張海波，黃宏春，王秀敏，王少芳

（安陽市人民醫(yī)院1.消化內(nèi)科；2.呼吸內(nèi)科，河南 安陽 455000）

2018年全球癌癥統(tǒng)計(jì)報(bào)告顯示，全球胃癌發(fā)病率為5.70%、死亡率為8.20%，而我國是胃癌的高發(fā)區(qū)，胃癌發(fā)病率為10.60%、死亡率為13.60%，是威脅我國居民健康的惡性腫瘤之一[1]。因胃癌早期缺乏特異性表現(xiàn)，大部分患者確診時(shí)已處于中晚期，五年生存率不足20%[2]。因此，尋找胃癌發(fā)生發(fā)展的標(biāo)志物，對于早期胃癌的防治及預(yù)后的改善均具有重大意義。微小核糖核酸（miRNA）是一類內(nèi)源性非編碼單鏈RNA，研究證實(shí)，miRNA的失調(diào)與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[3]。另有研究證實(shí)，miR-93的生理作用機(jī)制與“癌基因”相似，在胃癌組織中miR-93的表達(dá)上調(diào)與惡性進(jìn)展和較差的預(yù)后有關(guān)[4]。本研究探討miR-93在胃癌患者血清中的表達(dá)及與生存期的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年6 月-2017年7 月收治的胃癌患者100例為胃癌組，納入標(biāo)準(zhǔn)：均為首診，且經(jīng)胃鏡檢查及病理組織學(xué)確診；未接受過放化療、免疫治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他惡性腫瘤者；合并心肝腎肺功能異常、炎癥內(nèi)分泌代謝疾病者；有精神或神經(jīng)系統(tǒng)疾病者；病例資料及隨訪資料不全者。其中男72例，女28例；年齡42～79 歲，平均60.45±5.18 歲。另選取同期健康體檢者126例為健康組，其中男91例，女35例；年齡40～78 歲，平均60.39±5.16 歲。兩組性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），有可比性。

1.2 血清miR-93表達(dá)含量測定方法 抽取外周靜脈血5ml，以2000r/min 離心10min 取血清，采用Trizol 試劑提取細(xì)胞總RNA、合成cDNA，進(jìn)行RTPCR 檢測。miR-93 引物序列：上游引物5’-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3’，下游引物5’-AC GUGACACGUUCGGAGAAATT-3’，U6 引物序列：上游引物5’-TGCGGGTGCTCGCTTCGGCAGC-3’,下游引物5’-CCAGTGCAGGGTCCGAGGT-3’。反應(yīng)條件：95℃10min，95℃10min，60℃1min，共擴(kuò)增45 個(gè)循環(huán)。將U6 作為內(nèi)參照，miR-93的相對表達(dá)量采用2-△△Ct方法計(jì)算，其中△△Ct=△Ct（樣本）-△Ct（內(nèi)參）。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3 次。

1.3 隨訪 隨訪方式為電話或者門診，每隔3 個(gè)月進(jìn)行一次，隨訪截至?xí)r間為2020年7 月31 日，統(tǒng)計(jì)3年生存率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 本次研究所得數(shù)據(jù)使用SPSS 25.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析，計(jì)量資料以（）表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用χ2檢驗(yàn)；采用受試者工作特征（ROC）曲線分析血清miR-93表達(dá)含量對胃癌的早期診斷價(jià)值；采用Kaplan-Meier 法進(jìn)行生存分析；生存期影響因素的多因素分析采用Cox 比例風(fēng)險(xiǎn)模型，P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 胃癌患者血清miR-93表達(dá)含量 胃癌組血清中miR-93 相對表達(dá)含量為（4.31±0.38），高于健康組（1.00±0.11），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=93.034,P<0.05）。

2.2 不同胃癌臨床病理特征患者血清miR-93表達(dá)含量比較 TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期、局部浸潤深度T3～T4、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者血清miR-93表達(dá)含量均分別高于TNM 分期Ⅰ～Ⅱ期、局部浸潤深度T1～T2、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；不同性別、年齡、腫瘤最大徑、分化程度者血清miR-93表達(dá)含量比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表1。

表1 不同胃癌臨床病理特征患者血清miR-93表達(dá)含量比較（）

表1 不同胃癌臨床病理特征患者血清miR-93表達(dá)含量比較（）

2.3 血清miR-93 診斷胃癌的效能 ROC 曲線結(jié)果顯示，miR-93 診斷早期胃癌的ROC 曲線下面積為0.981（95% CI：0.958～0.997），最佳界值為2.310時(shí)，靈敏度為96.74%，特異度為87.50%，見圖1。

圖1 血清miR-93對早期胃癌診斷的ROC 曲線圖

2.4 血清miR-93與胃癌患者生存期的相關(guān)性 以血清miR-93=2.310 為界，將100例患者分為高表達(dá)組（n=47）與低表達(dá)組（n=53），血清miR-93 高表達(dá)組3年總生存率為63.83%,低于低表達(dá)組的83.02%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.767，P=0.029<0.05），見圖2。

圖2 胃癌患者不同血清miR-93表達(dá)組生存曲線圖

2.5 胃癌患者生存期影響因素分析 以生存時(shí)間和是否因胃癌死亡為因變量，以血清miR-93表達(dá)含量、TNM 分期、局部浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移作為自變量進(jìn)行多因素Cox 比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析，結(jié)果顯示，血清miR-93 高表達(dá)（HR=3.125）、TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期（HR=2.864）、局部浸潤深度T3～T4（HR=2.064）、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（HR=3.718）的胃癌患者生存期較短，見表2。

表2 胃癌患者生存期影響因素多因素Cox 比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析

3 討論

胃癌為臨床上常見的一種消化系統(tǒng)惡性腫瘤，其發(fā)病率近年來呈升高及年輕化趨勢，且發(fā)病與遺傳、環(huán)境、飲食、身體質(zhì)量指數(shù)（BMI）、營養(yǎng)因素以及慢性感染等相關(guān)[5,6]。因胃癌早期缺乏特異性癥狀表現(xiàn)，待確診時(shí)往往發(fā)展至中晚期，預(yù)后較差[7,8]。當(dāng)前，無有效的早期無創(chuàng)篩查和診斷胃癌的方法是胃癌死亡率較高的一項(xiàng)重要原因，雖然我國逐漸重視胃癌的篩查及早期診斷，其中胃鏡檢查為早期診斷胃癌的主要手段，但其為有創(chuàng)操作，難以普及，且臨床上常用的癌胚抗原（CEA）、糖類抗原（CA）199、CA125 等腫瘤標(biāo)志物在胃癌的篩查中靈敏度、特異度較低[9,10]。因此探尋新的非侵入性胃癌診斷及預(yù)測預(yù)后的分子標(biāo)志物具有重要意義。

miRNA 能與目的信使RNA（mRNA）的3’非翻譯區(qū)（3’UTR）結(jié)合,導(dǎo)致mRNA的降解或抑制其翻譯，影響其蛋白表達(dá)，以此發(fā)揮癌基因或抑癌基因的作用[11-14]。本研究結(jié)果顯示，胃癌組血清中miR-93 相對表達(dá)含量高于健康組,且TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期、局部浸潤深度T3～T4、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者血清miR-93表達(dá)含量均分別高于TNM 分期Ⅰ～Ⅱ期、局部浸潤深度T1～T2、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者,表明，miR-93在胃癌組織中存在高水平表達(dá),且其表達(dá)隨胃癌病理學(xué)分期的演進(jìn)而上升，miR-93在胃癌中可能發(fā)揮癌基因的作用，即意味著血清miR-93水平越高則患者的病情可能越嚴(yán)重。馬志軍等[15]進(jìn)行的體外實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，轉(zhuǎn)染miR-93 后48、72、96 h，胃癌細(xì)胞株AGS的增殖、遷移和侵襲能力顯著增強(qiáng)，即促腫瘤行為能力明顯增強(qiáng)，發(fā)揮癌基因的作用。本研究結(jié)果另顯示，miR-93 診斷胃癌的ROC 曲線下面積為0.981（95% CI：0.958～0.997），最佳界值為2.310 時(shí)，靈敏度為96.74%，特異度為87.50%，表明，miR-93對胃癌的早期診斷效能，診斷靈敏度、特異度均較高，具有較高的診斷價(jià)值。本研究結(jié)果還顯示，血清miR-93 高表達(dá)組3年總生存率為63.83%，低于低表達(dá)組的83.02%，且多因素Cox 比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析結(jié)果顯示，血清miR-93 高表達(dá)（HR=3.125）、TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期（HR=2.864）、局部浸潤深度T3～T4（HR=2.064）、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（HR=3.718）的胃癌患者生存期較短，表明，血清miR-93 高表達(dá)與胃癌患者生存期密切相關(guān)，是胃癌患者生存期的危險(xiǎn)因素。

綜上所述，miR-93在胃癌患者血清中呈高表達(dá)，且與臨床病理特征及生存期存在相關(guān)性，可作為診斷胃癌及判斷預(yù)后的生物學(xué)標(biāo)志物。