何金軍,常 青,孟永會(huì),閆 安,王 琴,劉紅勤

貴州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院,貴州 貴陽(yáng) 550001

柞木（Xylosmaspp.）為大風(fēng)子科柞木屬植物，常綠灌木或小喬木，分布于秦嶺以南和長(zhǎng)江以南各地。其葉入藥，味苦、澀，性寒，具有清熱利濕、散瘀止血、消腫止痛之功效；其枝入藥，味苦，性干；具有催產(chǎn)之功效，民間單用或配方，用于跌打腫痛、骨折、脫臼、外傷出血、難產(chǎn)、胎死腹中?！侗静菥V目》記載，其木皮主治黃疸，鼠瘺，難產(chǎn)，葉主治腫毒，氣味苦平無(wú)毒。本課題主要調(diào)查貴陽(yáng)地區(qū)貴州柞木的種類(lèi)，通過(guò)形態(tài)學(xué)鑒別不同種類(lèi)。用貴州柞木原種提取液與氯化鈣溶液相互作用，了解其在體外有無(wú)絡(luò)合鈣的作用。

1 材料與方法

1.1 材料來(lái)源

貴陽(yáng)地區(qū)野生貴州柞木。

1.2 材料處理

主要試劑為氯化鈣、枸櫞酸鈉溶液、凝絮劑殼聚糖、去離子水、偶氮胂法總鈣測(cè)定試劑和鉀鈉鈣分析儀配套試劑。主要儀器為傅立葉紅外光譜儀、電子顯微鏡、高速離心機(jī)、全自動(dòng)生化分析儀。

藥物貴州柞木提取液準(zhǔn)備如下：稱(chēng)取貴州柞木100 g，置入大燒杯中，加去離子水浸泡5 h 后，煎熬2 次，每次1.5 h，保留提取液約300 mL，離心，棄去沉渣，按提取液體積的20%加入殼聚糖凝絮劑以除去溶液中的粗粒子，磁力攪拌0.5 h，放置過(guò)夜，離心。棄去沉渣，上層清液用0.45μm的微孔濾膜過(guò)濾，濾液置冰箱中備用，每毫升濾液相當(dāng)于0.3 mL 生藥。

1.3 野外調(diào)查

野外調(diào)查研究前，通過(guò)“中國(guó)知網(wǎng)”文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù)查閱了關(guān)于柞木研究的相關(guān)資料；參考了中醫(yī)中藥方面書(shū)籍，如《本草綱目》、《中藥學(xué)》、《中草藥全圖鑒》、《中國(guó)藥典中藥》等有關(guān)柞木的信息。收集整理出調(diào)查研究貴州柞木的基本原始資料。咨詢(xún)了我院藥學(xué)系的專(zhuān)家，走訪了貴陽(yáng)地區(qū)的民間采藥師，基層中醫(yī)師和當(dāng)?shù)卮迕?，初步了解貴州柞木在貴陽(yáng)地區(qū)的野生分布情況，基本種類(lèi)及民間應(yīng)用。在貴陽(yáng)地區(qū)民間采藥師的帶領(lǐng)下，實(shí)地考察了貴陽(yáng)地區(qū)野生貴州柞木的分布、種類(lèi)及生長(zhǎng)環(huán)境等。并對(duì)其拍照、采集野生藥材標(biāo)本，對(duì)其不同種類(lèi)之間形態(tài)學(xué)差異進(jìn)行研究。

1.4 絡(luò)合鈣的體外實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)分為二組，一組為貴州柞木提取液+氯化鈣+去離子水；另一組為枸櫞酸納溶液+氯化鈣+去離子水。每一組溶液總量為2 mL，氯化鈣為0.2 mL。具體實(shí)驗(yàn)方法見(jiàn)下表1 和表2。

表1 貴州柞木煎劑+氯化鈣+去離子水Table 1 Decoction+calcium chloride+deionized water of Xylosma spp.in Guizhou

表2 貴州柞木枸櫞酸納溶液+氯化鈣+去離子水Table 2 Sodium citrate solution+calcium chloride+deionized water of of Xylosma spp.in Guizhou

混勻，放置10 min 后離心取各試管上清液，檢測(cè)總鈣和離子鈣。檢測(cè)指標(biāo)分別檢測(cè)各組每一試管的總鈣和離子鈣的濃度。

2 結(jié)果與分析

2.1 調(diào)查結(jié)果

在貴陽(yáng)地區(qū)發(fā)現(xiàn)3 種類(lèi)別的柞木，包括柞木原種，2 個(gè)變種，即毛枝柞木和尾葉柞木。分散分布于貴陽(yáng)各地區(qū)，以柞木原種分布最廣，資源最多，相對(duì)集中，成片存在；毛枝柞木和尾葉柞木相對(duì)較少，呈散在分布，常單獨(dú)存在1 株或數(shù)株，不成林。

2.1.1 柞木（原種）常綠大灌木或小喬木，樹(shù)高約3～13 m；樹(shù)桿非筆直向上，樹(shù)桿無(wú)刺，樹(shù)皮呈棕灰色，粗糙不平，可見(jiàn)條狀裂縫，表皮不規(guī)則從下面向上反卷呈小片，裂片向上反卷；枝條較多，枝條上亦無(wú)刺(圖1a)。樹(shù)葉薄，菱狀橢圓形至卵狀橢圓形，長(zhǎng)3～9 cm，寬2～4 cm，遠(yuǎn)端呈圓弧形，基部漸尖，邊緣有鋸齒，兩面無(wú)毛或在近基部中脈有污毛；葉柄短，長(zhǎng)約2 mm，有短毛(圖1b)。

圖1 柞木（原種）Fig.1 Xylosma sp.(original species)

2.1.2 毛枝柞木（變種1）常綠小喬木，樹(shù)高約2～3 m；樹(shù)桿筆直向上，樹(shù)桿有刺，樹(shù)皮呈棕色，較光滑，表皮無(wú)裂片及反卷；枝條較多，枝條上亦有刺，有密長(zhǎng)柔毛（見(jiàn)圖2a）；樹(shù)葉薄，長(zhǎng)3～6 cm，寬2～4 cm，葉寬卵形，遠(yuǎn)端漸尖，基部圓形，邊緣有細(xì)齒，上面脈上有毛，下面有疏短柔毛，葉柄稍長(zhǎng)，長(zhǎng)約5 mm，無(wú)毛（見(jiàn)圖2b）。

圖2 毛枝柞木（變種1）Fig.2 Xylosma sp.(variant 1)

2.1.3 尾葉柞木（變種2）常綠大灌木或小喬木，樹(shù)高約3～16 m；樹(shù)桿筆直向上，樹(shù)桿有刺，樹(shù)皮呈棕灰色，粗糙不平，無(wú)裂縫，表皮可見(jiàn)散在不規(guī)則從上向下反卷小片，枝條較多，枝條上亦有刺（見(jiàn)圖3a）。樹(shù)葉薄，葉橢圓形，近無(wú)毛，長(zhǎng)4.5～12 cm，寬2～4 cm，兩端漸尖，頂端尾狀漸尖，基部楔形，邊緣細(xì)鋸齒，干后紅棕色，葉柄短，長(zhǎng)約3 mm，有短柔毛（見(jiàn)圖3b）。

圖5 尾葉柞木（變種2）Fig.3 Xylosma sp.(variant 2)

2.2 體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果

通過(guò)加入不同濃度的枸櫞酸鈉溶液，隨著枸櫞酸鈉濃度的增加，離子鈣含量和總鈣濃度越來(lái)越低，但隨著柞木提取液濃度的增加，而離子鈣含量和總鈣濃度卻沒(méi)有減少。見(jiàn)表3 和表4。

表3 柞木提取液的不同濃度梯度配制離子鈣和總鈣含量結(jié)果Table 3 Results of ion calcium and total calcium content in different concentration gradients of Xylosma sp.extract

表4 枸櫞酸鈉不同濃度梯度配制離子鈣和總鈣含量結(jié)果Table 4 Ion calcium and total calcium content results of different concentration gradients of sodium citrate

3 討論

柞木在日常生活中應(yīng)用非常廣泛，因其材質(zhì)優(yōu)良，可用于制作地板、家具等[1]，亦有人用柞木打造各種工藝品，因柞木有特殊的醇香味道，故有人用其制作盛裝高檔酒類(lèi)的容器[2]。柞枝木屑可用栽培滑菇[3]。

目前國(guó)內(nèi)外對(duì)于貴州柞木研究較少，而對(duì)于貴州柞木所屬的大風(fēng)子科屬植物研究相對(duì)較多，從大風(fēng)Hydnocarpus wightiana的種子中分離的3 個(gè)黃酮木脂素化合物均可抗鼠L-1210 白血病細(xì)胞生長(zhǎng)、抗人類(lèi)鼻咽癌KB、結(jié)腸癌、骨癌和子宮肉瘤的生長(zhǎng)[4]。Itokawa H 等發(fā)現(xiàn)Casearia sylvestris中的Casearins 二萜類(lèi)成分具有抗腫瘤活性，對(duì)于V-79 細(xì)胞顯示出較強(qiáng)的細(xì)胞毒活性[5]。Oberlies NH等從C.sylvestris枝葉中分離得到Casearvestrins A-C，在一組包含肺、結(jié)腸和卵巢癌的腫瘤細(xì)胞的毒性研究中3 個(gè)化合物的IC50為0.2～0.8μmol/L[6]。崔肇春和朱正美的研究結(jié)果初步表明，柞木有一定的溶石趨勢(shì)，值得進(jìn)一步深入研究[7]。千高峰等驗(yàn)證柞木對(duì)小鼠前胃增生、癌變有抑制作用，可能是一種能阻斷食管上皮增生和癌變的高效低毒中草藥[8]。凌思凱，徐正仁等研究發(fā)現(xiàn)南嶺柞木化學(xué)成分兒茶素-5-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和(±)-兒茶素及箣柊的化學(xué)成分Xylosmin 對(duì)蛇毒磷酸二酯酶有酶抑制活性[9]。Hyun JE 等報(bào)道，柞木枝條提取物對(duì)lps 誘導(dǎo)的RAW264.7 細(xì)胞的抗炎作用[10]。

4 結(jié)論

通過(guò)對(duì)貴州省貴陽(yáng)地區(qū)的實(shí)地考察，發(fā)現(xiàn)貴陽(yáng)地區(qū)共有3 種不同的貴州柞木，包括原種及2 個(gè)變種。其中柞木原種在當(dāng)?shù)赜址Q(chēng)之為“青杠木”，常成片生長(zhǎng)，可成林，因其材質(zhì)緊密，常用于制作木炭。三者從外觀上差異較大，通過(guò)樹(shù)桿、枝葉的形態(tài)便可以鑒別，柞木原種樹(shù)桿高，可達(dá)10 余m，但非筆直向上，且樹(shù)桿無(wú)刺，樹(shù)皮呈棕灰色，粗糙不平；而尾葉柞木樹(shù)桿亦高達(dá)10 余m，但其是筆直向上，樹(shù)桿有刺；毛枝柞木樹(shù)桿不高，一般不超過(guò)3 m，樹(shù)桿筆直向上，樹(shù)桿有刺，樹(shù)皮呈棕色，較光滑，表皮無(wú)裂片及反卷；三種柞木樹(shù)葉形態(tài)亦有別，柞木原種樹(shù)葉與2 個(gè)變種樹(shù)葉差別大，粗看便可鑒別，柞木原種樹(shù)葉菱狀橢圓形至卵狀橢圓形，遠(yuǎn)端呈圓弧形，基部漸尖，邊緣有鋸齒；2個(gè)變種樹(shù)葉形態(tài)需細(xì)看，毛枝格木樹(shù)葉寬卵形，遠(yuǎn)端漸尖，基部圓形，邊緣有細(xì)齒，葉柄稍長(zhǎng)；而尾葉柞木樹(shù)葉橢圓形，兩端漸尖，頂端尾狀漸尖，基部楔形，邊緣細(xì)鋸齒，干后紅棕色，葉柄短。

本次體外絡(luò)合鈣實(shí)驗(yàn)選用的是柞木原種，通過(guò)其與氯化鈣混合，測(cè)定其離子鈣含量和總鈣濃度，對(duì)照組為枸櫞酸鈉與氯化鈣混合，通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，通過(guò)加入不同濃度的枸櫞酸鈉溶液，隨著枸櫞酸鈉濃度的增加，離子鈣含量和總鈣濃度越來(lái)越低，但隨著柞木提取液濃度的增加，而離子鈣含量和總鈣濃度卻沒(méi)有減少，得出枸櫞酸鈉能夠絡(luò)合鈣，而柞木提取液在體外不能鉻合鈣，故沒(méi)有體外溶解含鈣結(jié)石的效果。