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        外周血Cryab聯(lián)合MRI檢測對視神經(jīng)脊髓炎的診斷價(jià)值

        2021-10-13 11:38:32黃敏許超黃華云黃華棟李冬輝
        浙江醫(yī)學(xué) 2021年18期
        關(guān)鍵詞:檢測研究

        黃敏 許超 黃華云 黃華棟 李冬輝

        視神經(jīng)脊髓炎(neuromyelitis optica,NMO)是一種免疫介導(dǎo)的以視神經(jīng)與脊髓同時或相繼受累為主的中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎性脫髓鞘病變[1]。研究表明,NMO患者體內(nèi)會伴隨出現(xiàn) αβ-晶狀體蛋白(crystallin-αβ,Cryab)表達(dá)異常[2]。Cryab具有神經(jīng)保護(hù)作用,當(dāng)視神經(jīng)出現(xiàn)病變,外周血中Cryab水平會發(fā)生明顯改變[3]。同時NMO患者常合并廣泛的腦部損害與異常,臨床常使用MRI檢測對其進(jìn)行診斷評價(jià)[4]。雖然NMO患者在發(fā)病初期顱腦MRI圖像與正常人群沒有明顯差異,但隨著疾病發(fā)展可在顱腦部特定區(qū)域產(chǎn)生諸如“云霧樣”“鉛筆芯樣”等特定樣強(qiáng)化病灶,成為臨床鑒別和診斷NMO的重要依據(jù)[5]。而對于顱腦MRI的判定需要在掃描結(jié)束后由專業(yè)人員完成,以檢測顱腦病變情況。本研究通過分析NMO患者的外周血Cryab變化和MRI診斷信息,探討兩者對NMO的診斷價(jià)值。

        1 對象和方法

        1.1 對象 選取2019年1月至2020年2月長興縣人民醫(yī)院收治的NMO患者53例作為NMO組,所有患者均參照Wingerchuk等[6]發(fā)表的NMO診斷標(biāo)準(zhǔn)予以確診。其中男 18 例,女 35 例;年齡 18~60(45.14±12.71)歲;病程2 d~5年,平均(2.7±0.6)年。選取同期在本院門診進(jìn)行健康體檢的健康志愿者50例作為對照組,其中男20例,女 30 例;年齡 19~58(44.22±15.42)歲。兩組研究對象性別和年齡比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審批通過(IV-H3130000-011A),所有患者均知情同意。

        1.2 主要試劑和儀器 總蛋白抽提試劑盒購自美國Hyclone公司;Cryab一抗購自美國BioLegend公司;羊抗兔二抗購自美國CST公司;BCA蛋白濃度測定試劑盒購自美國Thermo公司;高效顯影膠片、顯影液、定影液購自德國柯達(dá)公司;ECL-Plus試劑及聚乙烯二氟(PVDF)膜購自美國Millipore公司;倒置顯微鏡購自德國Olympus生命科學(xué)公司;-80℃冰箱購自美國Thermo公司;高速離心機(jī)購自德國Eppendorf公司;CO2培養(yǎng)箱購自日本SANYO公司。

        1.3 方法

        1.3.1 外周血Cryab表達(dá)水平檢測 采用Western blot法。主要步驟如下:空腹?fàn)顟B(tài)下,收集研究對象外周血作為樣本,采用總蛋白抽提試劑盒提取全血的蛋白質(zhì),并采用BCA定量法測定蛋白濃度。蛋白定量后,配置為1 μg/μl的蛋白溶液。配置濃縮膠、分離膠和緩沖液,以10 μl/孔的用量將蛋白溶液上樣于濃縮膠,運(yùn)用濕轉(zhuǎn)法,90 V恒壓電泳80 min,電泳后,不同分子量的蛋白被分開。麗春紅染液確認(rèn)分離效率,并將分離后的蛋白印跡電轉(zhuǎn)印至0.22 μm孔徑的PVDF膜,轉(zhuǎn)印條件為80 V×60 min。電轉(zhuǎn)印結(jié)束,5%的脫脂牛奶封閉非特異性抗體,加入一抗(3%的脫脂牛奶配置,濃度1∶2 000),4℃孵育過夜,次日,TBST 洗膜后加入二抗(濃度 1∶2 500),室溫孵育90 min。抗體孵育后采用ECL發(fā)光試劑盒顯色,初步觀察目的條帶,目的條帶清晰者轉(zhuǎn)入暗室進(jìn)行膠片顯影,所得膠片掃描為灰度圖,并用圖像分析軟件Image J 6.0對圖像進(jìn)行灰度分析。外周血Cryab的表達(dá)檢測委托杭州歐蒙未一醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室完成。

        1.3.2 MRI檢查方法 采用1.5T MR掃描儀(荷蘭飛利浦公司)對患者顱腦進(jìn)行MRI掃描分析。8通道頭顱正交線圈,橫斷面雙回波T2WI掃描。參數(shù)設(shè)置:TR:3 000 ms,TE:25/29 ms,ETL:8,NEX:2,矩陣:256×256。橫斷面、矢狀位、冠狀位液體衰減反轉(zhuǎn)恢復(fù)序列(FLAIR)T2WI掃描,參數(shù)設(shè)置:TR:9 600/1 718 ms,TE:100 ms,TI:2 400 ms,NEX:1,矩陣:256×192。橫斷面 FLAIR T1WI掃描,參數(shù)設(shè)置:TR:2 000 ms,TE:6.9 ms。將顱腦 MRI影像出現(xiàn)特定樣強(qiáng)化病灶判定為NMO陽性,然后計(jì)算MRI檢查對NMO診斷的靈敏度和特異度。

        2 結(jié)果

        2.1 外周血Cryab表達(dá)對NMO的診斷效能 NMO組患者外周血Cryab表達(dá)水平為0.825±0.251,高于對照組的 0.305±0.077,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。典型樣品Western blot顯影見圖1。外周血Cryab表達(dá)對NMO的診斷價(jià)值相對較高,AUC=0.840,P<0.01,最佳截點(diǎn)值為0.594,靈敏度為0.774,特異度為0.860,見圖2。

        圖1 兩組研究對象外周血αβ-晶狀體蛋白(Cryab)表達(dá)的電泳圖[對照組1和對照組2為對照組的兩個典型樣品,視神經(jīng)脊髓炎(NMO)組1和NMO組2為NMO組的兩個典型樣品]

        圖2 外周血αβ-晶狀體蛋白(Cryab)表達(dá)診斷視神經(jīng)脊髓炎(NMO)的ROC曲線

        2.2 MRI檢測情況分析 MRI檢查顯示,NMO陽性36例,陰性67例;MRI檢查對NMO診斷的靈敏度、特異度分別為 0.679(36/53)、1.000(50/50),見表 1。圖 3 為 MRI檢查中典型的陽性結(jié)果,相比于正常的顱腦MRI,陽性結(jié)果會在顱腦特定區(qū)域出現(xiàn)“云霧樣”“鉛筆芯樣”強(qiáng)化病灶。

        圖3 MRI檢查中典型的陽性結(jié)果圖(a:“云霧樣”強(qiáng)化病灶;b:“鉛筆芯樣”強(qiáng)化病灶)

        表1 MRI檢測情況分析(例)

        2.3 外周血Cryab聯(lián)合MRI檢測對NMO診斷的一致性評價(jià) 外周血Cryab聯(lián)合MRI檢查對NMO診斷的靈敏度、特異度分別為 0.755(40/53)、1.000(50/50),見表2。相比于單獨(dú)檢測,兩者聯(lián)合檢測的靈敏度與特異度均得到較大提高,且與臨床確診結(jié)果的一致性處于良好水平(Kappa=0.749)。

        表2 外周血Cryab聯(lián)合MRI檢測情況分析(例)

        3 討論

        NMO又被稱為Devic綜合征,是由一組體液免疫參與的抗原-抗體介導(dǎo)的嚴(yán)重中樞神經(jīng)系統(tǒng)特發(fā)性炎性脫髓鞘性疾病,發(fā)病過程中患者常常伴隨視神經(jīng)炎和脊髓炎反復(fù)發(fā)作,由于臨床研究對NMO的認(rèn)識不足,缺乏良好診斷的依據(jù),導(dǎo)致患者臨床診斷與治療效果較差[7-8]。研究表明,早期有效診斷可以明顯降低NMO復(fù)發(fā)率和致殘率,對于治療NMO具有極大的意義[9]。

        NMO發(fā)病過程中主要損傷中樞神經(jīng)系統(tǒng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞[10],對星形膠質(zhì)細(xì)胞起保護(hù)作用的Cryab就成為一個研究熱點(diǎn)。Cryab是晶狀體中的主要蛋白成分之一,屬于小分子熱休克蛋白家族[11],與多種眼科疾病如白內(nèi)障[12]、NMO[13]等的發(fā)生與發(fā)展密切相關(guān)。研究Cryab在不同疾病中的表達(dá)狀態(tài)能為疾病預(yù)防和治療提供一定的理論依據(jù)[14],相關(guān)研究顯示,視神經(jīng)病變患者Cryab呈現(xiàn)出異常升高的狀態(tài)[15-16],與本研究結(jié)果基本一致。此外,本研究結(jié)果顯示Cryab表達(dá)診斷NMO的靈敏度和特異度分別為0.774和0.860,進(jìn)一步證實(shí)了其診斷學(xué)價(jià)值。由于NMO的發(fā)病過程中會伴隨感覺減退甚至消失、四肢乏力、行走困難等中樞神性系統(tǒng)病變的特征,顱腦局部病變也是NMO的一個重要發(fā)病征象,既往研究指出,NMO患者的神經(jīng)病變主要集中在大腦皮質(zhì)下及深部腦白質(zhì)、脊髓束、胼胝體等與視神經(jīng)相關(guān)的神經(jīng)區(qū)域,病變形態(tài)大多數(shù)也呈現(xiàn)為斑片樣、點(diǎn)狀或類圓狀[17-18]。本研究結(jié)果也顯示NMO患者在MRI掃描中出現(xiàn)顱內(nèi)、視神經(jīng)內(nèi)病灶的部分強(qiáng)化,因此需要對NMO患者進(jìn)行MRI檢查輔助診斷[19]。本研究顯示MRI檢查對NMO診斷的靈敏度、特異度分別為0.679和1.000;根據(jù)特異度的表現(xiàn),證實(shí)對于NMO的診斷,MRI檢查必不可少,能夠與其他疾病較好地區(qū)分開;但同時根據(jù)MRI檢查在靈敏度上的表現(xiàn),說明對于NMO的診斷,單一的MRI檢查尚不足以滿足臨床診斷所需。因此本研究集兩者之優(yōu)勢,考察了Cryab表達(dá)聯(lián)合MRI檢測對NMO的診斷效能,發(fā)現(xiàn)兩者聯(lián)合檢測的靈敏度和特異度分別為0.775和1.000。

        綜上所述,外周血Cryab聯(lián)合MRI檢測能夠更加有效診斷NMO,對于早期有效診斷NMO具有極其重要的價(jià)值。同時兩者聯(lián)合檢測還能夠及時反映疾病發(fā)展情況,利于為疾病的治療提供更為科學(xué)的診斷依據(jù),提升NMO患者的臨床診治水平。

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