張新宇， 鄧 文， 李 霞， 周小娟

（1.新密市畜牧中心，河南新密452370；2.河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，河南鄭州450002；3.長(zhǎng)葛市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河南長(zhǎng)葛461500；4.河南省動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，河南鄭州450008）

環(huán)境高溫導(dǎo)致的熱應(yīng)激對(duì)家禽生產(chǎn)有嚴(yán)重的負(fù)面影響，其會(huì)導(dǎo)致家禽發(fā)生多種生理功能異常，如采食量和增重下降，內(nèi)分泌紊亂，電解質(zhì)平衡破壞（Quinteiro-Filho等，2010）等。除了上述生理變化，熱應(yīng)激還能破壞家禽腸道絨毛結(jié)構(gòu)，誘發(fā)腸道氧化應(yīng)激，并能降低腸道上皮通透性（Song等，2014）。腸道是養(yǎng)分吸收器官，腸道上皮屏障能有效阻擋有害物對(duì)機(jī)體的入侵（Moeser等，2007）。應(yīng)激反應(yīng)中，受損的腸道絨毛及上皮屏障，使得養(yǎng)分的吸收能力降低，而且來自腸道微生物的內(nèi)毒素易于入侵機(jī)體，誘導(dǎo)機(jī)體炎癥反應(yīng)，加劇應(yīng)激反應(yīng)，進(jìn)一步降低動(dòng)物的生產(chǎn)性能（Deng等，2012）。因此，調(diào)節(jié)腸道健康可能成為緩解家禽熱應(yīng)激一種有效途徑。

常見減輕家禽熱應(yīng)激的措施有給雞舍降溫，減少雞只密度，或在飲水中添加電解質(zhì)等（Balnave和Muheereza，1997）。還有一些是在日糧中添加維生素A、維生素C和植物酚酸等抗氧化物質(zhì)（Lin等，2002）。硫辛酸是一種具有脂溶性和水溶性的抗氧化劑，其抗氧化以及在緩解氧化應(yīng)激方面的作用已有報(bào)道（李建文等，2010；Somani等，2000）。研究表明，硫辛酸能改善肉雞的生產(chǎn)性能和抗氧化能力（Guo等，2014）。但在熱應(yīng)激肉雞中應(yīng)用鮮有報(bào)道，為此，本試驗(yàn)旨在研究飼糧中添加硫辛酸對(duì)熱應(yīng)激肉雞生長(zhǎng)性能、腸道形態(tài)和通透性及抗氧化性能的影響，為其在熱應(yīng)激肉雞中的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)和參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 本試驗(yàn)所使用的硫辛酸由西安瑞林生物科技有限公司（純度99%）提供。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)選取300只體重相近、健康狀況良好的28日齡Ross 308雄性肉雞，隨機(jī)分為3個(gè)處理，每個(gè)處理10個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10只雞。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，各處理初始體重差異不顯著（P>0.05）。其中，A組為對(duì)照組，飼喂基礎(chǔ)日糧，常溫飼養(yǎng)[（21±2）°C，相對(duì)濕度（60±5）%]；B、C組飼養(yǎng)于循環(huán)高溫環(huán)境[08:00～18:00，（33±2）°C；18:00～08:00，（21±2）°C；相對(duì)濕度（60±5）%]，分別在基礎(chǔ)日糧中添加0、300 mg/kg的硫辛酸。飼養(yǎng)試驗(yàn)在溫度和濕度智能控制的環(huán)控倉中進(jìn)行，環(huán)控倉由北京庫藍(lán)科技有限公司提供。飼養(yǎng)管理采用三層籠養(yǎng)，自由采食和飲水，23 h光照1 h黑暗，按常規(guī)免疫程序進(jìn)行免疫接種。試驗(yàn)期為28～42日齡。

1.3 試驗(yàn)飼糧 試驗(yàn)飼糧為玉米-豆粕型基礎(chǔ)飼糧，基礎(chǔ)飼糧參照NRC（1994）配制，組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.4 樣品采集與處理 在42日齡前夜20:00斷料，空腹12 h后稱重，并稱取剩料重。42日齡試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，每個(gè)處理隨機(jī)抽取1只體重接近平均值的雞，靜脈采血，分離血清，待測(cè)腸道通透性指標(biāo)、炎癥因子水平和抗氧化指標(biāo)；屠宰后分離腸道，分別采集回腸、盲腸腸段各2 cm。

1.5 指標(biāo)測(cè)定與方法

1.5.1 生長(zhǎng)性能測(cè)定 根據(jù)稱重和耗料量記錄計(jì)算平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）和料肉比（F/G）。

1.5.2 腸道形態(tài)檢測(cè) 待測(cè)腸段輕輕刮去食糜，以生理鹽水沖洗凈后置于10%福爾馬林中固定，經(jīng)過脫水包埋等處理后，制成5μm厚切片，用蘇木精-伊紅染色法染色。測(cè)定絨毛高度（VH）、隱窩深度（CD），并計(jì)算兩者比值（VH/CD）。

1.5.3 血清指標(biāo)測(cè)定 每頭雞靜脈采血10 mL，室溫下傾斜靜置1 h后，3000 r/min離心15 min，分離血清，-20℃冰箱保存。白介素-1（IL-1）、白介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α），D-乳酸和二胺氧化酶（DAO）含量以酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定，總抗氧化活性（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽還原酶（GSH）以及丙二醛（MDA）含量分別以鐵還原法、黃嘌呤氧化酶法、比色法和硫代巴比妥酸法測(cè)定，檢測(cè)試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.6 數(shù)據(jù)處理與分析 測(cè)定結(jié)果以SPSS 13.0進(jìn)行單因素方差分析和Duncan’s法多重比較；所有結(jié)果均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示，P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 硫辛酸對(duì)熱應(yīng)激肉雞生長(zhǎng)性能的影響 由表2可知，與B組相比，A組和C組的平均日增重顯著提高（P＜0.05），分別提高了16.8%和12.6%；料肉比顯著降低（P＜0.05），分別降低了6.6%和6.2%；A組和C組的平均日增重及料肉比無顯著差異（P＞0.05）。A組的平均日采食量顯著高于B組（P＜0.05），高出8.9%，C組平均日采食量與A組和B組相比無顯著差異（P＞0.05）。

表2 飼糧中添加硫辛酸對(duì)熱應(yīng)激肉雞生長(zhǎng)性能的影響

2.2 硫辛酸對(duì)熱應(yīng)激肉雞腸道形態(tài)的影響 由表3可知，A組（回腸：12.3%；盲腸：14.4%）和C組（回腸：9.1%；盲腸：9.1%）的絨毛高度顯著高于B組（P＜0.05），A組和C組的絨毛高度無顯著差異（P＞0.05）。B組盲腸的隱窩深度顯著高于A和C組（17.4%和14.8%）（P＜0.05），A組和C組回腸的隱窩深度無顯著差異（P＞0.05）。A組（回腸：23.1%；盲腸：34.8%）的絨隱比顯著高于B組（P＜0.05），C組盲腸的絨隱比顯著高于B組（25.6%）（P＜0.05），A組和C組的絨隱比無顯著差異（P＞0.05）。

表3 飼糧中添加硫辛酸對(duì)熱應(yīng)激肉雞腸道形態(tài)的影響

2.3 硫辛酸對(duì)熱應(yīng)激肉雞腸道通透性及血清炎癥因子水平的影響 由表4可知，A組血清D-乳酸、DAO、IL-6和TNF-α水平顯著低于B組（20.4%、11.1%、25.3%和41.8%）（P＜0.05）；C組血清D-乳酸、DAO和IL-6水平顯著低于B組（14.5%、9.1%和19.3%）（P＜0.05）；A組和C組血清腸道通透性指標(biāo)及血清炎癥因子水平無顯著差異（P＞0.05）。

表4 飼糧中添加硫辛酸對(duì)熱應(yīng)激肉雞腸道通透性的影響

2.4 硫辛酸對(duì)熱應(yīng)激肉雞抗氧化性能的影響由表5可知，與B組相比，A組T-AOC和SOD活性顯著提高（20.2%和33.7%），MDA含量顯著降低（32.8%）（P＜0.05）；C組的SOD活性顯著高于B組（P＜0.05）；A組和C組各項(xiàng)抗氧化指標(biāo)無顯著差異（P>0.05）。

表5 飼糧中添加硫辛酸對(duì)熱應(yīng)激肉雞抗氧化性能的影響U/mg prot

3 討論

3.1 硫辛酸對(duì)熱應(yīng)激肉雞生長(zhǎng)性能的影響 熱應(yīng)激可誘導(dǎo)肉雞的氧化應(yīng)激并能損傷肉雞的腸道健康，進(jìn)而對(duì)肉雞的生產(chǎn)性能產(chǎn)生負(fù)面影響。本研究發(fā)現(xiàn)，硫辛酸可顯著改善熱應(yīng)激肉雞的生產(chǎn)性能，提高平均日增重，降低料肉比。與此類似，盧敏（2016）發(fā)現(xiàn)，在22～42日齡階段，日糧中加入300 mg/kg硫辛酸能夠顯著提高氨氣應(yīng)激肉雞的平均日增重，顯著降低料肉比，但對(duì)平均日采食量無顯著影響。硫辛酸是一種兼具脂溶性與水溶性的抗氧化劑，已被證明可改善動(dòng)物的氧化應(yīng)激（李建文等，2010）。本研究中，硫辛酸對(duì)熱應(yīng)激肉雞生產(chǎn)性能的改善可能與其抗氧化功能及對(duì)腸道健康的改善相關(guān)。

3.2 硫辛酸對(duì)熱應(yīng)激肉雞腸道形態(tài)的影響 正常腸道形態(tài)是動(dòng)物養(yǎng)分吸收和維持腸道屏障功能的基礎(chǔ)，對(duì)動(dòng)物的應(yīng)激反應(yīng)很敏感。熱應(yīng)激會(huì)損傷肉雞的腸道絨毛，絨毛破損萎縮，隱窩深度增加（Song等，2014）。本研究發(fā)現(xiàn)，日糧添加硫辛酸能改善熱應(yīng)激肉雞腸道絨毛形態(tài)的損傷。與此研究相似的是，其他外源抗氧化劑如葡萄多酚也能改善熱應(yīng)激肉雞的腸道絨毛形態(tài) （Viveros等，2011）。Gu等（2012）發(fā)現(xiàn)，熱應(yīng)激肉雞腸道絨毛的損傷可能與高溫誘導(dǎo)的腸道氧化應(yīng)激相關(guān)，氧化應(yīng)激產(chǎn)生的自由基可攻擊腸道上皮細(xì)胞，導(dǎo)致細(xì)胞損傷。因此，硫辛酸可能通過減少自由基對(duì)上皮細(xì)胞的損傷，降低熱應(yīng)激時(shí)腸道的氧化應(yīng)激，來實(shí)現(xiàn)對(duì)腸道上皮的保護(hù)。王艷艷等（2008）發(fā)現(xiàn)，硫辛酸可清除小鼠消化道中由高脂日糧誘導(dǎo)產(chǎn)生的自由基。此外，鮑偉光等（2016）研究表明，硫辛酸可激活應(yīng)激腸道上皮細(xì)胞的保護(hù)因子熱休克蛋白70（HSP70），減少上皮細(xì)胞凋亡，這也可能是硫辛酸改善腸道形態(tài)損傷的另一途徑。而且，腸道絨毛形態(tài)的恢復(fù)有利于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的正常吸收，從而改善生產(chǎn)性能，這與硫辛酸對(duì)熱應(yīng)激肉雞生產(chǎn)性能的改善相一致。

3.3 硫辛酸對(duì)熱應(yīng)激肉雞腸道通透性及血清炎癥因子水平的影響 完整的腸道屏障功能是維持腸道正常運(yùn)轉(zhuǎn)的基礎(chǔ)，受損的腸道屏障使得腸腔中的毒素易于入侵黏膜上皮，誘發(fā)腸道局部甚至機(jī)體的炎癥反應(yīng)，進(jìn)而損傷動(dòng)物的健康和生產(chǎn)性能。95%以上的血清二胺氧化酶（DAO）只存在于完整的腸道上皮黏膜中；D-乳酸是腸道細(xì)菌代謝和裂解的產(chǎn)物，正常情況下在血中水平很低，當(dāng)腸道黏膜屏障受損時(shí)才可能進(jìn)入血液循環(huán)。因此DAO活性和D-乳酸是反映腸道應(yīng)激受損情況的敏感指標(biāo)（胡紅蓮和高明，2012）。熱應(yīng)激會(huì)損傷肉雞腸道屏障功能，提高腸道上皮的通透性（Song等，2014），這與本研究結(jié)果相類似。本試驗(yàn)中，硫辛酸能改善熱應(yīng)激肉雞腸道上皮通透性，降低血清DAO活性和D-乳酸水平，并降低IL-6水平。緊密連接是構(gòu)成上皮屏障功能的重要組成部分，由Occludin和ZO-1等緊密連接蛋白分子共同組成。鮑偉光等（2016）發(fā)現(xiàn)，硫辛酸可提高應(yīng)激腸道上皮細(xì)胞Occludin和ZO-1 mRNA的表達(dá)，其可能通過調(diào)節(jié)熱應(yīng)激肉雞腸道緊密連接蛋白的表達(dá)來增強(qiáng)腸道上皮的屏障功能，降低通透性，減少機(jī)體炎癥因子水平，有利于熱應(yīng)激肉雞健康和生產(chǎn)性能的恢復(fù)。

3.4 硫辛酸對(duì)熱應(yīng)激肉雞抗氧化性能的影響熱應(yīng)激可誘導(dǎo)肉雞機(jī)體發(fā)生氧化應(yīng)激，氧化應(yīng)激所產(chǎn)生的大量自由基可攻擊各組織細(xì)胞，造成氧化損傷。而且熱應(yīng)激時(shí)，肉雞的抗氧化能力顯著下能，從而加劇了氧化應(yīng)激。本研究發(fā)現(xiàn)，日糧中添加硫辛酸可以提高熱應(yīng)激肉雞的血清SOD活性，改善其抗氧化能力和抗氧化狀態(tài)，緩解MDA水平的升高。硫辛酸由于自身的化學(xué)結(jié)構(gòu)具有清除自由基的功能，從而發(fā)揮抗氧化作用（黃自強(qiáng)，2019）。郭志有（2014）發(fā)現(xiàn)，日糧中添加α-硫辛酸可通過提高解偶聯(lián)蛋白基因的表達(dá)，維持正常線粒體功能，提高肉雞的抗氧化性能和抗氧化酶活性。硫辛酸還可通過激活重要的抗氧化元件核因子E-2相關(guān)因子2（Nrf2）來發(fā)揮抗氧化作用（師春立，2016）。

4 結(jié)論

日糧中添加300 mg/kg的硫辛酸可以有效增強(qiáng)熱應(yīng)激肉雞的抗氧化能力，改善熱應(yīng)激肉雞腸道健康狀況，降低腸道通透性，改善腸道絨毛形態(tài)，提高生產(chǎn)性能。