張鎧麟 劉宸瑩

（上海市市西初級(jí)中學(xué)，上海 200040）

少年兒童天性活潑好動(dòng)，雙手容易粘上各種細(xì)菌病毒，由于年幼且抵抗力較差，更易感染各種疾病。同時(shí)，兒童的手部表皮薄，屏障作用弱，易受外界環(huán)境的損傷，因此洗手成為簡(jiǎn)單有效的預(yù)防疾病傳播途徑。

我們?nèi)粘＝佑|的細(xì)菌種類不計(jì)其數(shù)，主要不外乎以下幾種：大腸桿菌是腸道中重要的正常菌群，但當(dāng)宿主抵抗力下降或細(xì)菌侵入腸道外組織或器官后即可成為條件致病菌，引起腸道內(nèi)疾病，如胃腸炎、腹瀉等；沙門氏菌是一種重要的人獸共患病條件性致病菌，感染人后，最常表現(xiàn)為胃腸炎，易引起惡心、嘔吐、腹痛等癥狀，過量時(shí)可造成食物中毒，危及人的生命安全；金黃色葡萄球菌是常見的致病菌，可引起人體何種部位的感染，如敗血癥、肺炎、慢性腎炎、泌尿系統(tǒng)感染等，嚴(yán)重者可造成病毒性休克；志賀氏菌俗稱痢疾桿菌,是人類細(xì)菌性痢疾最為常見的病原菌。

研究表明，正常的洗手能有效降低兒童因細(xì)菌、病毒感染引起腹瀉和呼吸道疾病的可能性。與其它洗手產(chǎn)品相比，洗手液都具有抗、抑菌功效，方便快捷，實(shí)用性強(qiáng)，且易清潔的特點(diǎn)。其主要成分有表面活性劑（起清潔作用）、防腐劑、保濕劑、PH 調(diào)節(jié)劑、香精、色素和增稠劑等。然而目前市場(chǎng)上大多數(shù)洗手液使用加工性化學(xué)抑菌劑，主要的有機(jī)抑菌劑有4-氯-3,5-二甲酚、三氯卡班和三氯生DP300 等。這兩種抑菌劑對(duì)環(huán)境還有著極大的危害，在水、土壤、農(nóng)作物，甚至人類的尿液、血液、乳汁中都能檢測(cè)到。并且在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，這兩種有機(jī)物還有擾亂生殖系統(tǒng)和新陳代謝機(jī)制正常發(fā)展的危害。

在大多數(shù)市售洗手液中，還加入了合成香精成分。美國(guó)國(guó)家科學(xué)園在1986 年公布的六大神經(jīng)毒素中，就包含香精。此外還有殺蟲劑，重金屬，溶劑，食品添加劑，空氣污染物。神經(jīng)毒素的危害：損傷后中樞神經(jīng)，導(dǎo)致出生缺陷，催發(fā)阿茲海默癥，誘發(fā)癌癥等。據(jù)統(tǒng)計(jì)顯示，引起皮膚功能障礙的化妝品原料中最危險(xiǎn)的是香料，其次是色素和防腐殺菌劑，它們被稱為化妝品的“三害”。造成傷害的比例分別是得料占50.6%，色素占43.9%，防腐劑殺菌劑占4.9%。合成香精的成分很多，例如鄰苯二甲酸鹽，被爆會(huì)影響生殖，影響幼兒發(fā)育；合成麝香：會(huì)影響雄性激素和孕激素的分泌，從而影響荷爾蒙；還有可能增加乳腺癌細(xì)胞的繁殖等等。

均上所述，市售洗手液產(chǎn)品中常見的化學(xué)抑菌劑和合成香精會(huì)對(duì)兒童產(chǎn)生不可逆的危害。因此適合兒童使用的洗手液，必須選用無毒、無刺激/低刺激的原料，并應(yīng)盡量避免使用合成香精。精油作為純天然的芳香產(chǎn)品，其本身氣味就芳香怡人，不需要另外添加合成香精。植物精油對(duì)細(xì)菌、真菌和病毒都有著廣譜的抑菌性。

根據(jù)文獻(xiàn)研究，選取羅勒精油、雪松精油、牛至精油和百里香精油四種常見抑菌作用較強(qiáng)植物精油，并加入薰衣草精油和天竺精油，這兩種精油本身也有一定抑菌作用，并且氣味芳香。研究四組組合精油對(duì)革蘭氏陰性的大腸桿菌、沙門氏菌、志賀氏菌和革蘭氏陽性的金黃色葡萄球菌的抗細(xì)菌活性。

本實(shí)驗(yàn)將抑菌效果最好的一組精油加入洗手液中，制出實(shí)用的純天然抑菌洗手液，精油成分天然無危害且更為方便快捷，也為芳香植物精油的綜合開發(fā)利用提供一些有益的參考。

一、材料與方法

（一）材料與試劑

本研究所用精油均使用法國(guó)普羅芳品牌有機(jī)精油，包括A，10%羅勒-1%薰衣草-1%天竺葵復(fù)配；B，10%雪松-1%薰衣草-1%天竺葵復(fù)配；C，10%牛至-1%薰衣草1%天竺葵復(fù)配；D，10%百里香-1%薰衣草-1%天竺葵復(fù)配。供試細(xì)菌包括：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌和志賀氏菌。實(shí)驗(yàn)試劑包括：吐溫-80、胰蛋白胨、酵母提取物、氯化鈉、瓊脂粉，購于國(guó)藥試劑有限公司。

實(shí)驗(yàn)儀器：高壓蒸汽滅菌鍋；電熱恒溫培養(yǎng)箱；游標(biāo)卡尺；磁力攪拌器；DELTA320 型pH 計(jì)；超凈工作臺(tái)；恒溫?fù)u床。

（二）實(shí)驗(yàn)方法

1.培養(yǎng)基制備細(xì)菌培養(yǎng)用液體培養(yǎng)基：胰蛋白胨 10 克，酵母提取物 5 克，氯化鈉 10 克，定容到 1 000 毫升，高壓蒸汽滅菌30 分鐘。

細(xì)菌培養(yǎng)用固體培養(yǎng)基：存液體培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上加入l 5 克瓊脂糖，分裝后12l ℃高壓滅菌30 分鐘。

2.菌懸液制備

在超凈臺(tái)中，從活化的菌種試管中用無菌接種環(huán)分別刮取大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、志賀氏菌和沙門氏菌菌體放于四管液體培養(yǎng)基中，放于恒溫振蕩培養(yǎng)箱中37℃，120r/min，之后使用平板計(jì)數(shù)法調(diào)整細(xì)菌濃度為106～107 cfu／mL，備用。

3.紙片法測(cè)量抑菌圈大小

已制備的固體培養(yǎng)平板中加入100 微升各菌液，涂布均勻，貼上用打孔器制備直徑為6 毫米的圓形濾紙片（121℃滅菌30 分鐘后），在其中央加入10 微升精油（A、B、C、D），以吐溫-80 作陰性對(duì)照（如圖1），待菌液不再流動(dòng)，在37℃恒溫培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)24 小時(shí)。試驗(yàn)重復(fù)三次.交叉法測(cè)量抑菌圈的直徑3 次，取平均值，分析其抑菌活性。

4.平板涂布法

精油配制：取 50 微升上述紙片法實(shí)驗(yàn)中抑菌效果最好的混合精油組合，用 95% 乙醇稀釋成 1%精油原液，振蕩條件下用純水稀釋到 0.25%、0.125%、0.0625%、0.0310%。

用平板涂布法探究最低抑菌濃度。先將培養(yǎng)皿滅菌，，倒入15 毫升左右培養(yǎng)基，待凝固之后加入各濃度精油，涂抹均勻（如圖2），再在每個(gè)培養(yǎng)基加入大腸桿菌和志賀氏菌100 微升菌懸液。各濃度做三個(gè)重復(fù)，放入恒溫培養(yǎng)箱中，37℃培養(yǎng)24 小時(shí)。根據(jù)細(xì)菌群落生長(zhǎng)的面積大小來判斷最小抑菌濃度。

用平板涂布法探究洗手液抑菌效果：取所制的洗手液5 毫升置于滅菌試管中，將大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的菌懸液100 微升滴于試管，混勻后分別計(jì)時(shí)2 分鐘、5 分鐘、10 分鐘和20 分鐘后吸取0.5 毫升接種至平板培養(yǎng)基中，用吐溫-80 作為實(shí)驗(yàn)陰性對(duì)照，取兩種菌的菌懸液直接涂于平板中做陽性對(duì)照。37℃恒溫培養(yǎng)48 小時(shí)后進(jìn)行平板菌落計(jì)數(shù)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的菌落總數(shù)，計(jì)算抑菌率，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3 次。

二、結(jié)果與分析

（一）植物精油的抑菌效果

從表1 可知，百里香混合精油（D）對(duì)大腸桿菌的抑制效果最好，能完全抑制大腸桿菌的生長(zhǎng)，。對(duì)于金黃色葡萄球菌，抑制效果最好的是羅勒精油，然后百里香>牛至>雪松，雪松精油到第二天已經(jīng)沒有了抑制作用。雪松精油和百里香對(duì)沙門氏菌都有著完全的抑制作用，但是羅勒精油和牛至精油分別在5 天和3 天地失去了抑制作用。四組精油對(duì)志賀氏菌的抑制效果表現(xiàn)最好，其中羅勒精油、雪松精油和百里香精油都完全抑制志賀氏菌的生長(zhǎng)，而牛至精油也能較好地抑制志賀氏菌，平板中只有少量的生長(zhǎng)。

表1 精油對(duì)供試菌的抑菌圈大小

綜上所述，百里香精油組合（D）對(duì)四種菌均有較好的抑制效果。

（二）最小抑菌濃度

為了進(jìn)一步研究百里香混合精油D 的抑菌能力，本試驗(yàn)用平板涂布法探討了百里香混合精油D 對(duì)大腸桿菌和志賀氏菌的最小抑菌濃度。最小抑菌濃度越小，則精油對(duì)該細(xì)菌的殺菌效果越好。試驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2 精油對(duì)供試菌的抑菌濃度

結(jié)果表明，百里香混合精油D 對(duì)大腸桿菌的最小抑菌濃度<0.031%，對(duì)志賀氏菌的最小抑菌濃度為0.0625%。

三、百里香精油洗手液的制作

（一）原料準(zhǔn)備

天然洗手液配方中主要含有表面活性劑（純植物蘋果氨基酸起泡劑）、甘油、去離子水、百里香精油、薰衣草精油、天竺葵精油、植物防腐劑等。

（二）制作步驟

1.將蘋果氨基酸起泡劑20%、甘油10%按比例混勻；

2.加入去離子水，搖晃后混勻；

3.加入百里香精油，最終濃度為0.25%，再加入薰衣草和天竺葵精油，最終濃度為0.025%，得到自己滿意的香味；

4.加入植物防腐劑，最終濃度為1%；

5.用超聲滅菌30 分鐘，靜置36 小時(shí)；

6.裝入已滅菌的吸壓氏空瓶中備用。

（三）洗手液洗手前后抑菌效果比較

根據(jù)上述方法自制抑菌洗手液，并測(cè)試其效用結(jié)果。結(jié)果見表3、表4。由結(jié)果可見自制洗手液抑菌效果顯著。洗手液對(duì)大腸桿菌的抑菌效果顯著，2 分鐘抑菌率可達(dá)到95.05%，20 分鐘后抑菌率可達(dá)到98.27%。同樣的，對(duì)金黃色葡萄球菌，洗手液的抑菌效果極佳，結(jié)果顯示在10 分鐘之后抑菌率可達(dá)100%。

表3 洗手液對(duì)大腸桿菌的抑菌效果

表4 洗手液對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌效果

四、結(jié)論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，4 組混合精油對(duì)4 種供試菌，都有著一定的抑制作用，抑制活性按由大到小排列依次為：志賀氏菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、大腸桿菌。其中百里香混合精油的抑菌效果最為顯著，對(duì)4 種供試菌，除金黃色葡萄球菌有少量生長(zhǎng)外，其余均能完全抑制。說明百里香混合精油對(duì)革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌都有著很好的抑殺菌作用。

因此，本文選擇抑菌效果最好的百里香精油添加于自制洗手液中，且實(shí)驗(yàn)證明其抑菌效果顯著。其對(duì)于革蘭氏陰性菌、陽性菌幾乎可達(dá)100%的抑制率，具有高敏感性，是一個(gè)高效、光譜的抗菌洗手液。

此外精油還有自身的藥用價(jià)值，薰衣草有著促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)、護(hù)膚的作用，玫瑰天竺葵精油有著平衡皮脂腺分泌的功能。手的皮膚皮脂腺和汗腺更少，更容易干燥、開裂，植物精油護(hù)膚安全，更具實(shí)用價(jià)值，因此精油洗手液有著良好的市場(chǎng)前景。

本實(shí)驗(yàn)用以百里香為主的混合精油為抑菌劑研制出的天然洗手液，本身就具有植物獨(dú)特的怡人香氣，相對(duì)于市售產(chǎn)品，去除了有害物質(zhì)，更環(huán)保、更天然、更安全，是一款適合兒童使用的具有良好抑菌效果的精油洗手液。下一步如需應(yīng)用于日化產(chǎn)業(yè)，建議對(duì)其起泡性能、粘度、耐熱耐冷性等進(jìn)行進(jìn)一步的測(cè)試。