劉洋 張洋 范立強(qiáng) 趙夢(mèng)瑤 趙黎明

摘要：【目的】探究 N-乙酰氨基葡萄糖（N-acetyl-D-glucosamine，NAG）對(duì)水稻幼苗的抗寒效果及其潛在的抗寒機(jī)制，以期為NAG在農(nóng)業(yè)免疫誘抗領(lǐng)域的應(yīng)用提供理論依據(jù)?！痉椒ā恳运酒贩N內(nèi)5優(yōu)907為供試材料，外源施用不同濃度（0、50、100、150 mg/L）的NAG進(jìn)行根系培養(yǎng)，測(cè)定低溫條件下水稻幼苗的生長(zhǎng)指標(biāo)、葉綠素含量及可溶性糖含量，表征NAG的抗寒效果并篩選最適施用濃度。進(jìn)一步在生理生化水平從滲透調(diào)節(jié)系統(tǒng)、根系系統(tǒng)、抗氧化系統(tǒng)和脫落酸代謝途徑探究NAG對(duì)水稻幼苗的抗寒機(jī)制?！窘Y(jié)果】外源施用NAG可促進(jìn)水稻幼苗在低溫環(huán)境下正常生長(zhǎng)，具有明顯的抗寒效果，其最適施用濃度為100 mg/L，在此濃度下幼苗單株鮮重（0.118±0.009 g）、株高（21.21±0.72 cm）、根長(zhǎng)（5.76±0.43 cm）及可溶性糖（41.031±0.992 μg/g）和總?cè)~綠素含量（5.959±0.020 mg/g）較對(duì)照組漲幅最大，分別顯著增長(zhǎng)14.14%、7.14%、7.22%、63.09%和36.79%（P<0.05，下同）。生理生化水平相關(guān)結(jié)果表明，100 mg/L NAG促進(jìn)寒害幼苗中滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)積累，可溶性蛋白、脯氨酸和游離氨基酸積累量較低溫對(duì)照組分別顯著增長(zhǎng)19.58%、19.49%和36.82%;保護(hù)幼苗根系系統(tǒng)，促進(jìn)寒害幼苗根系活力提高至低溫對(duì)照組的1.56倍，并使莖葉組織中硝態(tài)氮含量下降15.65%;有效促進(jìn)幼苗中丙二醛積累量下降23.92%，并將超氧化物歧化酶（SOD）、過(guò)氧化物酶（POD）活力分別提高34.94%和25.42%，保護(hù)幼苗抗氧化系統(tǒng);增加寒害幼苗脫落酸代謝通路中OsNCED、OsSDR和AAO基因表達(dá)量至低溫對(duì)照組的3.52、1.73和1.64倍，從而實(shí)現(xiàn)幼苗中內(nèi)源脫落酸的積累。【結(jié)論】外源施用NAG根系處理能夠調(diào)控低溫脅迫下水稻幼苗滲透調(diào)節(jié)系統(tǒng)、根系系統(tǒng)、抗氧化系統(tǒng)及內(nèi)源脫落酸代謝途徑，進(jìn)而提高水稻抗寒性。

關(guān)鍵詞： N-乙酰氨基葡萄糖;水稻;抗寒性;脫落酸途徑

Abstract：【Objective】To evaluate the cold resistance effect of N-acetyl-D-glucosamineon on rice seedlings，and to further explore its potential cold resistance mechanism，with a view to providing the theoretical basis for the application of NAG in the field of agricultural immune induction. 【Method】With the rice variety Nei 5 You 907 as the test material，different concentrations（0，50，100，150 mg/L） NAG were exogenously applied to rice seedlings for root culture. The growth potential，growth index，chlorophyll content and soluble sugar content of rice seedlings under low temperature conditions were measured to characterize the cold resistance effect of NAG and to screen the optimum applied concentration. Furthermore，the cold resistance mechanism of NAG on rice seedlings was explored from osmotic adjustment system，root system，antioxidant system and abscisic acid metabolism pathways at the physiological and biochemical level. 【Result】Exogenous application of NAG promoted the growth of rice seedlings in low temperature environments，and had obvious cold resistance effect. The optimum applied concentration was 100 mg/L. Under this concentration，the fresh weight（0.118±0.009 g），plant height（21.21±0.72 cm），root length（5.76±0.43 cm），soluble sugar（41.031±0.992 μg/g） and the total chlorophyll content（5.959±0.020 mg/g）of seedlings increased the most in comparison with the control group，which significantly increased by 14.14%，7.14%，7.22%，63.09% and 36.79% respectively（P<0.05，the same below）. The results of the physiological and biochemical level showed that 100 mg/L NAG promoted the accumulation of osmotic adjustment substances， soluble protein， proline，free amino acid in the cold injury seedlings increased significantly by 19.58%，19.49% and 36.82% respectively compared with the control group;effectively protected the root system of seedlings，the root acti-vity of cold injury seedlings was increased to 1.56 times，and the nitrate nitrogen content in the stem and leaf tissues was decreased by 15.65% compared with the low-temperature control group;effectively reduced the accumulation of malondialdehyde in the cold injury seedlings by 23.92% and increased the activities of superoxide dismutase（SOD） and peroxidase（POD） by 34.94% and 25.42% respectively，thereby protecting the antioxidant system of seedlings;increased the OsNCED，OsSDR and AAO genes expression in the abscisic acid metabolism pathway to 3.52，1.73 and 1.64 times of low temperature control，so as to achieve the accumulation of endogenous abscisic acid in cold injury seedlings. 【Conclusion】Exogenous application of NAG with root treatment can regulate osmotic adjustment system，root system， antioxidant system and the endogenous abscisic acid metabolism pathway of rice seedlings under cold stress，thereby improving the cold resistance of rice.

Key words： N-acetyl-D-glucosamine; rice; cold resistance; abscisic acid pathway

0 引言

【研究意義】植物生長(zhǎng)過(guò)程中通常會(huì)面臨生物脅迫（病毒、蟲害、真菌等）及非生物脅迫（寒害、旱害、鹽堿、礦物質(zhì)缺乏、重金屬等）的壓力，其中溫度是植物生長(zhǎng)發(fā)育的重要條件之一（Lukatkin et al.，2012）。水稻作為亞熱帶喜溫植物，對(duì)低溫環(huán)境敏感，低溫會(huì)造成水稻幼苗生長(zhǎng)發(fā)育不良甚至死亡，嚴(yán)重影響水稻產(chǎn)量（Hussain et al.，2016）。為提高植物的抗寒能力，脫落酸、多效唑、氯膽堿等植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑及甜菜堿、多胺等化合物作為抗寒劑已被廣泛應(yīng)用（Hussain et al.，2018）?；瘜W(xué)抗寒劑雖效果較優(yōu)，但易產(chǎn)生化學(xué)殘留并危害植物生長(zhǎng)，造成環(huán)境污染。所以開發(fā)對(duì)植物威脅小、綠色、安全且具有良好經(jīng)濟(jì)效益的植物免疫誘抗劑尤為重要。目前，甲殼素及其衍生物作為含氮多糖，憑借其安全、綠色等優(yōu)勢(shì)已被廣泛應(yīng)用于免疫誘抗領(lǐng)域，N-乙酰氨基葡萄糖（N-acetyl-D-glucosamine，NAG）是葡萄糖分子中C2上羥基被乙酰氨基所替代的一種氨基己糖，是構(gòu)成甲殼素的結(jié)構(gòu)單元物質(zhì)，但其在植物免疫誘抗領(lǐng)域的應(yīng)用研究較為少見。此外，關(guān)于外源功能性糖在植物抗寒領(lǐng)域的機(jī)制研究尚不清晰，對(duì)于相關(guān)代謝通路的研究尚不深入。因此，探究NAG對(duì)水稻幼苗的抗寒作用及其潛在的抗寒機(jī)制，可為NAG在農(nóng)業(yè)免疫誘抗領(lǐng)域的應(yīng)用提供理論支撐，對(duì)保護(hù)水稻抵御外界低溫脅迫損傷具有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】郝林華等（2006）研究指出，牛蒡寡糖作為新型寡糖可顯著保護(hù)低溫脅迫后黃瓜幼苗細(xì)胞膜穩(wěn)定性及抗氧化酶系統(tǒng)，進(jìn)而調(diào)控植物抗寒。劉瑞志等（2009）研究發(fā)現(xiàn)，0.2%的褐藻寡糖通過(guò)提高煙草的抗逆酶活力，減少寒害對(duì)細(xì)胞組織的損傷，促進(jìn)其抵御寒害逆境。劉同梅（2018）研究表明，海藻酸鈉寡糖通過(guò)誘導(dǎo)水楊酸通路激活擬南芥免疫途徑達(dá)到抗病效果。此外，殼寡糖和幾丁寡糖作為兩種不同的甲殼素類氨基寡糖，已有較成熟的產(chǎn)品被開發(fā)應(yīng)用于植物免疫誘抗領(lǐng)域（Yin et al.，2016）。Shigeru等（2006）研究發(fā)現(xiàn)，幾丁寡糖通過(guò)誘導(dǎo)水稻根及葉中激發(fā)子響應(yīng)基因及抗性防御基因表達(dá)，在水稻中傳遞系統(tǒng)性信號(hào)并抵御稻瘟病真菌。姚艷平等（2013）研究表明，幾丁寡糖可通過(guò)誘導(dǎo)調(diào)控抗病相關(guān)酶活性及相關(guān)植物保衛(wèi)素等機(jī)制調(diào)控機(jī)體，抑制木霉菌的產(chǎn)生。王夢(mèng)雨等（2016）研究報(bào)道，噴施殼寡糖可促進(jìn)小麥中可溶性糖、脯氨酸等低溫抗性相關(guān)物質(zhì)表達(dá)，保護(hù)小麥抵抗低溫脅迫。田路（2019）研究了殼寡糖對(duì)不同花椒種質(zhì)間耐寒性差異的影響，發(fā)現(xiàn)100 mg/L殼寡糖處理能有效調(diào)節(jié)寒害花椒幼苗的滲透系統(tǒng)及抗氧化系統(tǒng)，從而促進(jìn)其抗寒?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】相關(guān)研究表明，乙?；鶊F(tuán)在植物免疫誘抗中發(fā)揮重要作用，而NAG作為一種含有乙?；鶊F(tuán)的甲殼素結(jié)構(gòu)單元，具有抗菌（Gaderer et al.，2017）、抗病（Kashulin et al.，2000）等多方面生理活性，推測(cè)其在水稻抗寒領(lǐng)域可能具有較大的應(yīng)用潛力，但其在農(nóng)作物免疫誘抗領(lǐng)域鮮有研究。同時(shí)，NAG現(xiàn)已實(shí)現(xiàn)發(fā)酵法進(jìn)行大規(guī)模的生物制造，將其應(yīng)用于農(nóng)業(yè)領(lǐng)域能降低現(xiàn)有抗寒成本，具有良好的經(jīng)濟(jì)效益和市場(chǎng)前景?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】以水稻品種內(nèi)5優(yōu)907為供試材料，外源施用不同濃度NAG進(jìn)行根系培養(yǎng)，測(cè)定并比較低溫條件下水稻幼苗的長(zhǎng)勢(shì)及生長(zhǎng)指標(biāo)，并進(jìn)一步在生理生化水平上分析NAG對(duì)水稻幼苗脫落酸代謝通路、滲透調(diào)節(jié)系統(tǒng)、根系系統(tǒng)和抗氧化系統(tǒng)的調(diào)控影響，探究NAG根系處理對(duì)水稻的抗寒效果及其潛在的抗寒機(jī)制，為NAG在農(nóng)業(yè)免疫誘抗領(lǐng)域的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

供試材料為內(nèi)5優(yōu)907水稻種子，購(gòu)自四川豐禾種業(yè)有限公司;N-乙酰氨基葡萄糖（分子式為C8H15NO6，分子量為221.09，純度為98%）購(gòu)自山東潤(rùn)德生物科技有限公司;脯氨酸、茚三酮、磺基水楊酸、硫代巴比妥酸和氮藍(lán)四唑等均為分析純，購(gòu)自泰坦科技股份有限公司。

1. 2 試驗(yàn)方法

1. 2. 1 植物培養(yǎng)與處理 選擇粒大飽滿、顆粒均勻的水稻種子置于清水中充分浸泡，將沉于底部的質(zhì)量較好的種子進(jìn)行清水漂洗并浸泡于75%乙醇溶液消毒15 min，清水沖洗數(shù)遍直至無(wú)乙醇?xì)埩?。將水稻種子置于30 ℃去離子水中浸種48 h，然后于30 ℃暗處催芽24 h。待其露白后，小心挑選露白一致的水稻種子移至96孔板中培養(yǎng)，然后將其移至植物光照培養(yǎng)箱中進(jìn)行水培。培養(yǎng)條件：溫度25 ℃，相對(duì)濕度75%，光照周期16 h/8 h（晝/夜）。為促進(jìn)水稻種子及時(shí)獲得營(yíng)養(yǎng)，結(jié)合幼苗培養(yǎng)過(guò)程中的實(shí)際生長(zhǎng)狀態(tài)，水培（去離子水）約7 d后換用營(yíng)養(yǎng)液培養(yǎng)（營(yíng)養(yǎng)液參照國(guó)際水稻研究所研制的營(yíng)養(yǎng)液配方配置），每隔2 d換液一次。

待幼苗生長(zhǎng)至2葉1心期（共14 d左右）時(shí)添加NAG進(jìn)行根系培養(yǎng)，具體方法如下：（1）抗寒效果濃度篩選時(shí)，NAG處理水平分別為0（對(duì)照）、50、100和150 mg/L。在光周期中光照條件下開始進(jìn)行幼苗加糖的根系培養(yǎng)，加糖處理48 h后，開始低溫脅迫處理（溫度為5 ℃）24 h。（2）抗寒機(jī)制研究時(shí)，基于篩選得到的最優(yōu)NAG處理濃度，幼苗分為常溫對(duì)照組（未加NAG根系處理幼苗，常溫培養(yǎng)）、常溫處理組（施用NAG最優(yōu)濃度根系處理幼苗，常溫培養(yǎng)）、低溫對(duì)照組（未加NAG根系處理幼苗，5 ℃低溫脅迫培養(yǎng)24 h）和低溫處理組（施用最優(yōu)NAG濃度根系處理幼苗，5 ℃低溫脅迫培養(yǎng)24 h）。隨后在光照處理?xiàng)l件下進(jìn)行取樣，液氮冷凍后儲(chǔ)存于-80 ℃冰箱，測(cè)定后續(xù)相關(guān)指標(biāo)。

1. 2. 2 幼苗生長(zhǎng)指標(biāo)測(cè)定 隨機(jī)選取40～50株新鮮水稻幼苗，將幼苗根部用濾紙輕輕擦拭以吸去根部表面水分，測(cè)定單株幼苗鮮重。分別測(cè)定幼苗根基部到最上部展開葉葉鞘頂部的距離和到根尖部位的距離，即為幼苗株高和根長(zhǎng)。

1. 2. 3 幼苗相關(guān)生理生化指標(biāo)測(cè)定 生理生化指標(biāo)測(cè)定參照王學(xué)奎和黃見良（2015）的方法。幼苗葉綠素含量采用乙醇提取比色法測(cè)定;可溶性糖含量采用蒽酮比色法測(cè)定;可溶性蛋白含量采用考馬斯亮藍(lán)染色法測(cè)定;脯氨酸含量采用磺基水楊酸比色法測(cè)定;游離氨基酸含量采用茚三酮顯色法測(cè)定;根系活力采用氯化三苯基四氮唑TTC法測(cè)定;莖葉組織硝態(tài)氮含量采用水楊酸法測(cè)定;幼苗丙二醛（MDA）含量采用硫代巴比妥酸反應(yīng)法測(cè)定;超氧化物歧化酶（SOD）活力采用氮藍(lán)四唑法測(cè)定，過(guò)氧化物酶（POD）活力采用愈創(chuàng)木酚顯色法測(cè)定;脫落酸含量參照酶聯(lián)免疫分析試劑盒（紀(jì)寧生物科技有限公司）的說(shuō)明方法測(cè)定。

1. 2. 4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)定脫落酸通路關(guān)鍵基因表達(dá) 水稻葉片總RNA提取、反轉(zhuǎn)錄及實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)定分別按照相應(yīng)試劑盒說(shuō)明書（諾唯贊生物科技有限公司）進(jìn)行。于NCBI搜索水稻脫落酸代謝通路相關(guān)基因及常用水稻內(nèi)參基因β-Actin序列，所用引物序列詳見表1。

1. 3 統(tǒng)計(jì)分析

采用Excel 2010及SPSS 21進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，采用GraphPad Prism 8.0作圖，采用LSD法進(jìn)行數(shù)據(jù)顯著差異性分析。

2 結(jié)果與分析

2. 1 NAG對(duì)水稻幼苗抗寒性的影響

2. 1. 1 不同濃度NAG對(duì)低溫脅迫下水稻幼苗生長(zhǎng)的影響 經(jīng)不同濃度NAG根系培養(yǎng)后，由寒害幼苗整體生長(zhǎng)情況（圖1-A）可看出，低溫寒害后，0 mg/L對(duì)照組幼苗整體萎蔫不立挺，葉片形態(tài)發(fā)生變化，葉緣失水、葉尖卷曲;而經(jīng)50和100 mg/L NAG根系培養(yǎng)的幼苗表型更立挺，葉片顏色更鮮綠，幼苗整體生長(zhǎng)狀態(tài)較對(duì)照組更優(yōu)。表明外源施用NAG能夠緩解低溫對(duì)水稻的傷害，保護(hù)水稻幼苗。

由圖1-B和圖1-C可知，與0 mg/L對(duì)照組相比，經(jīng)50、100和150 mg/L NAG處理后幼苗的單株鮮重分別增加11.94%、14.14%和9.93%;株高分別增加3.81%、7.14%和6.38%，且均與對(duì)照組差異顯著（P<0.05，下同）。從圖1-D可看出，50 mg/L NAG根系培養(yǎng)后幼苗根長(zhǎng)與對(duì)照組無(wú)顯著差異（P>0.05，下同），而100和150 mg/L NAG根系培養(yǎng)后幼苗的根長(zhǎng)較對(duì)照組分別顯著增加7.22%和5.87%。可見NAG根系處理對(duì)幼苗在低溫條件下的促生長(zhǎng)效果顯著，能保護(hù)幼苗正常生長(zhǎng)，其中，100 mg/L NAG處理組幼苗恢復(fù)生長(zhǎng)的效果最佳，其單株鮮重（0.118±0.009 g）、株高（21.21±0.72 cm）和根長(zhǎng)（5.76±0.43 cm）均為最大值。

2. 1. 2 不同濃度NAG對(duì)低溫脅迫下水稻幼苗葉綠素及可溶性糖含量的影響 圖2-A和圖2-B分別顯示了不同濃度NAG根系培養(yǎng)的幼苗在低溫脅迫24 h及低溫脅迫后于正常溫度下恢復(fù)生長(zhǎng)時(shí)葉綠素含量的變化。由圖2-A可知，與0 mg/L對(duì)照組相比，經(jīng)50、100和150 mg/L NAG處理后寒害幼苗的葉綠素a、葉綠素b和總?cè)~綠素含量均呈增加趨勢(shì)，且同一指標(biāo)不同處理組間差異顯著，其中，100 mg/L NAG處理對(duì)寒害幼苗光合系統(tǒng)的促進(jìn)作用相對(duì)較好，其葉綠素a含量（4.253±0.016 mg/g）、葉綠素b含量（1.707±0.008 mg/g）及總?cè)~綠素含量（5.959±0.020 mg/g）較對(duì)照組增幅最大，分別顯著增加36.65%、37.13%和36.79%。說(shuō)明NAG根系處理能促進(jìn)寒害幼苗葉綠素的合成，保護(hù)幼苗進(jìn)行正常的光合作用以抵御寒害損傷。由圖2-B可知，100 mg/L NAG處理還能顯著促進(jìn)寒害幼苗在恢復(fù)生長(zhǎng)過(guò)程中的葉綠素積累，保證后續(xù)正常生長(zhǎng)，相比對(duì)照組其幼苗中葉綠素a、葉綠素b和總?cè)~綠素含量分別顯著提高14.76%、20.17%和18.94%。

從圖2-C可知，50、100和150 mg/L NAG根系處理促進(jìn)了幼苗在低溫下滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)可溶性糖的積累，分別較對(duì)照組增加23.26%、63.09%和40.46%，其中，100 mg/L NAG處理組的可溶性糖含量（41.031±0.992 μg/g）增長(zhǎng)趨勢(shì)最明顯，且各處理組間差異均達(dá)顯著水平。說(shuō)明NAG可有效調(diào)控寒害幼苗機(jī)體滲透勢(shì)，從而保護(hù)幼苗抵御寒害損傷。

綜合對(duì)比幼苗的長(zhǎng)勢(shì)、生長(zhǎng)指標(biāo)、葉綠素含量及可溶性糖積累等結(jié)果，發(fā)現(xiàn)低溫脅迫過(guò)程中，外源施用一定濃度的NAG可保護(hù)水稻幼苗在低溫環(huán)境下正常生長(zhǎng)，提高水稻的抗寒效果。從不同濃度NAG的抗寒效果及經(jīng)濟(jì)效益考慮，本研究中100 mg/L為最適施用濃度。

2. 2 NAG對(duì)水稻幼苗的抗寒生理生化機(jī)制研究

2. 2. 1 NAG對(duì)水稻幼苗滲透調(diào)節(jié)系統(tǒng)的影響 由圖3-A可看出，100 mg/L NAG根系處理對(duì)常溫環(huán)境幼苗起到促生長(zhǎng)作用，同時(shí)在一定程度上緩解了低溫對(duì)水稻生長(zhǎng)的損傷，促進(jìn)幼苗正常生長(zhǎng)。

由圖3-B～圖3-D可看出，低溫對(duì)照組的可溶性蛋白含量較常溫對(duì)照組提高19.88%，低溫處理組的可溶性蛋白含量較常溫處理組提高13.83%;低溫對(duì)照組幼苗脯氨酸含量是常溫對(duì)照組幼苗的1.93倍，而低溫處理組幼苗的脯氨酸含量升高至常溫處理組的2.07倍，表明在遭受低溫脅迫后，水稻幼苗能在一定程度上通過(guò)積累可溶性蛋白和脯氨酸來(lái)調(diào)控自身代謝，而外源施用NAG進(jìn)一步促進(jìn)了寒害幼苗中可溶性蛋白、脯氨酸和游離氨基酸的積累量，較低溫對(duì)照組分別顯著增長(zhǎng)19.58%、19.49%和36.82%，從而更進(jìn)一步調(diào)控幼苗機(jī)體滲透勢(shì)，保護(hù)其抵抗寒害逆境影響。

2. 2. 2 NAG對(duì)水稻幼苗根系系統(tǒng)的影響 由圖4-A可看出，低溫脅迫會(huì)導(dǎo)致幼苗的根系活力下降，其中低溫對(duì)照組的根系活力較常溫對(duì)照組幼苗降低23.15%，低溫處理組的根系活力較常溫處理組降低36.17%;而外源NAG能在常溫及低溫環(huán)境下促進(jìn)幼苗根系活力分別提高至相應(yīng)對(duì)照的1.88和1.56倍，說(shuō)明NAG能有效緩解低溫對(duì)幼苗根系的傷害，從而保護(hù)水稻根系抵御逆境脅迫。

由圖4-B可知，低溫脅迫24 h后低溫對(duì)照組水稻幼苗莖葉部位的硝態(tài)氮含量較常溫對(duì)照組提高23.62%，表明低溫會(huì)造成幼苗莖葉組織的硝態(tài)氮積累，抑制其被進(jìn)一步轉(zhuǎn)化利用;而NAG處理顯著降低常溫及寒害幼苗中硝態(tài)氮含量，較相應(yīng)對(duì)照組分別降低12.37%和15.65%，促進(jìn)了幼苗莖葉組織對(duì)根系硝態(tài)氮的充分轉(zhuǎn)化，從而調(diào)控機(jī)體代謝并抵御寒害。

2. 2. 3 NAG對(duì)水稻幼苗抗氧化系統(tǒng)的影響 由圖5-A可知，低溫會(huì)導(dǎo)致水稻幼苗中MDA積累，其中低溫對(duì)照組水稻幼苗MDA含量較常溫對(duì)照組顯著增加36.65%，而低溫處理組幼苗較常溫處理組僅增加11.63%，可見NAG根系處理能減緩低溫環(huán)境幼苗的MDA積累。同時(shí)外源NAG能有效降低寒害幼苗中MDA含量，較低溫對(duì)照組顯著下降23.92%。

由圖5-B和圖5-C可知，寒害處理后低溫對(duì)照組較常溫對(duì)照組幼苗的SOD活力顯著提高19.68%，POD活力顯著提高20.21%。NAG的施用能進(jìn)一步提高幼苗的SOD和POD活力，其中常溫處理組較常溫對(duì)照組幼苗SOD活力顯著提高36.34%，POD活力略有提高但差異不顯著;而低溫處理組較低溫對(duì)照組幼苗的SOD和POD活力分別顯著提高34.94%和25.42%，表明NAG有效保護(hù)了幼苗的抗氧化系統(tǒng)，減緩過(guò)氧化損傷以抵抗寒害逆境。

2. 2. 4 NAG對(duì)水稻幼苗脫落酸代謝調(diào)節(jié)的影響

由圖6-A可看出，低溫脅迫后，幼苗自身脫落酸積累量增加，低溫對(duì)照組幼苗的脫落酸含量較常溫對(duì)照組增加16.18%;外源施用NAG后低溫處理組較低溫對(duì)照組幼苗的脫落酸含量顯著提高16.45%，說(shuō)明NAG根系處理能進(jìn)一步促進(jìn)寒害幼苗的脫落酸積累。

OsZEP、OsNCED、OsSDR和AAO基因是植物脫落酸代謝通路中4類關(guān)鍵酶——玉米黃質(zhì)環(huán)氧化酶（Zeaxanthin epoxidase，ZEP）、9-順式-環(huán)氧類胡蘿卜素雙加氧酶（9-cis-epoxycarotenoid dioxygenase，NCED）、短鏈醇脫氫/還原酶（Short chain dehydrogenases/reductases，SDR）和脫落醛氧化酶（Abscisic aldehyde oxidase，AO）分別對(duì)應(yīng)的4個(gè)關(guān)鍵調(diào)控基因（Wan and Li，2004）。由圖6-B～圖6-E可知，正常條件下，NAG常溫處理組幼苗中OsNCED和AAO基因相對(duì)表達(dá)量分別增長(zhǎng)至常溫對(duì)照組的2.32和1.50倍，OsZEP基因相對(duì)表達(dá)量顯著下降，而OsSDR基因相對(duì)表達(dá)量無(wú)顯著變化。低溫脅迫后，無(wú)論是無(wú)糖處理組還是NAG處理組水稻幼苗中4種基因的相對(duì)表達(dá)量均呈下降趨勢(shì);但外源施用NAG能顯著促進(jìn)寒害幼苗中OsNCED、AAO和OsSDR基因的相對(duì)表達(dá)。其中，低溫處理組幼苗的OsNCED和AAO基因相對(duì)表達(dá)量分別顯著提升至低溫對(duì)照組的3.52和1.64倍，OsSDR基因相對(duì)表達(dá)量增長(zhǎng)至1.73倍，幾乎已恢復(fù)至幼苗未經(jīng)寒害處理時(shí)的水平。表明NAG根系處理能在低溫脅迫條件下調(diào)控水稻幼苗脫落酸代謝途徑中OsNCED、OsSDR和AAO等脫落酸生物合成關(guān)鍵基因的表達(dá)，從而進(jìn)一步顯著促進(jìn)寒害水稻幼苗中內(nèi)源脫落酸的合成與積累來(lái)抵御寒害損傷。

3 討論

植物的生長(zhǎng)狀態(tài)能直觀地反映植物面對(duì)外界寒害等逆境的感應(yīng)及耐受能力。研究表明低溫會(huì)延緩水稻等農(nóng)作物的生長(zhǎng)發(fā)育，造成葉片壞死、脫色、白化、衰老發(fā)黃萎蔫、葉面積減小等嚴(yán)重?fù)p傷（Li et al.，2017）。本研究發(fā)現(xiàn)，外源施用NAG根系培養(yǎng)能有效緩解寒害下水稻幼苗萎蔫、葉緣失水、葉尖卷曲等不良狀態(tài)，使幼苗的生長(zhǎng)狀態(tài)更優(yōu)，表明NAG能有效減緩低溫對(duì)水稻的損傷，具有促進(jìn)水稻抗寒的效果。植物單株鮮重、株高、根長(zhǎng)等生長(zhǎng)指標(biāo)能反映植物地上部分及根系組織的生長(zhǎng)情況，鄭典元等（2012）研究指出殼寡糖能促進(jìn)水稻株高、根長(zhǎng)等生長(zhǎng)指標(biāo)，降低電導(dǎo)率，提高過(guò)氧化氫酶（CAT）活性，進(jìn)而提高水稻抗寒性。張運(yùn)紅等（2017）研究表明，鎘脅迫下外源噴施海藻酸鈉寡糖可提高水稻幼苗的株高、穗長(zhǎng)和千粒重，進(jìn)而促進(jìn)水稻正常生長(zhǎng)發(fā)育。本研究結(jié)果與上述研究結(jié)果相似，施用NAG根系處理后水稻幼苗的單株鮮重、株高和根長(zhǎng)均較對(duì)照組明顯提高，表明NAG對(duì)低溫條件下水稻根系及地上莖葉組織的促生長(zhǎng)效果顯著，能保護(hù)幼苗在低溫脅迫下正常生長(zhǎng)發(fā)育，推測(cè)其在植物抗寒領(lǐng)域具有較好的實(shí)際應(yīng)用潛力。

光合作用的強(qiáng)弱可反映植物的生長(zhǎng)狀態(tài)，而葉綠素是評(píng)價(jià)植物光合能力的重要指標(biāo)，其含量高低與植物抗寒性密切相關(guān)，冷適應(yīng)能力強(qiáng)的植物能通過(guò)調(diào)控葉綠素等光合作用色素的合成代謝來(lái)抵御寒害影響（Liu et al.，2018）。本研究結(jié)果表明，NAG可促進(jìn)水稻在低溫脅迫及恢復(fù)生長(zhǎng)過(guò)程中葉綠素含量的積累，促使寒害幼苗保持正常的光合作用。與姜秀梅（2014）研究報(bào)道的殼聚糖、甜菜堿、水楊酸等外源物質(zhì)可提高寒害辣椒幼苗中葉綠素含量和滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)積累，進(jìn)而提高其抗冷性的結(jié)論基本一致。但本研究結(jié)果與張洋（2018）研究中指出的殼寡糖可促進(jìn)水稻寒害后恢復(fù)過(guò)程的葉綠素合成，而對(duì)水稻低溫脅迫過(guò)程中葉綠素積累無(wú)顯著促進(jìn)作用的研究結(jié)果存在差異，表明不同外源糖對(duì)植物葉綠素的合成調(diào)控會(huì)有所不同，其原因可能在于NAG作為含氮多糖可充當(dāng)?shù)磪⑴c水稻碳氮代謝過(guò)程從而調(diào)控寒害過(guò)程中的光合能力，但具體原因尚需進(jìn)一步研究。

滲透調(diào)節(jié)是植物抵抗逆境脅迫的重要調(diào)控機(jī)制，植物體通過(guò)積累可溶性糖（蔗糖、海藻糖等）、脯氨酸、可溶性蛋白、有機(jī)酸、鉀和鈣離子等不同類型的滲透調(diào)節(jié)離子或分子，以滲透調(diào)節(jié)、活性氧解毒、細(xì)胞膜穩(wěn)定等方式維系植物體內(nèi)水分環(huán)境并調(diào)控機(jī)體滲透勢(shì)，從而抵抗逆境壓力（Singh et al.，2015;邢芳芳等，2018）。本研究中，適宜濃度的NAG可有效促進(jìn)寒害幼苗中可溶性糖、可溶性蛋白、脯氨酸和游離氨基酸等滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)顯著積累，與匡銀近等（2009）通過(guò)殼寡糖浸種處理可增加水稻幼苗中可溶性糖、脯氨酸等滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)并減少電解質(zhì)滲透，從而提高水稻抗冷性的研究結(jié)果相似，說(shuō)明外源NAG可有效調(diào)節(jié)寒害水稻的滲透調(diào)節(jié)系統(tǒng)進(jìn)而抵御寒害逆境。

根系是植物體重要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)與水分吸收器官，根系活力是反映幼苗根系生長(zhǎng)狀況的重要指標(biāo)，根系活力越高，植物對(duì)外界營(yíng)養(yǎng)吸收的能力越強(qiáng)，相對(duì)抗寒能力越強(qiáng)（陳明輝等，2018）。本研究中，低溫條件下水稻的根系活力大大下降，而外源施用NAG能促進(jìn)寒害水稻幼苗根系活力提高，說(shuō)明NAG能有效緩解低溫逆境對(duì)根系系統(tǒng)的損傷，保護(hù)幼苗根系系統(tǒng)。此外，硝酸鹽是植物生長(zhǎng)的主要氮源，可促進(jìn)植物調(diào)節(jié)自身碳氮代謝、營(yíng)養(yǎng)吸收及生長(zhǎng)發(fā)育等過(guò)程（張鵬等，2015）。本研究中，外源NAG使得寒害水稻的地上莖葉組織中硝態(tài)氮積累量顯著下降，說(shuō)明NAG能有效促進(jìn)水稻莖葉組織對(duì)根系硝態(tài)氮的運(yùn)輸、吸收與還原同化，將硝態(tài)氮充分利用并轉(zhuǎn)化進(jìn)而提高水稻抗寒性。

抗氧化能力是表征植物抗性的重要指標(biāo)之一，機(jī)體中脂質(zhì)過(guò)氧化有害產(chǎn)物（MDA等）含量越少、抗氧化酶活性越高，機(jī)體抗氧化防御能力越強(qiáng)，抗寒能力越強(qiáng)（Ao et al.，2013）。Zou等（2017）研究指出外源施用不同聚合度的殼寡糖能促進(jìn)小麥生長(zhǎng)、降低MDA濃度、有效調(diào)控SOD、POD、CAT等抗氧化基因的表達(dá)并提高對(duì)應(yīng)的抗氧化酶活性，從而緩解外界冷脅迫的損傷。Cao等（2014）研究表明外源蔗糖通過(guò)提高黃瓜葉片中SOD等抗氧化酶活性來(lái)提高黃瓜幼苗抗寒性。本研究與上述研究結(jié)果相似，當(dāng)外源施用NAG進(jìn)行根系處理時(shí)，寒害水稻幼苗中MDA積累量顯著降低，SOD和POD活力均明顯增加，表明NAG對(duì)寒害水稻幼苗的抗氧化系統(tǒng)具有保護(hù)作用。

目前，關(guān)于外源功能性糖在植物抗寒領(lǐng)域的研究主要與抗寒相關(guān)表型和生理生化調(diào)控指標(biāo)相關(guān)，對(duì)于相關(guān)代謝通路的研究尚不深入。在已有研究報(bào)道中，陳巧（2016）從光合作用通路角度對(duì)殼寡糖誘導(dǎo)水稻的抗寒機(jī)制進(jìn)行研究，證明殼寡糖修復(fù)了光損傷的光合系統(tǒng)II，加速了葉綠素b合成，通過(guò)改變滲透調(diào)節(jié)并減少氧化損傷從而提高水稻冷脅迫耐受性。Zhang等（2019）研究發(fā)現(xiàn)根系施用殼寡糖能誘導(dǎo)寒害水稻谷氨酸及脯氨酸通路相關(guān)關(guān)鍵基因表達(dá)，通過(guò)促進(jìn)水稻谷氨酸代謝進(jìn)而調(diào)控脯氨酸代謝，最終保護(hù)水稻幼苗抵御寒害。在眾多代謝調(diào)控中，植物激素是植物面對(duì)逆境環(huán)境時(shí)調(diào)節(jié)自身生理和分子反應(yīng)時(shí)最主要的內(nèi)源物質(zhì)之一，激素代謝調(diào)控在植物抵抗逆境脅迫時(shí)發(fā)揮關(guān)鍵作用（Fahad et al.，2015）。其中脫落酸作為植物面臨寒害等逆境環(huán)境時(shí)的重要“脅迫激素”，可通過(guò)促進(jìn)寒害幼苗根部疏水，清除有害自由基，調(diào)控機(jī)體迅速啟動(dòng)抗寒相關(guān)基因等過(guò)程來(lái)抵御寒害損傷（Cutler et al.，2010）。楊章旗（2011）研究表明，內(nèi)源脫落酸在植物抗寒機(jī)制中發(fā)揮重要作用，低溫脅迫條件下馬尾松能通過(guò)調(diào)控自身內(nèi)源脫落酸含量變化來(lái)調(diào)控自身SOD、POD、CAT、多酚氧化酶（PPO）等抗氧化酶活性的變化趨勢(shì)，進(jìn)而提高自身耐寒能力。劉航等（2015）研究指出，褐藻膠寡糖通過(guò)上調(diào)小麥中TaNCED、TaAOX和TaBG等脫落酸合成基因的轉(zhuǎn)錄，調(diào)控小麥脫落酸合成信號(hào)通路，進(jìn)而刺激小麥葉片中內(nèi)源脫落酸積累，并參與褐藻膠寡糖誘導(dǎo)的植物抗旱過(guò)程。Sharma等（2019）研究發(fā)現(xiàn)，水分脅迫下施用褐藻提取物能通過(guò)調(diào)控脫落酸生物合成基因表達(dá)進(jìn)而調(diào)節(jié)脫落酸穩(wěn)態(tài)，并特異性增強(qiáng)干旱脅迫保護(hù)基因表達(dá)，提高小麥耐旱性。本研究從脫落酸代謝通路入手，對(duì)NAG誘導(dǎo)水稻的抗寒機(jī)制進(jìn)行研究，結(jié)果表明低溫會(huì)造成水稻幼苗脫落酸代謝途徑中關(guān)鍵基因OsZEP、OsNCED、AAO和OsSDR的表達(dá)量下降，但外源施用NAG能顯著促進(jìn)寒害幼苗中OsNCED、AAO和OsSDR基因的相對(duì)表達(dá)，從而實(shí)現(xiàn)幼苗中內(nèi)源脫落酸積累量增長(zhǎng)，推測(cè)外源NAG能通過(guò)調(diào)控水稻幼苗的脫落酸激素代謝途徑來(lái)抵御寒害損傷。本研究從相關(guān)脅迫激素的代謝角度出發(fā)對(duì)NAG誘導(dǎo)水稻的抗寒機(jī)制進(jìn)行闡述，在現(xiàn)有研究基礎(chǔ)上，未來(lái)可與相關(guān)轉(zhuǎn)錄組學(xué)、代謝組學(xué)等方法結(jié)合，更全面地探究相關(guān)抗逆調(diào)控機(jī)制。因此，基于以上研究結(jié)果，推測(cè)NAG能充當(dāng)糖原物質(zhì)和信號(hào)物質(zhì)，通過(guò)兩種效應(yīng)發(fā)揮協(xié)同作用，共同調(diào)控水稻幼苗抵抗外界低溫脅迫損傷。

4 結(jié)論

低溫脅迫下，采用根系處理方式外源施用NAG可保護(hù)水稻幼苗，恢復(fù)幼苗低溫脅迫后生長(zhǎng)過(guò)程中葉綠素的積累，促進(jìn)其在低溫環(huán)境下正常生長(zhǎng)。其可能的調(diào)控機(jī)制在于：首先，NAG調(diào)節(jié)水稻幼苗的機(jī)體滲透勢(shì)，促進(jìn)滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)的積累和硝態(tài)氮的轉(zhuǎn)化利用;其次，NAG的外源施用有效降低寒害幼苗中MDA含量，提高SOD和POD抗氧化酶活力，保護(hù)幼苗抗氧化系統(tǒng);此外，NAG顯著促進(jìn)寒害幼苗脫落酸代謝通路中OsNCED、OsSDR和AAO基因表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)幼苗中內(nèi)源脫落酸積累，通過(guò)脫落酸代謝途徑保護(hù)幼苗抵御寒害。

參考文獻(xiàn)：

陳明輝，張志錄，程世平，張保青. 2018. 低溫脅迫對(duì)4個(gè)果蔗品種幼苗根系活力和保護(hù)酶活性的影響[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，46（3）：116-119. doi：10.15889/j.issn.1002-1302.2018. 03.029. [Chen M H，Zhang Z L，Cheng S P，Zhang B Q. 2018. Effects of low temperature stress on root vigor and protective enzyme activities of four cane cultivars[J]. Jiangsu Agricultural Sciences，46（3）：116-119.]

陳巧. 2016. 殼寡糖對(duì)水稻幼苗抗寒性的誘抗機(jī)制探究[D]. 上海：華東理工大學(xué). [Chen Q. 2016. The mechanism of improving rice seedlings cold resistance by chitooligosaccharide[D]. Shanghai：East China University of Science and Technology.]

郝林華，陳靠山，李光友. 2006. 牛蒡寡糖促進(jìn)黃瓜生長(zhǎng)及抗低溫脅迫的生理效應(yīng)[J]. 上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)（農(nóng)業(yè)科學(xué)版），24（1）：6-12. doi：10.3969/j.issn.1671-9964.2006.01. 002. [Hao L H，Chen K S，Li G Y. 2006. Physiological effects of burdock oligosaccharide on growth promotion and chilling resistance of cucumber seedings[J]. Journal of Shanghai Jiaotong University（Agricultural Science），24（1）：6-12.]

姜秀梅. 2014. 外源物質(zhì)處理對(duì)低溫脅迫下辣椒種子萌發(fā)及幼苗抗冷性的影響[D]. 烏魯木齊：新疆農(nóng)業(yè)大學(xué). [Jiang X M. 2014. Effects of exogenous substances on seed germination and chilling resistance of pepper under low temperature stress[D]. Urumqi：Xinjiang Agricultural University.]

匡銀近，彭惠娥，桂萍，覃彩芹. 2009. 殼寡糖提高茄子幼苗抗冷性的效應(yīng)研究[J]. 北方園藝，（9）：14-17. [Kuang Y J，Peng H E，Gui P，Qin C Q. 2009. Effects of oligochitosan on cold resistance of eggplant seedlings[J]. Northern Horticulture，（9）：14-17.]

劉航，馮立強(qiáng)，劉興江. 2015. 寡糖對(duì)小麥脫落酸合成的影響[J]. 浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，27（1）：12-15. doi：10.3969/j.issn.1004-1524.2015.01.03. [Liu H，F(xiàn)eng L Q，Liu X J. 2015. Effects of oligosaccharides on abscisic acid synthesis in wheat[J]. Acta Agriculturae Zhejiangensis，27（1）：12-15.]

劉瑞志，江曉路，管華詩(shī). 2009. 褐藻寡糖激發(fā)子誘導(dǎo)煙草抗低溫作用研究[J]. 中國(guó)海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，39（2）：243-248. doi：10.3969/j.issn.1672-5174.2009.02.030. [Liu R Z，Jiang X L，Guan H S. 2009. Effects of alginate-derived oligosaccharide on the low temperature resistance of tobacco leaves[J]. Periodical of Ocean University of China，39（2）：243-248.]

劉同梅. 2018. 海藻酸鈉寡糖誘導(dǎo)植物抗病作用和機(jī)制的初步研究[D]. 大連：大連海洋大學(xué). [Liu T M. 2018. Preliminary study on the alginate oligosaccharide induced plant resistance and its mechanisms[D]. Dalian：Dalian Ocean University.]

田路. 2019. 殼寡糖對(duì)花椒幼苗抗寒性的影響[D]. 咸陽(yáng)：西北農(nóng)林科技大學(xué). [Tian L. 2019. Effects of chitosan oligosaccharide on cold resistance of Zanthoxylum bungeanum Maxim. seedlings[D]. Xianyang：Northwest A & F University.]

王夢(mèng)雨，王文霞，趙小明，尹恒. 2016. 殼寡糖對(duì)低溫脅迫下小麥幼苗的保護(hù)作用及相關(guān)代謝產(chǎn)物的影響[J]. 麥類作物學(xué)報(bào)，36（5）：653-658. doi：10.7606/j.issn.1009-1041. 2016.05.17. [Wang M Y，Wang W X，Zhao X M，Yin H. 2016. Effect of chitooligosaccharide on reducing cryoinjury and improving metabolite of winter wheat seedings under low temperature stress[J]. Journal of Triticeae Crops，36（5）：653-658.]

王學(xué)奎，黃見良. 2015. 植物生理生化實(shí)驗(yàn)原理與技術(shù)[M]. 北京：高等教育出版社. [Wang X K，Huang J L. 2015. Principles and techniques of plant physiological biochemi-cal experiment[M]. Beijing：Higher Education Press.]

邢芳芳，高明夫，周傳志，徐春英，范玲超. 2018. 氨基酸與植物抗逆性關(guān)系的研究進(jìn)展[J]. 黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué)，（3）：150-155. doi：10.11942/j.issn1002-2767.2018.03.0150. [Xing F F，Gao M F，Zhou C Z，Xu C Y，F(xiàn)an L C. 2018. Advan-ces in the relationship between amino acid and plant stress resistance[J]. Heilongjiang Agricultural Sciences，（3）：150-155.]

楊章旗. 2011. 低溫脅迫下內(nèi)源脫落酸對(duì)馬尾松優(yōu)良種源抗寒性的調(diào)節(jié)作用[J]. 廣西植物，31（4）：501-506. doi：10. 3969/j.issn.1000-3142.2011.04.016. [Yang Z Q. 2011. Re-gulation of endogenic abscisic acid（ABA）for cold resistance of superior provenance Pinus massoniana under low temperature stress[J]. Guihaia，31（4）：501-506.]

姚艷平，王建明，張作剛，李友蓮. 2013. 幾丁寡糖在木霉菌生物防治中的作用[J]. 山西農(nóng)業(yè)科學(xué)，41（2）：194-196. doi：10.3969/j.issn.1002-2481.2013.02.25. [Yao Y P，Wang J M，Zhang Z G，Li Y L. 2013. Role of N-acetyl-chito-oligosaccharides in plant diseases biological control of Trichoderma spp.[J]. Journal of Shanxi Agricultural Scien-ces，41（2）：194-196.]

張鵬，張然然，都韶婷. 2015. 植物體對(duì)硝態(tài)氮的吸收轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 植物營(yíng)養(yǎng)與肥料學(xué)報(bào)，21（3）：752-762. doi：10.11674/zwyf.2015 0323. [Zhang P，Zhang R R，Du S T. 2015. Research advances in nitrate uptake and transport in plants[J]. Journal of Plant Nutrition and Fertilizer，21（3）：752-762.]

張洋. 2018. 殼寡糖提高水稻幼苗抗寒性的機(jī)理研究[D]. 上海：華東理工大學(xué). [Zhang Y. 2018. The mechanism of improving rice seedlings cold resistance by chitooligosaccharide[D]. Shanghai：East China University of Science and Technology.]

張運(yùn)紅，杜君，和愛(ài)玲，孫克剛，鄭春風(fēng)，楊煥煥，丁華. 2017. 海藻酸鈉寡糖對(duì)水稻生長(zhǎng)發(fā)育、產(chǎn)量及鎘吸收分布的影響[J]. 江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，29（6）：1-6. doi：10.19386/j.cnki.jxnyxb.2017.06.01. [Zhang Y H，Du J，He A L，Sun K G，Zheng C F，Yang H H，Ding H. 2017. Effects of alginate oligosaccharides on growth，development，yield，and cadmium absorption and distribution of rice[J]. Acta Agriculturae Jiangxi，29（6）：1-6.]

鄭典元，夏依依，丁占平. 2012. 殼寡糖對(duì)水稻幼苗生長(zhǎng)及抗寒性能的影響[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，40（4）：77-79. doi：10. 3969/j.issn.1002-1302.2012.04.024. [Zheng D Y，Xia Y Y，Ding Z P. 2012. Effects of chito oligosaccharide on the growth and cold resistance of rice seedlings[J]. Jiangsu Agricultural Sciences，40（4）：77-79.]

Ao P X，Li Z G，F(xiàn)an D M. 2013. Involvement of antioxidant defense system in chill hardening-induced chilling tolerance in Jatropha curcas seedlings[J]. Acta Physiologiae Plantarum，35（1）：153-160. doi：10.1007/s11738-012-1058-z.

Cao Y Y，Yang M T，Li X，Zhou Z Q，Wang X J，Bai J G. 2014. Exogenous sucrose increases chilling tolerance in cucumber seedlings by modulating antioxidant enzyme activity and regulating proline and soluble sugar contents[J]. Scientia Horticulturae，179：67-77. doi：10.1016/j.scien-ta.2014.09.016.

Cutler S R，Rodriguez P L，F(xiàn)inkelstein R R，Abrams S R. 2010. Abscisic acid：Emergence of a core signaling network[J]. Annual Review of Plant Biology，61（1）：651-679. doi：10.1146/annurev-arplant-042809-112122.

Fahad S，Hussain S，Bano A，Saud S，Hassan S，Shan D，Khan F A，Khan F，Chen Y T，Wu C. 2015. Potential role of phytohormones and plant growth-promoting rhizobacteria in abiotic stresses：Consequences for changing environment[J]. Environmental Science and Pollution Research，22（7）：4907-4921. doi：10.1007/s11356-014-3754-2.

Gaderer R，Seidl-Seiboth V，de Vries R P，Seiboth B，Kappel L. 2017. N-acetylglucosamine，the building block of chitin，inhibits growth of Neurospora crassa[J]. Fungal Genetics and Biology，107：1-11. doi：10.1016/j.fgb.2017.07. 005.

Hussain H A，Hussain S，Khaliq A，Ashraf U，Anjum S A，Men S N，Wang L C. 2018. Chilling and drought stresses in crop plants：Implications，cross talk，and potential mana-gement opportunities[J]. Frontiers in Plant Science，9：393. doi：10.3389/fpls.2018.00393.

Hussain S，Khan F，Hussain H A. 2016. Physiological and biochemical mechanisms of seed priming-induced chilling tolerance in rice cultivars[J]. Frontiers in Plant Science，7：116. doi：10.3389/fpls.2016.00116.

Kashulin P A，Merzlyak M N，Zhiboedov P M，Zhirov V K. 2000. Extremely rapid effects of polyunsaturated fatty acids and N-acetylglucosamine on free-radical metabolism in cultured potato plant cells[J]. Biochemical Society Transactions，28（6）：865-867. doi：10.1042/bst0280865.

Li P F，Ma B L，Xiong Y C，Zhang W Y. 2017. Morphological and physiological responses of different wheat genotypes to chilling stress：A cue to explain yield loss[J]. Journal of the Science of Food and Agriculture，97（12）：4036-4045. doi：10.1002/jsfa.8271.

Liu X M，Zhou Y L，Xiao J W，F(xiàn)ei B. 2018. Effects of chil-ling on the structure，function and development of chloroplasts[J]. Frontiers in Plant Science，9：1715. doi：10.3389/ fpls.2018.01715.

Lukatkin A S，Brazaityte A，Bobinas C，Duchovskis P. 2012. Chilling injury in chilling-sensitive plants：A review[J]. Zemdirbyste-Agriculture，99（2）：111-124. doi：10.3906/tar-1112-44.

Sharma S，Chen C，Khatri K，Rathore M，Pandey S. 2019. Gracilaria dura extract confers drought tolerance in wheat by modulating abscisic acid homeostasis[J]. Plant Physio-logy and Biochemistry，136：143-154. doi：10.1016/j.pl-aphy.2019.01.015.

Shigeru T，Mitsuo O，Yusuke J，Hisakazu Y，Hanae K，Naoto S，Eiichi M. 2006. Induction of resistance against rice blast fungus in rice plants treated with a potent elicitor，N-acetylchitooligosaccharide[J]. Bioscience Biotechnology and Biochemistry，70（7）：1599-1605. doi：10.1271/bbb.50677.

Singh M，Kumar J，Singh S，Singh V，Prasad S. 2015. Roles of osmoprotectants in improving salinity and drought to-lerance in plants：A review[J]. Reviews in Environmental Science and Biotechnology，14（3）：407-426. doi：10.1007/s11157-015-9372-8.

Wan X R，Li L. 2004. Pathways and related enzymes of ABA biosynthesis in higher plants[J]. Chinese Bulletin of Bo-tany，21（3）：352-359. doi：10.1300/J079v30n03_01.

Yin H，Du Y G，Dong Z M. 2016. Chitin oligosaccharide and chitosan oligosaccharide：two similar but different plant elicitors[J]. Frontiers in Plant Science，7：522. doi：10.3389/ fpls.2016.00522.

Zhang Y，F(xiàn)an L Q，Zhao M Y，Chen Q M，Qin Z，F(xiàn)eng Z H，F(xiàn)ujiwara T，Zhao L M. 2019. Chitooligosaccharide plays essential roles in regulating proline metabolism and cold stress tolerance in rice seedlings[J]. Acta Physiologiae Plantarum，41（6）：1-11. doi：10.1007/s11738-019-2864-3.

Zou P，Tian X Y，Dong B. 2017. Size effects of chitooligomers with certain degrees of polymerization on the chilling tolerance of wheat seedlings[J]. Carbohydrate Polymers，160：194-202. doi：10.1016/j.carbpol.2016.12.058.

（責(zé)任編輯 王 暉）