晏家友， 刁 慧， 李書偉， 湯文杰， 鄺聲耀

（1.四川省畜牧科學(xué)研究院，四川成都610066；2.動物遺傳育種四川省重點(diǎn)實驗室，四川成都610066；3.四川省畜科飼料有限公司，四川成都610066；4.畜禽生物制品四川省重點(diǎn)實驗室，四川雙流616200）

銅是動物機(jī)體必需的一種微量元素，其不僅可以以輔助因子的形式參與體內(nèi)酶的組成和活化，而且可以通過酶的活性中心或以激活劑的形式，影響動物的造血功能、生長發(fā)育以及免疫和抗氧化能力等（晏家友等，2016；Zhao等，2014）。以植物性原料為主的飼料中銅的含量不足，必須要在飼料中額外補(bǔ)充才能滿足動物機(jī)體對銅的營養(yǎng)需要。目前，無機(jī)銅（如硫酸銅和堿式氯化銅等）是飼料中銅的主要補(bǔ)充形式，但是由于其生物學(xué)利用率低，高水平添加是普遍現(xiàn)狀。研究表明，飼料中添加高水平的無機(jī)銅，對動物自身、生態(tài)環(huán)境以及動物產(chǎn)品的安全都構(gòu)成了極大的威脅（李志惠等，2019；Yazdankhah等，2014）。因而在實現(xiàn)滿足動物營養(yǎng)需要，改善飼料品質(zhì)等預(yù)期目標(biāo)的前提下，應(yīng)采取積極措施減少飼料中微量元素的用量。我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部發(fā)布的《飼料添加劑安全使用規(guī)范》（第2625號公告）規(guī)定，仔豬（≤25 kg）配合飼料中銅的最高限量（包含飼料原料本底值）為125 mg/kg，生長肥育豬（＞25 kg）為25 mg/kg。因此，本試驗旨在研究日糧中添加低水平檸檬酸銅、硫酸銅或堿式氯化銅對斷奶仔豬生長性能、血清抗氧化酶活性及組織器官銅沉積量的影響，為實際生產(chǎn)中銅源的選擇和應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗設(shè)計 選用21日齡斷奶、健康、平均體重（6.82±0.34）kg的杜×長×大仔豬64頭，按體重和性別一致原則，隨機(jī)分為4個處理，每個處理4個重復(fù)，每個重復(fù)4頭豬。對照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗組分別在基礎(chǔ)日糧中添加20 mg/kg硫酸銅、堿式氯化銅或檸檬酸銅，均以銅計。預(yù)試期3 d，正試期28 d。

1.2 試驗材料 試驗所用檸檬酸銅由四川省畜科飼料有限公司生產(chǎn)，銅含量為34.5%～36.7%；硫酸銅（銅含量≥25.1%）和堿式氯化銅（銅含量≥58.1%）均從市場采購。

1.3 試驗日糧 試驗日糧參照NRC（2012）《豬的營養(yǎng)需要》和《中國飼料成分及營養(yǎng)價值表（2020）》配制。日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 日糧組成及營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.4 飼養(yǎng)管理 仔豬飼養(yǎng)試驗在西南大學(xué)開展。豬舍舍溫控制在25～28℃，相對濕度控制在50%～70%。仔豬在斷奶后最初3 d內(nèi)限量飼喂，3 d后自由采食。試驗期間仔豬自由飲水。每隔3 d對豬舍進(jìn)行噴霧消毒1次。仔豬免疫程序及其他飼養(yǎng)管理按常規(guī)進(jìn)行。

1.5 樣品采集 試驗結(jié)束后，從每個重復(fù)隨機(jī)選取1頭公豬，前腔靜脈采血10 mL，于室溫下靜置0.5 h，2000 r/mim離心10 min，制備血清，于-20℃冷凍保存，用于測定抗氧化酶活性。然后將其屠宰，并取肝臟和腎臟樣品各2 g，液氮處理后，于-20℃冰箱冷凍保存，用于測定銅沉積量。

1.6 測定指標(biāo)與方法

1.6.1 生長性能 試驗開始和結(jié)束時，分別對每頭仔豬進(jìn)行空腹稱重。試驗期內(nèi)，以重復(fù)為單位，記錄投料量和剩料量（余料量+損耗量），采食量=投料量－剩料量。根據(jù)平均日增重（ADG）和平均日采食量（ADFI）計算耗料增重比（F/G）。

1.6.2 血清抗氧化酶活性 血清抗氧化酶測定指標(biāo)包含銅藍(lán)蛋白（CER）和銅鋅超氧化物歧化酶（Cu/Zn-SOD）。血清CER和Cu/Zn-SOD活性按照南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒說明書進(jìn)行測定，使用的主要儀器為UVIKON XS紫外-可見分光光度計。

1.6.3 組織器官銅沉積量 組織器官銅沉積量指標(biāo)包括肝臟和腎臟中銅含量，按照《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中銅的測定》（GB 5009.13-2017）中第二法進(jìn)行測定，使用的儀器包含原子吸收分光光度計和電子天平等。

1.7 統(tǒng)計分析 利用SASV8軟件包編程進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。試驗結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。試驗數(shù)據(jù)采用One-Way ANOVA檢驗，組間差異進(jìn)行Tukey多重比較。以P<0.05為差異顯著判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 日糧中添加低銅對斷奶仔豬生長性能的影響 由表2可知，檸檬酸銅組、硫酸銅組或堿式氯化銅組與對照組相比，仔豬ADG、ADFI和F/G均無顯著差異（P>0.05）。但是，檸檬酸銅組仔豬ADG、ADFI和F/G較其他組更優(yōu)。

表2 日糧中添加低銅對斷奶仔豬生長性能的影響

2.2 日糧中添加低銅對斷奶仔豬血清抗氧化酶活性的影響 由表3可以看出，檸檬酸銅組、硫酸銅組或堿式氯化銅組與對照組相比，仔豬血清CER活性分別提高27.77%（P<0.05）、13.21%（P<0.05）和19.41%（P<0.05），仔豬血清Cu/Zn-SOD活 性 分 別 提 高26.39%（P<0.05）、16.94%（P<0.05）和20.94%（P<0.05）。

表3 日糧中添加低銅對斷奶仔豬血清抗氧化酶活性的影響

2.3 日糧中添加低銅對斷奶仔豬組織器官銅沉積量的影響 由表4可以看出，檸檬酸銅組、硫酸銅組或堿式氯化銅組與對照組相比，仔豬肝臟和腎臟銅沉積量均無顯著差異（P>0.05）。但是，檸檬酸銅組仔豬肝臟和腎臟銅沉積量較其他組更高。

表4 日糧中添加低銅對斷奶仔豬組織器官銅沉積量的影響mg/kg

3 討論

檸檬酸銅是我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部發(fā)布第162號公告批準(zhǔn)在斷奶仔豬飼料中使用的一種新型有機(jī)銅源。郭志強(qiáng)和胡海強(qiáng)（2021）研究結(jié)果表明，飼糧中添加20 mg/kg檸檬酸銅可以促進(jìn)肉兔生長，其作用效果與添加150 mg/kg硫酸銅相當(dāng)。Yan和Zhang（2015）研究結(jié)果表明，在斷奶仔豬日糧中添加20 mg/kg檸檬酸銅與添加180 mg/kg硫酸銅具有類似的促進(jìn)仔豬生長的效果。本試驗研究結(jié)果顯示，在日糧中添加20 mg/kg檸檬酸銅可以改善仔豬的生長性能，但是與添加20 mg/kg硫酸銅或堿式氯化銅相比，仔豬生長性能差異并不顯著。表明在日糧中添加低劑量的檸檬酸銅不會影響仔豬的生長性能。這就為實際生產(chǎn)中，應(yīng)用低水平檸檬酸銅替代高水平無機(jī)銅來提供仔豬所需的銅元素提供了新思路。

銅是銅藍(lán)蛋白和銅鋅超氧化物歧化酶的重要組成部分，而銅藍(lán)蛋白和銅鋅超氧化物歧化酶是動物體內(nèi)重要的抗氧化酶，它們可以促進(jìn)機(jī)體的抗氧化能力，維持動物健康。銅藍(lán)蛋白具有結(jié)合血清中的銅以及通過自身的亞鐵氧化酶活性抑制鐵離子產(chǎn)生自由基的功能（Abboud等，2000）。銅鋅超氧化物歧化酶能夠抑制細(xì)胞中超氧陰離子自由基的產(chǎn)生，保護(hù)細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能（Senthilkumar等，2009）。日糧缺銅，會降低銅藍(lán)蛋白和銅鋅超氧化物歧化酶的活性，阻礙抗氧化酶發(fā)揮功能，引起機(jī)體抗氧化防疫系統(tǒng)受損，導(dǎo)致動物出現(xiàn)氧化應(yīng)激 （Montes等，2014）。王希春和吳金節(jié)（2004）研究結(jié)果表明，高銅日糧能顯著提高斷奶仔豬血清銅藍(lán)蛋白和銅鋅超氧化物歧化酶的活性。余姮（2009）研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在生長肥育豬日糧中使用有機(jī)微量元素替代無機(jī)微量元素，能夠增強(qiáng)組織的抗氧化性能。本試驗研究結(jié)果顯示，在日糧中添加20 mg/kg檸檬酸銅、硫酸銅或堿式氯化銅，可以提高仔豬血清銅藍(lán)蛋白和銅鋅超氧化物歧化酶的活性。表明銅對動物機(jī)體抗氧化能力的影響，可能與體內(nèi)銅的濃度和存在形式有關(guān)。

銅廣泛分布于動物體內(nèi)，其在消化道內(nèi)被吸收后進(jìn)入血液，經(jīng)過血液循環(huán)到達(dá)機(jī)體各組織器官。張力和柳樹青（1994）研究指出，日糧中銅的水平對生長豬肝臟和腎臟中銅的含量影響較大。本試驗結(jié)果表明，在日糧中添加20 mg/kg檸檬酸銅、硫酸銅或堿式氯化銅，仔豬肝臟和腎臟中銅沉積量從高到低依次為檸檬酸銅、堿式氯化銅和硫酸銅。由此可見，檸檬酸銅在仔豬組織器官中的銅沉積量高于無機(jī)銅，這與不同銅源的相對生物學(xué)利用率密切相關(guān)，但具體原因還需要進(jìn)一步研究。本試驗研究結(jié)果還顯示，在日糧中添加20 mg/kg檸檬酸銅、硫酸銅或堿式氯化銅，仔豬肝臟和腎臟中銅沉積量差異并不顯著。這就提示，當(dāng)日糧中添加低水平的銅，肝臟和腎臟可能通過最佳方式攝取銅，滿足動物對銅的需求，從而減少組織器官中銅的沉積（Kim等，2008；Cater等，2006）。

4 結(jié)論

本試驗條件下，在斷奶仔豬日糧中添加20 mg/kg檸檬酸銅、硫酸銅或堿式氯化銅形式的銅，可以提高仔豬血清CER和Cu/Zn-SOD活性，但不影響生長性能以及肝臟和腎臟中銅沉積量。