蔣剛健，陳慶豐，武文豪，黃德峰

(1.漯河市中心醫(yī)院 檢驗科，河南 漯河 462000；2.漯河市中心醫(yī)院 消化內(nèi)科，河南 漯河 462000)

肝硬化是臨床常見的慢性進(jìn)行性肝病，由一種或多種病因長期或反復(fù)作用形成的彌漫性肝損害。我國關(guān)于肝硬化的流行病學(xué)顯示[1]，大多數(shù)肝硬化患者由前期肝部炎癥致病。晚期的肝硬化患者常伴有上消化道出血、肝性腦病、繼發(fā)感染、脾功能亢進(jìn)、腹水、癌變等并發(fā)癥[2-3]。晚期肝硬化肝細(xì)胞病理組織學(xué)上有廣泛的肝細(xì)胞壞死、殘存肝細(xì)胞結(jié)節(jié)性再生、結(jié)締組織增生與纖維隔形成，其肝臟逐漸變形、質(zhì)硬而逐漸形成肝硬化。本研究旨在通過測定肝硬化腹水患者的免疫相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)，尋求其表達(dá)水平與患者病情進(jìn)展及SBP 發(fā)生是否存在相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析選取漯河市中心醫(yī)院2019年8月至2020年4月就診的60 名酒精性肝硬化患者臨床資料，其 中 男34例， 女26例，年 齡36 ～71 歲， 平 均年齡(48.35±9.26) 歲。按照肝功能分級，Child-Pugh 評分分為A 組(5 ～6 分)，B 組(7 ～9 分)，C 組(10 ～15分)，每組20例，另選取20例健康人群作為對照組。本研究通過醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)影像學(xué)、病理學(xué)活檢確診為肝硬化腹水患者；②臨床資料統(tǒng)計完整者；③對該課題知情同意，自愿參加，依從性良好，并簽署知情同意書者。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①妊娠期、哺乳期婦女；②合并有除肝臟外其余重要臟器功能障礙或損害者；③全身反應(yīng)嚴(yán)重者；④預(yù)計生存時間＜2 個月者；⑤入院時并發(fā)細(xì)菌或病毒性感染者。

1.2 方法

免疫相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)水平測定：禁食12 h 后于次日早8 點取靜脈血4 mL 于流式試管中，使用流式細(xì)胞儀( 美國貝克曼庫爾特公司DxFLEX 型) 檢測其白細(xì)胞分化抗原3+(CD3+)、白細(xì)胞分化抗原4+(CD4+)、白細(xì)胞分化抗原8+(CD8+) 水平，計算輔助/ 抑制T 淋巴細(xì)胞(CD4+/CD8+) 比值。

Th1 型、Th2 型細(xì)胞因子的測定：采用流式微球陣列技術(shù)(CBA) 法測定患者血清內(nèi)Th1 型細(xì)胞因子( 腫瘤壞死因子-α，TNF-α)、Th2 型細(xì)胞因子白介素-4(IL-4)、白介素-10(IL-10)、白介素-13(IL-13) 水平，試劑盒選用美國eBioscience 公司的CBA 試劑盒，嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行測定操作。

以腹水培養(yǎng)進(jìn)行患者SBP 診斷。

1.3 觀察指標(biāo)

①四組CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+表達(dá)水平的比較；②四組Th1 型、Th2 型細(xì)胞因子表達(dá)水平；③免疫相關(guān)細(xì)胞因子與病情進(jìn)展的相關(guān)性；④免疫水平與SBP 發(fā)生相關(guān)性

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

所有統(tǒng)計學(xué)資料都采用SPSS 18.0 統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料以±s表示，病情進(jìn)展的多分組單因素比較采用Kruskal-Wallis H 秩和檢驗。組間及多組比較采用Fisher 精確檢驗，采用Logistic 回歸分析相關(guān)性。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 四組免疫相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)水平比較

C 組CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平低于A 組、B 組及對照組；B 組CD3+、CD4+、CD8+水平低于A 組、對照組, 差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 四組免疫相關(guān)細(xì)胞因子比較(N=20，± s )

表1 四組免疫相關(guān)細(xì)胞因子比較(N=20，± s )

注：與對照組比較，①P ＜0.05；與 A 組比較，②P ＜0.05；與 B 組比較，③P ＜0.05。

CD3+ CD4+ CD8+ CD4+/CD8+組別 對照組 72.84±5.68 44.21±4.87 30.24±3.16 1.38±0.41 A 組 71.27±5.56 43.13±4.92 29.86±3.28 1.35±0.39 B 組 65.25±6.03①② 36.36±5.09①② 26.13±3.04①② 1.24±0.34 C 組 49.33±5.74①②③23.47±5.14①②③21.52±2.97①②③1.09±0.26①②F 51.648 92.352 31.819 3.588 P ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 0.017

2.2 四組免疫平衡Th1/Th2 型細(xì)胞因子表達(dá)水平比較

C 組TNF-α、IL-4、IL-10、IL-13 指標(biāo)水平明顯低于A 組、B 組、對照組；B 組TNF-α、IL-4、IL-10、IL-13指標(biāo)水平明顯低于A 組、對照組(P＜0.05)，A 組與對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。見表2。

表2 四組免疫平衡Th1/Th2表達(dá)水平比較(N=20，x± s ) 單位：pg·mL-1

2.3 免疫相關(guān)細(xì)胞因子與病情進(jìn)展的多元Logistic 回歸分析

以分組為因變量，免疫相關(guān)細(xì)胞因子CD3+、CD4+、CD8+水平及免疫平衡Th1/Th2 型細(xì)胞因子為自變量，進(jìn)行多元Logistic 回歸分析，結(jié)果顯示CD3+、CD4+、CD8+是患者病情進(jìn)展保護(hù)因素，TNF-α、IL-4、IL-10、IL-13是影響患者病情進(jìn)展的獨立危險因素。見表3。

表3 免疫相關(guān)細(xì)胞因子與病情進(jìn)展的多元Logistic回歸分析

2.4 免疫水平與SBP 發(fā)生的二元Logistic 回歸分析

以分組為因變量，免疫相關(guān)細(xì)胞因子CD3+、CD4+、CD8+水平及免疫平衡Th1/Th2 型細(xì)胞因子為自變量，進(jìn)行多元Logistic 回歸分析，通過結(jié)果可知 CD3+、CD4+、CD8+為患者發(fā)生SBP 的保護(hù)因素，TNF-α、IL-4、IL-10、IL-13 是影響患者發(fā)生SBP 的獨立危險因素。見表4。

表4 免疫水平與SBP發(fā)生的二元Logistics回歸分析

3 討 論

由于肝硬化患者早期肝臟本有的代償功能不會表現(xiàn)出明顯癥狀，中晚期則以肝功能損害和門脈高壓為主要表現(xiàn)[4]。腹水作為肝硬化的一種常見并發(fā)癥，肝硬化本身病情與臨床腹水有著直接聯(lián)系，且腹水是肝硬化病程發(fā)展過程中的重要轉(zhuǎn)折點，一旦腹水發(fā)生，患者病情便逐漸惡化[5-6]。

本結(jié)果認(rèn)為，就單因素分析結(jié)果來看，免疫水平越弱的肝硬化腹水患者病情越嚴(yán)重，現(xiàn)象分析如下：Th1細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞免疫所產(chǎn)生的細(xì)胞因子與患者肝臟部位的炎癥表現(xiàn)出相關(guān)性，IL-4、IL-10、IL-13 三種細(xì)胞因子共同參與了人體炎性反應(yīng)全過程，一方面，其可在患者機(jī)體局部激活炎癥反應(yīng)；另一方面，在人體血液循環(huán)系統(tǒng)內(nèi)，IL-4、IL-10、IL-13 三種細(xì)胞因子的少量釋放又可對抗炎反應(yīng)進(jìn)行調(diào)節(jié)，這是一種抗炎、促炎共同發(fā)生且處于平衡的狀態(tài)，當(dāng)其在血液內(nèi)釋放量上升時，穩(wěn)態(tài)失衡，則會對人體形成損傷。

而免疫相關(guān)細(xì)胞因子與患者SBP 發(fā)生的相關(guān)性研究結(jié)果顯示：免疫相關(guān)細(xì)胞因子與病情進(jìn)展的多元Logistic回歸分析結(jié)果CD3+、CD4+、CD8+水平以及TNF-α、IL-4、IL-10、IL-13 水平與患者病情程度表現(xiàn)出明顯相關(guān)性(P＜0.05)；免疫相關(guān)細(xì)胞因子與SBP 發(fā)生的二元Logistic 回歸分析結(jié)果CD3+、CD4+、CD8+水平及TNF-α、IL-4、IL-10、IL-13 水平與患者病情程度表現(xiàn)出明顯相關(guān)性(P＜0.05)，該項結(jié)果提示免疫相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)水平與酒精性肝硬化腹水患者SBP 發(fā)生存在明顯相關(guān)性，患者免疫力越低越容易形成有菌腹水。但值得注意的是，TNF-α、IL-4、IL-10、IL-13 是臨床常用的炎癥反應(yīng)指標(biāo)，在炎癥評價中往往較健康人體呈升高現(xiàn)象，而如前文分析結(jié)果所述，酒精性肝硬化腹水患者4 項指標(biāo)與其病情進(jìn)程存在相關(guān)性，若水平較低時，并不可直接診斷為無炎癥反應(yīng)發(fā)生，須對肝硬化腹水致病原因進(jìn)行準(zhǔn)確診斷，結(jié)合腹水培養(yǎng)結(jié)果給出最終結(jié)論。

綜上所述，酒精性肝硬化腹水患者機(jī)體免疫相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)水平與患者病情嚴(yán)重程度、SBP 發(fā)生存在明顯相關(guān)性，免疫相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)水平越低，肝硬化程度越嚴(yán)重，更容易發(fā)生SBP，應(yīng)針對其免疫力水平進(jìn)行藥物干預(yù)，避免感染發(fā)生。