王源昊， 馬友彪， 王 晶， 武書庚， 張海軍*， 齊廣海， 何東亭， 高 俊

（1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部動物產(chǎn)品質(zhì)量安全飼料源性因子風險評估實驗室，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部飼料生物技術(shù)重點開放實驗室，北京100081；2.贏創(chuàng)（中國）投資有限公司，北京100600）

現(xiàn)代集約化養(yǎng)殖的畜禽面臨著各種應(yīng)激和環(huán)境脅迫問題，時常會出現(xiàn)機體抗氧化系統(tǒng)失衡、亞健康或發(fā)生疾病的情形。過去生產(chǎn)中常采用飼料中添加抗生素的方式來預(yù)防動物發(fā)生疾病和改善生產(chǎn)性能，由于抗生素的濫用對人類健康和環(huán)境有很大危害，因此綠色飼料添加劑的研發(fā)和應(yīng)用成為當前動物營養(yǎng)與飼料領(lǐng)域的熱點。

益生菌是飼用抗生素的良好替代品之一，其是一種來自動物腸道或環(huán)境中的有益微生物，能夠提高動物抗應(yīng)激能力，維持腸道菌群平衡，增強機體免疫，并提高生產(chǎn)性能（Peng等，2016；Bai等，2013），應(yīng)用價值前景廣闊。蛋雞在產(chǎn)蛋高峰期結(jié)束后，隨著日齡的增加，蛋雞產(chǎn)蛋性能、蛋品質(zhì)和機體免疫能力下降（Liu等，2013），下降的主要原因是長期積累的氧化應(yīng)激所致（Liu等，2018），出現(xiàn)蛋白高度和哈氏單位下降，蛋清稀釋現(xiàn)象，蛋黃顏色和哈氏單位直接與消費者愛好和貨架期有關(guān)（Vlckov等，2019；Scheideler等，1994）?？莶菅挎邨U菌在許多動物生產(chǎn)中廣泛應(yīng)用（Song等，2014），有研究發(fā)現(xiàn)，在飼糧中添加0.05%的活菌數(shù)為2×109cfu/g的枯草芽孢桿菌制劑可以降低蛋雞料蛋比，并提高生產(chǎn)性能（潘寶海等，2015）。但其對產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能、血液生化指標及蛋品質(zhì)的研究較少。本試驗旨在研究飼糧中添加枯草芽孢桿菌對產(chǎn)蛋后期蛋雞產(chǎn)蛋性能、血液生化指標及蛋品質(zhì)的影響，為枯草芽孢桿菌在產(chǎn)蛋后期蛋雞中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗設(shè)計 試驗采用單因子試驗設(shè)計，選用396只69周齡海蘭褐蛋雞，隨機分為對照組和試驗組，每組6個重復(fù)，每個重復(fù)33只雞，對照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗組飼喂在基礎(chǔ)飼糧中添加500 mg/kg枯草芽孢桿菌制劑的飼糧，試驗分為預(yù)試期1周和試驗期8周，蛋雞基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。試驗使用半開放式雞舍3層立體籠養(yǎng)，自然光照加人工補光，每天光照時間為16 h，光照強度20 lx，室內(nèi)采用自然和橫向負壓相結(jié)合的方式通風。專人管理，自由采食和飲水，每日人工喂料2次（08：00和14：00），15：00撿蛋。每天打掃雞舍衛(wèi)生和清理雞糞1次，每周帶雞消毒1次，常規(guī)免疫。

1.2 試驗材料 試驗用枯草芽孢桿菌制劑由贏創(chuàng)（中國）投資有限公司提供，其中枯草芽孢桿菌含量≥2×109cfu/g，載體為碳酸鈣。

1.3 測定指標與方法

1.3.1 產(chǎn)蛋性能 試驗期間，以重復(fù)為單位，每天記錄產(chǎn)蛋數(shù)和蛋重，每周結(jié)料，稱取并記錄剩余料重。計算1～4周、5～8周和1～8周的產(chǎn)蛋率、平均蛋重、料蛋比和平均日采食量。

1.3.2 血漿生化及抗氧化指標 試驗第4和第8周末，每個重復(fù)隨機取1只雞采血，采血前禁食12 h，自由飲水。翅下靜脈采血于含抗凝劑的采血管中，室溫靜置，2500 r/min離心10 min，將上清液分裝于1.5 mL離心管中，-20℃保存?zhèn)溆?。用全自動生化分析儀進行血漿中谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性及肌酐、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、總蛋白、白蛋白、尿素氮、尿酸、甘油三酯、總膽固醇含量測定。球蛋白含量為計算值，計算公式如下：

球蛋白含量=總蛋白含量-白蛋白含量。

采用試劑盒測量血漿抗氧化指標，包括血漿中谷胱甘肽過氧化物酶活性、丙二醛含量和總抗氧化能力。

1.3.3 蛋品質(zhì) 試驗第4周和第8周末，每個重復(fù)隨機選取3枚雞蛋在24 h內(nèi)測定蛋品質(zhì)，分別使用分析天平稱量蛋殼重，用蛋形指數(shù)測定儀測定蛋形指數(shù)，用蛋殼強度分析儀測定蛋殼強度，用蛋殼厚度測定儀測定蛋殼厚度，用蛋品質(zhì)自動分析儀測定蛋白高度、蛋黃顏色和哈氏單位。

1.4 統(tǒng)計分析 原始數(shù)據(jù)經(jīng)Excle 2019處理后采用SPSS 24.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，采用獨立樣本T檢驗的方法進行分析，結(jié)果以“平均值±標準差”表示，以P<0.05作為差異顯著性判斷標準。

2 結(jié)果與分析

2.1 枯草芽孢桿菌對產(chǎn)蛋后期蛋雞產(chǎn)蛋性能的影響 由表2可知，飼糧中添加枯草芽孢桿菌對產(chǎn)蛋后期蛋雞的產(chǎn)蛋率、平均蛋重、料蛋比和平均日采食量無顯著影響（P>0.05）。

表2 枯草芽孢桿菌對產(chǎn)蛋后期蛋雞產(chǎn)蛋性能的影響

2.2 枯草芽孢桿菌對產(chǎn)蛋后期蛋雞血液生化和抗氧化指標的影響 由表3可知，飼糧中添加枯草芽孢桿菌對產(chǎn)蛋后期蛋雞血漿中谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性、肌酐、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、總蛋白、球蛋白、白蛋白/球蛋白、尿素氮、尿酸、甘油三酯和總膽固醇含量無顯著影響（P>0.05），但第4周末，試驗組球蛋白含量提高了8.40%，白蛋白/球蛋白降低了13.75%，第8周末試驗組白蛋白含量增加了8.52%，有提高白蛋白含量的趨勢（P=0.089）。

表3 枯草芽孢桿菌對產(chǎn)蛋后期蛋雞血液生化指標的影響

由表4可知，飼糧中添加枯草芽孢桿菌對蛋雞血漿中丙二醛含量和總抗氧化能力無顯著影響（P>0.05），第8周末，試驗組血漿谷胱甘肽過氧化物酶活性提高了5.80%，有提高趨勢（P=0.081）。

表4 枯草芽孢桿菌對產(chǎn)蛋后期蛋雞血漿抗氧化指標的影響

2.3 枯草芽孢桿菌對產(chǎn)蛋后期蛋雞蛋品質(zhì)的影響 由表5可知，枯草芽孢桿菌對蛋形指數(shù)、蛋殼厚度、蛋殼強度、蛋殼重均無顯著影響（P>0.05），第4周末，試驗組蛋黃顏色和哈氏單位分別提高了12.32%和8.35%（P<0.05），蛋白高度增加了15.59%，有提高蛋白高度的趨勢（P=0.054）。

表5 枯草芽孢桿菌對產(chǎn)蛋后期蛋雞蛋品質(zhì)的影響

3 討論

枯草芽孢桿菌制劑對蛋雞產(chǎn)蛋性能的研究報道并不一致，Upadhaya等（2019）研究發(fā)現(xiàn)，在飼糧中添加0.05%枯草芽孢桿菌制劑飼喂20周，可以顯著提高產(chǎn)蛋率，降低采食量；而Forte等（2015）研究表明，在飼糧中添加0.05%枯草芽孢桿菌PB6飼喂20周，對蛋雞產(chǎn)蛋性能無顯著影響，與本試驗研究結(jié)果一致。本試驗中枯草芽孢桿菌對產(chǎn)蛋性能影響不大，可能與飼喂時間較短有關(guān)。另外，不同的枯草芽孢桿菌菌株的作用效果不同，其活菌制劑的有效含量、添加劑量和試驗周期都會影響試驗結(jié)果?？莶菅挎邨U菌調(diào)控產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能方面的研究尚不充分。Yang等（2020）研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加枯草芽孢桿菌可以改善老化蛋雞的生產(chǎn)性能、盲腸細菌組成、雞蛋質(zhì)量和小腸形態(tài)，Alicja等（2015）研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加枯草芽孢桿菌對蛋雞產(chǎn)蛋性能無顯著影響，但可通過改善腸道環(huán)境促進營養(yǎng)物質(zhì)消化和吸收效率，提高蛋雞體增重。所以本試驗需要進一步探究枯草芽孢桿菌對蛋雞腸道健康和微生物組成的影響，并延長試驗時間。

血液生化指標反映了畜禽體內(nèi)物質(zhì)代謝變化和組織機能狀態(tài)，主要表現(xiàn)在機體營養(yǎng)代謝、應(yīng)激和健康狀況等方面（Kalmendal等，2012）。血漿中谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性是反映肝臟功能受損的重要指標，當肝臟正常功能受到損害時，血液中谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性升高（Hatab等，2016；Lin等，2004），本試驗所用枯草芽孢桿菌對血漿中谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性無顯著影響，說明其作為蛋雞飼料添加劑是安全的。血液中總蛋白由白蛋白和球蛋白組成，白蛋白/球蛋白是衡量機體免疫水平的重要指標。Panda等（2008）研究表明，血液中較高的蛋白濃度可能有助于產(chǎn)生抗體，從而導(dǎo)致更高的免疫應(yīng)答，白蛋白含量的增加，可以提高機體免疫能力，有促進肝臟細胞修復(fù)再生和解毒的作用。郭軍蕊等（2017）研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加枯草芽孢桿菌可以提高白蛋白含量，增強蛋雞免疫力。本研究結(jié)果與之相似，枯草芽孢桿菌組白蛋白含量高于對照組，表明枯草芽孢桿菌可能提高了機體免疫性能，對肝臟具有一定保護作用。

谷胱甘肽過氧化物是機體普遍存在的抗氧化酶，是細胞對抗氧化最重要的防御機制，可使細胞免受氧化應(yīng)激（Noctor等，2002）。Zhang等（2017）研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加枯草芽孢桿菌可以通過提高機體谷胱甘肽過氧化物酶活性，增強機體抗氧化能力。本研究中結(jié)果與之相似，發(fā)現(xiàn)枯草芽孢桿菌有提高血漿谷胱甘肽過氧化物酶活性的趨勢，表明飼糧中添加500 mg/kg的枯草芽孢桿菌制劑有提高蛋雞抗氧化性能的作用，這與Chen等（2019）在蛋雞上的研究結(jié)果一致。本試驗枯草芽孢桿菌組的總抗氧化能力與對照組相比提高8.75%，這可能與枯草芽孢桿菌在腸道中能夠產(chǎn)生具有清除自由基的多糖和提高抗氧化基因的表達有關(guān)（Stadtman等，2006），進而發(fā)揮了抗氧化作用。

蛋雞在產(chǎn)蛋后期，由于體內(nèi)活化性氧化物產(chǎn)生過多和抗氧化功能減弱，導(dǎo)致體內(nèi)氧化還原系統(tǒng)失調(diào)和生殖系統(tǒng)功能降低，蛋白質(zhì)合成和轉(zhuǎn)運能力降低，使蛋黃顏色變淺，哈氏單位下降，蛋清稀化（Silversides等，2001），所以通過營養(yǎng)措施改善產(chǎn)蛋后期蛋雞的蛋品質(zhì)顯得尤為重要。哈氏單位和蛋白高度是衡量蛋清品質(zhì)、雞蛋新鮮程度和分級的重要指標。Neijat等（2019）研究發(fā)現(xiàn)，枯草芽孢桿菌可以提高哈氏單位和蛋白高度，改善雞蛋品質(zhì)，提高雞蛋蛋清品質(zhì)。本研究結(jié)果與之一致，發(fā)現(xiàn)枯草芽孢桿菌顯著提高了哈氏單位，有提高蛋白高度的趨勢，表明產(chǎn)蛋后期蛋雞飼糧中添加500 mg/kg的枯草芽孢桿菌制劑可以使蛋清變濃稠，改善雞蛋內(nèi)在品質(zhì)。哈氏單位可反映雞蛋中蛋白質(zhì)的品質(zhì)，本試驗中哈氏單位和蛋白高度的提高，可能是因為枯草芽孢桿菌提高了血漿中谷胱甘肽過氧化物酶活性，進而提高白蛋白含量。有研究表明谷胱甘肽過氧化物酶能夠抑制炎癥反應(yīng)（Kansane等，2013；Sirajudeen等，2011），改善膨大部組織功能，促進蛋白質(zhì)合成和運輸（Wang等，2018）。蛋黃的顏色主要由飼料中類胡蘿卜素含量決定，其經(jīng)過動物的消化和吸收，經(jīng)血液運輸至輸卵管并最終沉積到蛋黃，使蛋黃顏色加深（Ahmadi等，2011）。本研究發(fā)現(xiàn)，枯草芽孢桿菌能顯著加深蛋黃顏色，表明提高了產(chǎn)蛋后期蛋雞對類胡蘿卜素的吸收能力。此外，枯草芽孢桿菌可能通過提高機體抗氧化能力，抑制了類胡蘿卜素氧化分解，促進了蛋雞體內(nèi)色素沉淀，加深蛋黃顏色?？莶菅挎邨U菌對雞蛋內(nèi)在品質(zhì)的提升機制尚需進一步試驗研究。

4 結(jié)論

產(chǎn)蛋后期蛋雞飼糧中添加0.05%枯草芽孢桿菌制劑對產(chǎn)蛋性能無顯著影響，有提高血漿抗氧化性能的趨勢，能夠加深蛋黃顏色，提高蛋清濃稠度，有利于蛋品質(zhì)的改善。