陳愷琳 馬鵬生 黃建盛 黃德 王婷 黃小洲

摘要：將珍珠龍躉幼魚(yú)置于低氧的環(huán)境中，觀測(cè)珍珠龍躉幼魚(yú)肝臟、肌肉和心臟中超氧化物歧化酶SOD含量的變化。結(jié)果表明，低氧脅迫對(duì)珍珠龍躉幼魚(yú)的肝臟、肌肉和心臟中SOD含量的影響顯著（P<0.05），SOD含量在不同缺氧時(shí)間（6小時(shí)）內(nèi)呈現(xiàn)峰值變化，肝臟、肌肉和心臟中的SOD含量均先升后降，經(jīng)過(guò)1H的低氧處理后，其含量達(dá)到了最大值，然后隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)，其值逐漸下降，最后恢復(fù)至接近處理前的水平。綜上所述，在低氧脅迫下，珍珠龍躉幼魚(yú)組織迅速合成SOD，保持細(xì)胞和機(jī)體免受自由基和過(guò)氧化物等有害物質(zhì)的侵害，對(duì)維護(hù)魚(yú)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定至關(guān)重要。

關(guān)鍵詞：低氧脅迫;珍珠龍躉幼魚(yú);超氧化物歧化酶

中圖分類(lèi)號(hào)：S917.4 ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

珍珠龍躉，又名龍虎斑，是鞍帶石斑魚(yú)（Epinephelus ?lanceolatus ♂）與褐點(diǎn)石斑魚(yú)（Epinephelus fuscoguttatus ♀）的雜交品種。因其具有抗病力強(qiáng)和生長(zhǎng)快的優(yōu)點(diǎn)，且具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，故養(yǎng)殖前景被廣泛看好[1]。然而在養(yǎng)殖過(guò)程中，可能遭到低氧脅迫的影響，影響到珍珠龍躉的內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，出現(xiàn)大量死亡現(xiàn)象。目前國(guó)內(nèi)外許多研究人員對(duì)該魚(yú)研究集中在該魚(yú)肌肉營(yíng)養(yǎng)成分、生長(zhǎng)和攝食以及耗氧率上進(jìn)行，如梁華芳等通過(guò)設(shè)置不同的溫度和鹽度梯度，龍虎斑經(jīng)過(guò)處理后，測(cè)定其機(jī)體中的耗氧率以及排氨率[2]。于宏等則主要分析了龍虎斑肌肉中的營(yíng)養(yǎng)成分[1]。王成桂等則設(shè)置不同的投喂頻率，主要對(duì)龍虎斑幼魚(yú)的生長(zhǎng)和餌料的利用情況等開(kāi)展一系列的研究[3]。劉龍龍等人設(shè)置不同鹽度，研究對(duì)珍珠龍膽石斑魚(yú)滲透調(diào)節(jié)與耗氧率的影響[4]。但對(duì)于低氧脅迫對(duì)珍珠龍躉超氧化物歧化酶的影響的研究尚鮮有報(bào)道。因此，本次實(shí)驗(yàn)針對(duì)低氧脅迫對(duì)珍珠龍躉超氧化物歧化酶含量的影響進(jìn)行分析，探尋其抗氧化機(jī)制，旨在為珍珠龍躉實(shí)際生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

1 ?材料與方法

1.1 ?實(shí)驗(yàn)魚(yú)的來(lái)源和馴化

實(shí)驗(yàn)于2020年10月開(kāi)始，用魚(yú)為徐聞?dòng)腊l(fā)13號(hào)蝦苗廠的珍珠龍躉幼魚(yú)，體長(zhǎng)為10.56±0.14 cm、體質(zhì)量31.57±0.25 g的幼魚(yú)，在水溫為28±1.2℃，鹽度為28～31，pH值為7.8～8.3，溶解氧為6～8 mg/L，氨氮小于0.01 mg/L的自然海水環(huán)境中暫養(yǎng)7天，飼養(yǎng)用水為經(jīng)過(guò)充分曝氣的經(jīng)沙濾的天然海水，適應(yīng)1天后，開(kāi)始投喂石斑魚(yú)專(zhuān)用飼料。

實(shí)驗(yàn)開(kāi)展之前，把實(shí)驗(yàn)魚(yú)隨機(jī)分3組，各組20尾魚(yú)，分別置于3個(gè)經(jīng)過(guò)充分曝氣、容量為250 L的白色密閉實(shí)驗(yàn)桶中，通過(guò)氣泵24小時(shí)不斷進(jìn)行增氧，保證暫養(yǎng)期間氧氣充足，個(gè)體間并無(wú)沒(méi)有明顯的差異（P>0.05），本次實(shí)驗(yàn)的暫養(yǎng)期為7天，從而使實(shí)驗(yàn)魚(yú)快速適應(yīng)實(shí)驗(yàn)環(huán)境，恢復(fù)體力。

1.2 ?實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和取樣

實(shí)驗(yàn)正式開(kāi)始時(shí)，通過(guò)迅速往養(yǎng)殖槽中注入氮?dú)鈦?lái)降低溶解氧水平，使溶解氧在30分鐘內(nèi)降至（2.0±0.1 mg/L），達(dá)到所需含量后開(kāi)始計(jì)時(shí)，利用溶氧儀來(lái)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)溶解氧水平的變化，試驗(yàn)過(guò)程中通過(guò)調(diào)節(jié)注入空氣和氮?dú)獾牧縼?lái)維持所需要的溶解氧水平。然后分別在0小時(shí)、0.5小時(shí)、1小時(shí)、3小時(shí)、6小時(shí)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行采樣，每次每箱各取2尾魚(yú)，將其置于含100 mg/L MS-222的海水中快速麻醉對(duì)魚(yú)體進(jìn)行解剖，分別取肝臟、肌肉和心臟置于EP管，-70℃超低溫保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 ?指標(biāo)檢測(cè)

測(cè)定超氧化物歧化酶（SOD）采用的是試劑盒，采用羥胺法測(cè)定。由南京建成生物工程研究所生產(chǎn)，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作和處理。

本次實(shí)驗(yàn)所獲得的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，均采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±S.D.）的形式來(lái)表示，實(shí)驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)和分析則使用了SPSS13.0版本的軟件獲得，本實(shí)驗(yàn)采用Duncans法比較組間差異，若P<0.05時(shí)為差異顯著。

2 ?結(jié)果

2.1 ?低氧脅迫對(duì)珍珠龍躉幼魚(yú)肝臟SOD酶活力的影響

肝臟中的SOD含量經(jīng)過(guò)不同的缺氧時(shí)間6小時(shí)內(nèi)處理后，其值呈現(xiàn)峰值變化，先升后降，SOD在1小時(shí)達(dá)到最大值428.89 U/mg prot，低氧脅迫處理前（0小時(shí)）的SOD值與實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)（6小時(shí)）的SOD值之間差異并不顯著（P>0.05），但均與實(shí)驗(yàn)期間（0.5小時(shí)、1小時(shí)、3小時(shí)）呈顯著性差異（P<0.05）。肝臟中SOD從0小時(shí)開(kāi)始顯著上升（P<0.05），在1小時(shí)時(shí)刻達(dá)到最大值，然后下降，恢復(fù)至接近處理前水平。見(jiàn)表1。

2.2 ?低氧脅迫對(duì)珍珠龍躉幼魚(yú)肌肉SOD酶活力的影響

肌肉中SOD含量在1小時(shí)時(shí)刻達(dá)到最大值318.26 U/mg prot，呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)。低氧脅迫前0小時(shí)與實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)6小時(shí)之間差異不顯著（P>0.05），但均與實(shí)驗(yàn)期間（0.5小時(shí)、1小時(shí)、3小時(shí)）呈顯著性差異（P<0.05），見(jiàn)表2。

2.3 ?低氧脅迫對(duì)珍珠龍躉幼魚(yú)心臟SOD酶活力的影響

與肝臟和肌肉相似的是，心臟中SOD含量在0.5小時(shí)達(dá)到最大值230.23 U/mg prot，然后開(kāi)始下降恢復(fù)至接近處理前的水平，見(jiàn)表3。

3 ?討論

一些魚(yú)類(lèi)在低氧脅迫下會(huì)激活一套保護(hù)體系叫做抗氧化防御系統(tǒng)，用來(lái)清除過(guò)多的活性氧離子（ROS）。該系統(tǒng)的酶類(lèi)抗氧化劑的重要組成有超氧化物歧化酶（SOD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）及谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GPX）等[5]。正常情況下，機(jī)體自由基不斷地生成，由于SOD的存在，其又不斷地被清除，SOD和自由基處于一種動(dòng)態(tài)平衡的狀態(tài)。體內(nèi)SOD的濃度越高，抗氧化能力越強(qiáng);反之，抗氧化能力越弱。SOD作為抗氧化系統(tǒng)第一道防線，在清除自由基方面扮演了關(guān)鍵的角色[6]，它促使超氧陰離子自由基（O2-）歧化為H2O2和氧氣，接著CAT和GPX再將H2O2清除[7]。本次實(shí)驗(yàn)中，隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)，水中溶解氧濃度會(huì)逐漸下降，魚(yú)肝臟、肌肉和心臟中的SOD酶活力先增加，然后再下降，說(shuō)明在低氧脅迫下，珍珠龍躉機(jī)體內(nèi)自由基水平上升，激活了魚(yú)體獨(dú)有的抗氧化體系，使體內(nèi)過(guò)多的自由基被清除[8]。大菱鲆[9]、石斑魚(yú)[10]、羅非魚(yú)和鯽魚(yú)[11-12]等在低氧脅迫下肝臟或肌肉內(nèi)SOD值明顯升高;大黃魚(yú)、軍曹魚(yú)[13-14]等在低氧處理SOD值明顯下降;斑馬魚(yú)[15]在低氧脅迫下SOD活性呈先降低后升高;卵形鯧鲹[7]急性低氧脅迫下SOD活性先升高后下降。本研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果與區(qū)又君等的卵形鯧鲹[7]SOD結(jié)果一致。通過(guò)比較，這可能與魚(yú)類(lèi)對(duì)低氧脅迫的發(fā)育階段、耐受性、脅迫處理等因素有關(guān)。不同魚(yú)種之間的抗氧化機(jī)制不同、同種魚(yú)中不同的組織中的抗氧化應(yīng)激能力亦有所不同。魚(yú)類(lèi)響應(yīng)低氧脅迫是一種復(fù)雜的生理過(guò)程，是多種因素相互作用的結(jié)果，需在更高水平上深入探討其響應(yīng)機(jī)理。

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