張園園 李 悅 丁 建 王 勇 張 晶 韓寶康 江新華

（1安康市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，陜西安康725021；2陜西省長青林業(yè)局，陜西漢中723000）

蛹蟲草Cordyceps militaris又名北冬蟲夏草、北蟲草，屬于真菌界（Fungi）[1]。大量研究表明，蛹蟲草的藥理作用與冬蟲夏草極為相似，其藥用成分蟲草酸、蟲草多糖、蟲草素含量及SOD活性等均高于冬蟲夏草[2-3]，具有抗腫瘤[4-5]、抗疲勞[6]、降血糖[7]、抗衰老[8]、提高免疫力[9]等功效。

硒是人體必需的微量元素之一，被譽為“心臟守護神”“天然解毒劑”“生命的火種”“抗癌之王”[10-11]。我國是世界主要的硒資源國之一，但我國仍是一個缺硒國家，2/3的地區(qū)為缺硒區(qū)和低硒區(qū)[12]。據(jù)報道，有機硒比無機硒更容易被人體吸收利用，安全性強[13]。蛹蟲草是優(yōu)良的富硒載體，能將無機硒轉(zhuǎn)化為硒蛋白和硒多糖等有機形態(tài)的硒[14]。因此，蛹蟲草為富硒安全、高效有機硒產(chǎn)品?，F(xiàn)將富硒蛹蟲草栽培技術(shù)總結(jié)如下。

1 蛹蟲草的富硒方式

自然界中硒主要以無機硒和有機硒形式存在，其中無機硒不易被人體吸收，而蛹蟲草具有較強的富硒能力，以無機硒為硒源時，蛹蟲草以菌絲體主動運輸或協(xié)助擴散方式，將無機硒轉(zhuǎn)運至細(xì)胞內(nèi)，結(jié)合到大分子活性物質(zhì)多糖和蛋白質(zhì)上，轉(zhuǎn)化為有機硒多糖和硒蛋白；通過氧化還原作用將無機硒鹽轉(zhuǎn)化為H－Se－H，進一步轉(zhuǎn)化為硒半胱氨酸和硒甲硫氨酸[15]；以有機硒為硒源時，蛹蟲草不斷地吸收轉(zhuǎn)化，達(dá)到富集硒的目的。與無機硒相比，有機硒具有吸收利用率高、安全無毒等優(yōu)點。

2 富硒蛹蟲草菌株

蛹蟲草菌株對硒耐受性差異較大[16-17]，因此優(yōu)良富硒蛹蟲草菌株是富硒蛹蟲草栽培的關(guān)鍵。蛹蟲草對硒元素的耐受能力是決定其富硒能力的關(guān)鍵，而循環(huán)富硒法是提高蛹蟲草菌株硒耐受性的主要方法。生產(chǎn)中應(yīng)選擇菌絲生長旺盛、轉(zhuǎn)色快、易分化、出草一致、生長期短、產(chǎn)量高、硒耐受性強的菌種作為栽培種。優(yōu)良蛹蟲草母種：萌發(fā)快、菌絲粗壯，見光后菌絲由白色轉(zhuǎn)為橘黃色。

3 富硒蛹蟲草栽培技術(shù)要點

3.1 菌種制備技術(shù)

3.1.1 菌種活化

將保藏的蛹蟲草菌種CM-1518轉(zhuǎn)接到復(fù)合PDA培養(yǎng)基上活化。復(fù)合PDA培養(yǎng)基配方：馬鈴薯200 g，葡萄糖10 g，蔗糖10 g，蛋白胨2 g，磷酸二氫鉀1 g，硫酸鎂0.5 g，瓊脂18 g，水1 000 mL，pH自然。

3.1.2 菌種保藏

保藏培養(yǎng)基配方：小麥15 g，水20～25 mL（一般蛹蟲草菌種冷藏不能超過6個月，若要長時間保存，必須在6個月之內(nèi)重新活化后保藏。）

3.1.3 一級搖瓶種培養(yǎng)

將活化的蛹蟲草菌種接種于液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)。液體培養(yǎng)基配方：馬鈴薯200 g，葡萄糖10 g，蔗糖10 g，蛋白胨2 g，磷酸二氫鉀1 g，硫酸鎂0.5 g，檸檬酸鐵銨0.5 g，加水1 000 mL，pH自然。按100 mL/瓶分裝于250 mL三角瓶中，高壓，121℃滅菌20～30 min后備用。將活化后的蛹蟲草菌種，每瓶接種直徑5 mm菌塊3塊，在21～23℃、搖床轉(zhuǎn)速150 r/min條件下培養(yǎng)7～10 d，即得蛹蟲草一級搖瓶種。

3.1.4 二級搖瓶種培養(yǎng)

按3.1.3配方制備培養(yǎng)基，高壓，121℃滅菌20～30 min。待培養(yǎng)基冷卻后，每瓶接入3.1.3培養(yǎng)液體菌種0.5～1.0 mL，于21～23℃、搖床轉(zhuǎn)速150 r/min條件下培養(yǎng)2～3 d，即得二級搖瓶種。二級搖瓶種可直接用于生產(chǎn)。制備好的液體菌種必須于48 h之內(nèi)用于生產(chǎn)。

3.2 富硒原料及營養(yǎng)液配方

富硒原料為天然富硒區(qū)域產(chǎn)（如陜西省安康市紫陽縣）富硒小麥或富硒大米。應(yīng)選擇新鮮、無蟲蛀、無霉變的小麥或大米作為栽培原料。富硒營養(yǎng)液配方：蛋白胨5 g，葡萄糖3 g，磷酸二氫鉀1 g，硫酸鎂0.5 g，檸檬酸鐵銨0.5 g，適量亞硒酸鈉或酵母硒（根據(jù)對子實體含硒量的要求添加適量的亞硒酸鈉或酵母硒），水1 000 mL，pH自然。

3.3 培養(yǎng)料制備

蛹蟲草可瓶栽、袋栽、盆栽。盆栽法是近年來發(fā)展最快的栽培方式，具有易操作、易管理，可立體栽培，有效提高空間利用率等優(yōu)點。以盆栽為例。

3.3.1 培養(yǎng)料裝盒

采用規(guī)格300 mm×200 mm×110 mm的蛹蟲草栽培專用盒（圖1）。在富硒營養(yǎng)液中添加亞硒酸鈉或酵母硒0～500 mg/kg，制成富硒培養(yǎng)液。每盒裝富硒小麥300 g，富硒培養(yǎng)液450 mL或富硒大米350 g，富硒培養(yǎng)液455 mL。培養(yǎng)料、液裝盒后，用專用聚丙烯塑料膜和塞子封盒后，及時放入滅菌鍋滅菌。

圖1 栽培蛹蟲草專用盒

3.3.2 滅菌

培養(yǎng)料高壓或常壓滅菌均可。高壓滅菌，應(yīng)在排完冷空氣后，升溫至121℃后維持1～1.5 h；常壓滅菌，應(yīng)大火上溫，使溫度快速升至100℃后，維持8 h。滅菌結(jié)束后，將培養(yǎng)料盒移入接種室，待溫度下降至20℃以下時即可接種。

3.3.3 接種

按照無菌操作程序接種。接種前，將制備好的液體菌種用無菌水稀釋，稀釋體積比例為1∶10。每盒接液體菌種50 mL。接種后將栽培盒移至溫度、空氣相對濕度和光照可以調(diào)控的培養(yǎng)室培養(yǎng)菌絲。

適宜的接種量是提高蛹蟲草產(chǎn)量和品質(zhì)的重要因素。接種量較少，菌絲生長緩慢，覆面時間延長，生產(chǎn)周期較長，影響蛹蟲草產(chǎn)量。接種量過多，菌絲生長快，但氣生菌絲過旺，不利于子座的分化和發(fā)育，且易造成污染，也會影響蛹蟲草產(chǎn)量。

3.4 栽培管理技術(shù)要點

蛹蟲草生長期管理分為菌絲生長、菌絲轉(zhuǎn)色、子座分化及子座生長四個階段，整個生長周期為60～70 d。

菌絲萌發(fā)階段：控制溫度18～21℃，空氣相對濕度60%～70%、二氧化碳體積分?jǐn)?shù)小于0.05%，暗培養(yǎng)5～7 d，至菌絲布滿整個培養(yǎng)基（圖2）；

圖2 菌絲生長期

菌絲轉(zhuǎn)色階段：控制溫度21～23℃，空氣相對濕度70%～80%，二氧化碳體積分?jǐn)?shù)小于0.05%，光照強度150～200 lx，每天光照24 h，培養(yǎng)2～3 d，至培養(yǎng)基表面菌絲由白色變?yōu)樯铋冱S色（圖3）；

圖3 菌絲轉(zhuǎn)色期

子座分化階段：控制溫度21～23℃，空氣相對濕度70%～80%，二氧化碳體積分?jǐn)?shù)小于0.1%，光照強度200～300 lx，每天白光光照12 h，培養(yǎng)7～10 d，直到培養(yǎng)基表面有突起，并形成小米粒狀原基（圖4）；

圖4 子座分化期

子座生長階段：控制溫度21～23℃，空氣相對濕度70%～80%，二氧化碳體積分?jǐn)?shù)小于0.1%，光照強度200～300 lx，每天白光光照18 h，培養(yǎng)30～35 d（圖5）。

圖5 子座生長期

3.5 采收

待蛹蟲草子座生長至培養(yǎng)盒口頂膜，不再生長，且子座頂端膨大，出現(xiàn)許多小刺，或子座孢子頭表面色澤變淡時，表明蛹蟲草已成熟，即可采收（圖6）。此時，子座鮮重、干重均較高。采收蛹蟲草一定要及時，否則易出現(xiàn)子座萎蔫、倒伏，影響產(chǎn)量和質(zhì)量。采收的子座分級后，可直接鮮售，或經(jīng)晾干、低溫烘干（切忌太陽曝曬）后包裝出售，暫不出售的應(yīng)在低溫干燥處避光貯存。

圖6 成熟子座

3.6 病蟲害及預(yù)防

富硒蛹蟲草栽培中常見的病害主要有細(xì)菌性病害和真菌性病害。細(xì)菌性病害主要表現(xiàn)為培養(yǎng)基發(fā)酵變酸，導(dǎo)致子座不分化或子座畸形、變軟、倒伏或腐爛等；常見真菌有曲霉、青霉、毛霉等，這些真菌常導(dǎo)致蛹蟲草子座生長緩慢或停滯，嚴(yán)重影響蛹蟲草的產(chǎn)量和品質(zhì)。

導(dǎo)致雜菌污染的原因：菌種因素、滅菌環(huán)節(jié)、環(huán)境因素以及人為因素等。生產(chǎn)中要圍繞四個方面嚴(yán)格貫徹“預(yù)防為主、綜合治理”的方針，做好病蟲害預(yù)防工作。

該技術(shù)栽培的富硒蛹蟲草硒含量穩(wěn)定、有機硒轉(zhuǎn)化率高，將其作為一種硒營養(yǎng)強化劑，在食品、醫(yī)藥等行業(yè)都具有廣闊的應(yīng)用前景。