全式金生物技術(shù)有限公司，批號：180316、180520）；細(xì)胞裂解液（上海李記生物科技有限公司，批號：20180416003）；制膠試劑盒（北京德元國際科技有限公司，批號：20180912A）；電化學(xué)發(fā)光（electrochemi luminescence，ECL）試劑盒（上海炎熙生物科技有限公司，批號：181114C）；實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（real-time quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR）預(yù)混體系（SYBR GreenⅠ）（上海聯(lián)邁生物工程有限公司，貨號：RT0416135208）；堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）、骨鈣素（bone gla protein，BGP）、Ⅰ型前膠原氨基端前肽（type Iprocollagen propeptide，PINP）、Ⅰ型膠原蛋白交聯(lián)N端端肽（N-terminal typeⅠcollagen telopeptide，NTx）酶聯(lián)免疫（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒（武漢云克隆科技股份有限公司，批號：190106、190225、190218、190316）；抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate-resistant acid phosphatage，TRAP）ELISA試劑盒（上海酶聯(lián)生物科技有限公司，批號：20181013007）；蘇木精-伊紅（hematoxylin eosin，HE）染色試劑盒（武漢博士德生物工程有限公司，批號：1805A）；引物合成委托蘇州金唯智生物科技有限公司；β-catenin、RUNT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2（runt-related transcription factor 2，Runx2）、骨形成轉(zhuǎn)錄因子（Osterix）、磷酸化β-連環(huán)蛋白（phosphorylationβ-catenin，p-β-catenin）、β-actin單克隆抗體及辣根過氧化物酶（horse radish peroxidase，HRP）二 抗（美 國Abcam公 司，批 號：180611、180425、180326、180107、180922、180715）；蛋白定量試劑盒（美國Sigma公司，批號：1904112）。

1.3 儀器HBS-1096A型酶標(biāo)儀（南京德鐵實驗設(shè)備有限公司）；HHQ-3558型組織切片機（杭州艾普儀器設(shè)備有限公司）；BK-T型攤烤片機（山東博科生物產(chǎn)業(yè)有限公司）；BX53M型光學(xué)顯微鏡（日本Olympus公司）；Mini-PROTEAN Tetra型電泳槽和Trans-Blot Turbo型蛋白轉(zhuǎn)印系統(tǒng)（美國Bio-Rad公司）；AriaDNA型RT-qPCR儀（加拿大魯美科思公司）；UltraFocus型雙能X射線小動物骨密度儀（美國Faxitron公司）。

2 方法

2.1 動物模型的復(fù)制與給藥從60只大鼠中隨機挑出50只進(jìn)行去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠模型的制備，打開大鼠腹腔，切除大鼠兩側(cè)卵巢并縫合傷口，余下10只僅開腹腔、切除卵巢周圍的脂肪組織，不進(jìn)行卵巢切除并縫合傷口，記作假手術(shù)組。正常飼養(yǎng)10周后，使用雙能X射線骨密度儀檢測60只大鼠骨密度值，當(dāng)建模大鼠骨密度值低于假手術(shù)組大鼠骨密度值平均數(shù)2.5個標(biāo)準(zhǔn)差以上為建模成功。然后將大鼠右側(cè)股骨中段切開骨膜，橫向鋸斷股骨，立即使用克氏針將斷骨固定后進(jìn)行傷口縫合。將建模成功的大鼠隨機分為5組，分別為模型組、陽性對照組及牛膝多糖高、中、低劑量組。建模術(shù)后第2天大鼠進(jìn)行藥物治療，陽性對照組大鼠灌胃0.21 mg·kg-1尼爾雌醇，牛膝多糖高、中、低劑量組分別灌胃8 g·kg-1、4 g·kg-1、2 g·kg-1牛膝多糖，假手術(shù)組和模型組分別灌胃同體積生理鹽水，每天1次，連續(xù)12周。

2.2 檢測大鼠骨密度（bone m ineral density，BMD）水平 分別于給藥前和給藥12周后通過雙能X線吸收測量法檢測大鼠股骨BMD水平，將雙能X線骨密度儀設(shè)置為Hi-red Small animal模式，檢測大鼠股骨BMD水平。

2.3 檢測大鼠骨代謝指標(biāo)給藥12周后，對大鼠進(jìn)行尾靜脈取血，收集血清，按照ELISA試劑盒說明書檢測血清ALP、BGP、PINP、NTx、TRAP水平。

2.4 骨組織病理學(xué)檢查每組隨機選擇3只大鼠，脫頸椎法處死后，取大鼠骨折端骨組織，經(jīng)過甲醛固定過夜后加入10%EDTA溶液中脫鈣4周。經(jīng)過包埋、切片后使用HE染色試劑盒進(jìn)行染色，操作參考產(chǎn)品說明書。經(jīng)過中性樹脂封片后，在光學(xué)顯微鏡下觀察骨組織骨小梁的數(shù)量、排列情況、形態(tài)及連續(xù)性等。

2.5 檢測骨質(zhì)疏松性骨折模型大鼠骨折端骨組織中β-catenin mRNA、Runx2 mRNA、Osterix mRNA水平每組隨機選擇3只大鼠，頸椎脫臼處死后，取大鼠骨折端骨組織，加入液氮進(jìn)行研磨，用RNA提取試劑盒提取組織中總RNA，使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒將總RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA。查找目的基因mRNA序列，設(shè)計出上下游引物。β-catenin上游引物：5′-TAGTACCGATAGCTAAACTG-3′，下游引物：5′-TAAGTACCTCAATACGTAGA-3′，產(chǎn)物長度為121 bp；Runx2上游引物為：5′-TGACTTACGTCCAGTCAACG-3′，下 游 引 物 為：5′-TGGTACCTAGCTGGTAATAC-3′，產(chǎn)物長度為123 bp；Osterix上游引物：5′-TAACGTGCATCGGCTAACGT-3′，下游引物：5′-GATCCGTGCGGTACCATACT-3′，產(chǎn)物長度為119 bp；β-actin上游引物：5′-TGCACTTGCATGACTCGAAT-3′，下游引物：5′-GATTACCATCGGATCGGATA-3′，產(chǎn)物長度132 bp。按照cDNA 0.5μL，上下游引物各1μL，熒光預(yù)混試劑1μL，dNTP 1μL，ddH2O 5.5μL，總體積10μL的體系加入PCR的96孔板中。退火溫度設(shè)置為58℃，40個循環(huán)。反應(yīng)結(jié)束后，使用配套熒光采集系統(tǒng)得到各樣品Ct值，以β-actin為持家基因，根據(jù)2-ΔΔCt得出目的基因水平。

2.6 W estem Blot法檢測骨質(zhì)疏松性骨折模型大鼠骨折端骨組織中β-catenin、Runx2、Osterixl及p-β-catenin蛋白表達(dá)每組隨機選擇3只大鼠，頸椎脫臼處死后，取大鼠骨折端骨組織，將骨折端骨組織中加入少許液氮，研磨勻漿后，加入細(xì)胞裂解液，在4℃搖床中過夜裂解后，10 000×g離心5 min，上清即為細(xì)胞總蛋白。用細(xì)胞核蛋白提取試劑盒提取細(xì)胞核蛋白；加入上樣緩沖液并在沸水中煮沸5 min使蛋白變性；用制膠試劑盒制膠并上樣進(jìn)行電泳，電泳結(jié)束后轉(zhuǎn)膜，使用5%脫脂牛奶封閉，一抗孵育過夜，更換二抗室溫孵育2 h，在暗室中使用ECL發(fā)光液顯色，經(jīng)過顯影液、定影液處理后，在膠片上顯示出目的條帶。用掃描儀將膠片上的條帶進(jìn)行灰度值分析，以β-actin為參考，計算目的蛋白相對表達(dá)水平。

2.7 統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 20.0軟件對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，實驗數(shù)據(jù)均采用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間比較使用單因素方差分析，兩組間比較使用SNK-q檢驗。P＜0.05認(rèn)為具有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 對骨質(zhì)疏松性骨折模型大鼠股骨BMD水平的影響50只建模大鼠，共48只建模成功。模型組和陽性對照組每組9只，牛膝多糖高、中、低劑量組每組10只。大鼠治療期間，由于灌胃操作不當(dāng)導(dǎo)致牛膝多糖高劑量組和中劑量組分別死亡1只。股骨BMD水平檢測結(jié)果顯示：治療前，與假手術(shù)組比較，模型組、陽性對照組和牛膝多糖高、中、低劑量組大鼠BMD水平均顯著降低（P＜0.05），各組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。治療后，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠BMD水平顯著降低（P＜0.05）；與模型組比較，牛膝多糖高、中、低劑量組與陽性對照組大鼠BMD水平顯著升高（P＜0.05）。見表1。

表1 對骨質(zhì)疏松性骨折模型大鼠股骨BMD水平的影響 （±s）

表1 對骨質(zhì)疏松性骨折模型大鼠股骨BMD水平的影響 （±s）

注：與假手術(shù)組比較，*P＜0.05；與模型組比較，＃P＜0.05

組別 n治療前/mg·cm-2 治療后/mg·cm-2 10 268.44±21.24 269.09±20.05模型組 9 209.71±20.09* 197.26±15.36*陽性對照組 9 210.39±19.14* 243.47±12.01＃牛膝多糖高劑量組 9 214.33±33.54* 258.66±10.52＃牛膝多糖中劑量組 9 207.54±20.48* 242.21±19.33＃牛膝多糖低劑量組 10 209.64±26.98* 227.99±11.15假手術(shù)組＃

3.2 大鼠血清骨代謝指標(biāo)與假手術(shù)組比較，模型組大鼠血清ALP、BGP和PINP水平顯著降低（P＜0.05），NTx、TRAP水平顯著升高（P＜0.05）；與模型組比較，牛膝多糖高、中、低劑量組與陽性對照組大鼠血清ALP、BGP和PINP水平顯著升高（P＜0.05），NTx、TRAP水平顯著降低（P＜0.05）。見表2。

表2 大鼠血清骨代謝指標(biāo) （±s）

表2 大鼠血清骨代謝指標(biāo) （±s）

注：與假手術(shù)組比較，*P＜0.05；與模型組比較，＃P＜0.05

組別 n ALP/U·L-1 BGP（ρ/μg·L-1） PINP（ρ/μg·L-1）NTx（c/μmol·L-1）TRAP（ρ/μg·L-1）1.65 1.48.±0.34模型組 9 112.33±11.45* 0.91±0.13* 26.44±5.85* 19.35±4.87* 2.85±0.56*陽性對照組 10 156.70±15.05＃ 1.45±0.25＃ 62.81±7.12＃ 13.12±3.06＃ 2.28±0.16＃牛膝多糖高劑量組9 188.45±13.21＃ 1.71±0.18＃ 84.33±10.86＃ 10.01±1.82＃ 1.77±0.39＃牛膝多糖中劑量組9 155.38±18.33＃ 1.42±0.18＃ 65.50±7.01＃ 13.54±1.08＃ 2.21±0.25＃牛膝多糖低劑量組10 125.44±12.08＃ 1.19±0.12＃ 51.27±6.24＃ 16.99±1.39＃ 2.56±0.17假手術(shù)組 10 200.89±22.06 2.05±0.21 93.45±12.98 8.28±＃

3.3 大鼠骨折端骨組織病理學(xué)變化假手術(shù)組大鼠骨小梁粗大致密，粗細(xì)均勻且結(jié)構(gòu)連續(xù)性好；模型組大鼠骨小梁數(shù)量減少，排列凌亂且稀疏，骨小梁連接性差，存在大片無骨小梁骨髓區(qū)；陽性對照組大鼠骨小梁連續(xù)性較好；牛膝多糖高、中、低劑量組隨著劑量的增加，骨小梁逐漸數(shù)量增多，形態(tài)增粗，連續(xù)性增加。見圖1。

圖1 大鼠骨折端骨組織病理學(xué)觀察（HE染色，×100）

3.4 對骨質(zhì)疏松性骨折模型大鼠骨折端骨組織中β-catenin m RNA、Runx2 m RNA、Osterix m RNA水平的影響與假手術(shù)組比較，模型組大鼠骨折端骨組織β-catenin mRNA、Runx2 mRNA、Osterix mRNA水平顯著降低（P＜0.05）；與模型組比較，牛膝多糖高、中、低劑量組與陽性對照組大鼠骨折端骨組織β-catenin mRNA、Runx2 mRNA、Osterix mRNA水平顯著升高（P＜0.05）。見表3。

表3 RT-qPCR檢測骨折端骨組織中β-catenin m RNA、Runx2 m RNA、Osterix m RNA表達(dá) （±s）

表3 RT-qPCR檢測骨折端骨組織中β-catenin m RNA、Runx2 m RNA、Osterix m RNA表達(dá) （±s）

注：與假手術(shù)組比較，*P＜0.05；與模型組比較，＃P＜0.05

組別 n β-catenin mRNA Runx2 mRNA Osterix mRNA假手術(shù)組0.88±0.21 1.25±0.45 0.74±0.21模型組 3 0.32±0.09* 0.47±0.06* 0.11±0.02*對照組 3 0.45±0.06＃ 0.72±0.12＃ 0.46±0.06＃牛膝多糖高劑量組 3 0.67±0.13＃ 0.95±0.17＃ 0.63±0.12＃牛膝多糖中劑量組 3 0.45±0.05＃ 0.76±0.12＃ 0.45±0.08＃牛膝多糖低劑量組 3 0.39±0.03＃ 0.58±0.08＃ 0.33±0.04 3＃

3.5 對骨質(zhì)疏松性骨折模型大鼠骨折端骨組織中β-catenin、胞核β-catenin、Runx2、Osterixl蛋白及p-β-catenin表達(dá)的影響與假手術(shù)組比較，模型組大鼠骨折端骨組織β-catenin、胞核β-catenin、Runx2、Osterixl蛋白表達(dá)顯著下調(diào)（P＜0.05），p-β-catenin/β-catenin水平顯著升高（P＜0.05）；與模型組比較，牛膝多糖高、中、低劑量組與陽性對照組大鼠骨折端骨組織β-catenin、胞核βcatenin、Runx2、Osterixl蛋白表達(dá)顯著上調(diào)（P＜0.05），p-β-catenin/β-catenin水平顯著降低（P＜0.05）。見圖2、表4。

表4 骨折端骨組織中β-catenin、胞核β-catenin、Runx2、Osterixl蛋白及p-β-catenin表達(dá)檢測 （±s）

表4 骨折端骨組織中β-catenin、胞核β-catenin、Runx2、Osterixl蛋白及p-β-catenin表達(dá)檢測 （±s）

注：與假手術(shù)組比較，*P＜0.05；與模型組比較，＃P＜0.05

-actin假手術(shù)組 3 0.88±0.11 0.62±0.12 0.30±0.07 1.19±0.21 0.組別 n β-catenin/β-actin胞核β-catenin/β-actin p-β-catenin/β-catenin Runx2/β-actin Osterix/β 71±0.12模型組 3 0.34±0.07* 0.15±0.02* 1.05±0.18* 0.45±0.06* 0.21±0.04*陽性對照組 3 0.69±0.10＃ 0.35±0.06＃ 0.69±0.12＃ 0.73±0.12＃ 0.47±0.06＃牛膝多糖高劑量組 3 1.06±0.18＃ 0.79±0.13＃ 0.42±0.08＃ 0.94±0.16＃ 0.65±0.12＃牛膝多糖中劑量組 3 0.75±0.15＃ 0.36±0.07＃ 0.55±0.03＃ 0.77±0.08＃ 0.44±0.05＃牛膝多糖低劑量組 3 0.58±0.11＃ 0.23±0.03＃ 0.81±0.11＃ 0.58±0.08＃ 0.35±0.05＃

圖2 骨折端骨組織中β-catenin、胞核β-catenin、Runx2、Osterixl蛋白及p-β-catenin表達(dá)檢測

4 討論

由于女性絕經(jīng)后卵巢功能減退導(dǎo)致骨代謝紊亂、破骨細(xì)胞活性增強，使骨小梁吸收加快，成骨細(xì)胞活性相對減弱，骨形成速度緩慢，最終導(dǎo)致骨丟失，發(fā)生骨質(zhì)疏松［8-9］。骨質(zhì)疏松表現(xiàn)為骨量減少、骨微結(jié)構(gòu)破壞、骨脆性增加，增加了骨折的風(fēng)險。骨質(zhì)疏松性骨折常見脊柱骨折、尺橈骨骨折、髖部骨折等，嚴(yán)重降低患者的生活質(zhì)量［10］。尼爾雌醇是雌激素類藥物，也是絕經(jīng)期婦女防治骨質(zhì)疏松的常用藥物，具有吸收好、效果明顯的特點［11］。但有研究表明，長期使用雌激素類藥物可能會引起頭痛、高血壓、子宮出血，增加患卵巢癌、子宮肌瘤的風(fēng)險等不良反應(yīng)［12］。本研究通過摘除大鼠雙側(cè)卵巢后，經(jīng)雙能X線骨密度儀檢測BMD水平均降低，骨質(zhì)疏松大鼠經(jīng)過右側(cè)股骨骨折后，骨質(zhì)疏松骨折大鼠模型制備成功。

本研究中牛膝多糖高、中、低劑量組和陽性對照組大鼠經(jīng)過12周的治療后，BMD水平顯著提高，骨代謝發(fā)生改善，提示常規(guī)西藥和牛膝多糖均能增強骨質(zhì)疏松癥大鼠的骨密度。本研究還發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過牛膝多糖治療后，大鼠血清NTx和TRAP水平較模型組均降低，表明牛膝多糖具有抑制骨吸收的作用。ALP在成骨過程中能水解磷酸酯和焦磷酸鹽活性，有利于骨礦化，促進(jìn)骨形成［13-14］。血清中ALP水平可能來自骨組織及肝臟等其他組織。因此，檢測機體骨形成水平還需更具特異性的骨形成指標(biāo)如BGP來驗證。BGP主要由成骨細(xì)胞合成，可與骨基質(zhì)結(jié)合，維持骨正常礦化速度，血清中BGP水平的高低可反映成骨細(xì)胞活性［15-16］。人體骨基質(zhì)中約90%的成分為Ⅰ型膠質(zhì)，PINP是Ⅰ型膠原前體轉(zhuǎn)化為膠原纖維質(zhì)的過程中裂解的產(chǎn)物之一。當(dāng)一個膠原分子合成，會產(chǎn)生一個PINP分子，因此，PINP直接反映出Ⅰ型膠原合成速率［17］。本研究結(jié)果顯示，牛膝多糖組大鼠血清中ALP、BGP和PINP水平均較模型組升高，表明牛膝多糖可促進(jìn)骨形成。骨質(zhì)吸收過程中，NTx是骨膠原纖維降解產(chǎn)物。因此，血清中NTx反映了骨吸收水平，是骨吸收的特異性指標(biāo)［14］。TRAP主要由破骨細(xì)胞釋放，對骨基質(zhì)中礦化底物進(jìn)行降解，反映了破骨細(xì)胞活性［15］。牛膝歸肝、腎經(jīng)，有補肝腎、健筋骨、活血化瘀的功效，可用于治療肝腎虧虛、跌打瘀痛、腰膝酸痛、筋骨無力等［18-19］。牛膝多糖是牛膝的活性成分之一，可用于治療骨性關(guān)節(jié)炎［20］。李開言等［21］研究表明，牛膝多糖含藥血清應(yīng)用于損傷的軟骨細(xì)胞可提高其增殖活性，對改善骨代謝、防治骨質(zhì)疏松癥具有重要意義，與本研究結(jié)果相符。

Wnt/β-catenin信號通路不僅在胚胎發(fā)育過程中發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用，在骨代謝過程中也十分關(guān)鍵［22-23］。β-catenin是Wnt/β-catenin信號通路中的關(guān)鍵分子，無Wnt信號激活時，β-catenin會被Axin/APC/GSK 3β復(fù)合體磷酸化并被溶酶體降解，當(dāng)Wnt信號被激活時，β-catenin不發(fā)生磷酸化，可進(jìn)入細(xì)胞核激活其下游信號因子Runx2［24］。Runx2是Runt家族成員之一，是成骨分化的特異性轉(zhuǎn)錄因子。研究表明，Runx2基因缺失可導(dǎo)致成骨細(xì)胞分化被抑制，骨膜成骨和軟骨內(nèi)成骨會被抑制［25］。此外，Runx2可促進(jìn)Ⅰ型膠原合成，提高ALP、BGP、PINP水平，抑制NTx和TRAP水平［26］。Osterix是Runx2下游信號因子，也是骨發(fā)育過程中主要調(diào)節(jié)因子之一。研究表明，Osterix基因敲除小鼠，Runx2表達(dá)正常，敲除小鼠Osterix基因無法正常表達(dá)，且成骨細(xì)胞無法發(fā)育為成骨細(xì)胞［27］。因此，Osterix與Runx2在成骨細(xì)胞增殖分化和骨代謝過程中發(fā)揮重要作用。本研究中經(jīng)過牛膝多糖治療后β-catenin、胞核β-catenin、Runx2和Osteri蛋白表達(dá)增加而p-β-catenin水平下降。郎小琴等［28］對老年骨質(zhì)疏松大鼠模型灌胃牛膝多糖發(fā)現(xiàn)，骨形成指標(biāo)水平均升高，而骨吸收指標(biāo)水平降低，與本研究結(jié)果一致；此外，還發(fā)現(xiàn)大鼠雙側(cè)最大應(yīng)力及斷裂吸收能量顯著升高，證實牛膝多糖不僅可改善老年骨質(zhì)疏松大鼠的骨代謝水平，還可降低骨折風(fēng)險。Li R等［29］研究顯示，微小核糖核酸-23b-3p可阻斷Wnt/β-catenin信號通路參與絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松，且發(fā)現(xiàn)p-β-catenin表達(dá)升高，而該通路下游的Runx2和Osterix表達(dá)下降。由此推測，牛膝多糖可提高大鼠骨密度，改善骨代謝水平可能與激活Wnt/β-catenin信號通路有關(guān)。

綜上所述，牛膝多糖可提高骨質(zhì)疏松骨折模型大鼠骨密度，改善大鼠骨代謝水平，減輕大鼠骨組織病理損傷，可能與激活Wnt/β-catenin信號通路，上調(diào)β-catenin、胞核β-catenin表達(dá)，下調(diào)p-β-catenin表達(dá)，從而促進(jìn)下游Runx2和Osterix表達(dá)有關(guān)。本研究為骨質(zhì)疏松骨折患者治療提供新思路。由于參與骨形成信號通路較多，是否影響其他信號通路尚未涉及，需進(jìn)行進(jìn)一步研究。