郭月仙 馬立驗(yàn) 駱?lè)?蘇貴平

（1寧德市益智源農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司，福建寧德355300；2寧德市食用菌技術(shù)推廣站，福建寧德352100）

玉木耳（Auricularia cornea）為李玉院士團(tuán)隊(duì)由白色毛木耳變種經(jīng)多孢自交選育出的菌株[1]。玉木耳味道鮮美，且富含蛋白質(zhì)、膳食纖維、多糖、不飽和脂肪酸，具有抗腫瘤、抗氧化等功效[2]，深受消費(fèi)者青睞。玉木耳在我國(guó)臺(tái)灣地區(qū)、福建省、江西省等均有少量栽培，應(yīng)用菌種主要是固體菌種。隨著食用菌產(chǎn)業(yè)向設(shè)施化、標(biāo)準(zhǔn)化轉(zhuǎn)型升級(jí)，液體菌種應(yīng)用越來(lái)越多，也日益成熟[3]。劉孝利等[4]研究了玉木耳液體菌種培養(yǎng)基配方。試驗(yàn)根據(jù)玉木耳的生物學(xué)特性，進(jìn)行液體菌種的培養(yǎng)基配方、培養(yǎng)溫度、初始pH比較，以期篩選出玉木耳液體菌種較佳的培養(yǎng)條件。

1 材料與方法

1.1 玉米耳菌株

玉木耳1號(hào)菌株，由福建省南平農(nóng)科所提供。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及方法

1.2.1 培養(yǎng)基配方比較試驗(yàn)

試驗(yàn)液體培養(yǎng)基配方：①馬鈴薯100 g，紅糖15 g，葡萄糖10 g，麩皮30 g，蛋白胨1.5 g，磷酸二氫鉀0.75 g，硫酸鎂1 g，維生素B11片，加水1 000 mL；②玉米粉40 g，麩皮20 g，葡萄糖30 g，黃豆粉5 g，磷酸二氫鉀2.5 g，硫酸鎂1 g，維生素B11片，水1 000 mL；③葡萄糖20 g，玉米粉5 g，豆粉5 g，磷酸二氫鉀0.5 g，硫酸鎂0.5 g，酵母粉1 g，消泡劑0.2 g，加水1 000 mL。

配制培養(yǎng)基時(shí)微溶性的麩皮、玉米粉、黃豆粉均研磨成粉末狀，馬鈴薯用清水煮30 min后過(guò)濾殘?jiān)?，并將馬鈴薯水煮液用清水調(diào)至1 000 mL，再加入其他原料攪拌均勻即可。用1 000 mL三角瓶分裝培養(yǎng)液，每瓶裝液量為500 mL，用棉塞封口，并用牛皮紙包緊瓶口后，于121℃滅菌35 min。冷卻到常溫后，在凈化室接種，每瓶接8塊0.5 cm2的PDA斜面菌種塊。接種后于25℃靜置24 h，隨后在轉(zhuǎn)速170 r/min、22℃的恒溫?fù)u床上培養(yǎng)6 d。測(cè)菌絲鮮重，記錄菌球形態(tài)。每配方重復(fù)3次。

1.2.2 液體菌種培養(yǎng)溫度試驗(yàn)

培養(yǎng)基用配方③。培養(yǎng)溫度設(shè)20℃、22℃、24℃。培養(yǎng)基配制、培養(yǎng)方法同1.2.1。每個(gè)溫度處理重復(fù)3次。

1.2.3 液體培養(yǎng)基初始pH試驗(yàn)

培養(yǎng)基用配方③。初始pH設(shè)為pH5.5、6.5、7.5。其他同1.2.1。每個(gè)pH處理重復(fù)3次。

1.2.4 培養(yǎng)瓶接種量試驗(yàn)

試驗(yàn)采用配方③。設(shè)每個(gè)三角瓶接種量為1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL。其他同1.2.1。每個(gè)接種量處理重復(fù)3次。

2 結(jié)果與分析

2.1 液體培養(yǎng)基配方的試驗(yàn)結(jié)果

菌絲鮮重是評(píng)價(jià)液體菌種質(zhì)量?jī)?yōu)劣的重要指標(biāo)。由表1可知，玉木耳菌絲鮮重由高到低的順序是配方③＞配方①＞配方②，配方③的玉米耳菌絲平均鮮重為265.7 g/L，為三個(gè)配方中最高，與配方①差異不明顯，與配方②差異顯著。菌球均一性最好的是配方③，配方①和配方②相近。供試配方培養(yǎng)的菌球顏色均為淡黃色，但配方①與配方②的菌液顏色較深，而配方③不管在接種前還是接種后培養(yǎng)液透明度都較好，有利于觀察菌球生長(zhǎng)情況（圖1，圖2）。試驗(yàn)結(jié)果表明配方③為供試較佳配方，選擇其進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

表1 不同液體培養(yǎng)基配方的玉木耳菌絲生長(zhǎng)情況

圖1 接種前供試液體培養(yǎng)基狀態(tài)

圖2 供試配方培養(yǎng)菌種6 d后菌液狀態(tài)

2.2 液體菌種培養(yǎng)溫度試驗(yàn)結(jié)果

由表2可知，培養(yǎng)溫度為22℃時(shí)，玉米耳菌絲鮮重最高，為263.7 g/L，與培養(yǎng)溫度24℃的菌絲鮮重（262.3 g/L）差異不明顯，與培養(yǎng)溫度20℃的菌絲鮮重差異顯著。因此，22℃為培養(yǎng)玉米耳液體菌種適宜的溫度。

表2 不同溫度培養(yǎng)玉木耳液體菌種菌絲生長(zhǎng)情況

2.3 液體培養(yǎng)基初始p H試驗(yàn)結(jié)果

由表3可知，當(dāng)培養(yǎng)基初始pH為6.5時(shí)，菌絲鮮重最高為251.7 g/L，與初始pH5.5、pH7.5時(shí)的菌絲鮮重差異達(dá)極顯著水平，且菌球均一性及顏色的差異較明顯。因此，玉木耳液體培養(yǎng)基最適合初始pH為6.5。

圖3 不同溫度培養(yǎng)菌種6 d菌液狀態(tài)

圖4 不同初始p H液體培養(yǎng)基培養(yǎng)菌種6 d后菌液狀態(tài)

2.4 培養(yǎng)瓶不同接種量試驗(yàn)結(jié)果

圖5 不同接種量培養(yǎng)液體菌種6 d菌液狀態(tài)

由表4可知，培養(yǎng)瓶接種量1 mL/瓶的菌絲鮮重與接種量2 mL/瓶差異不明顯，與接種量3 mL/瓶、4 mL/瓶、5 mL/瓶的菌絲鮮重均差異極顯著。但不同接種量菌液顏色、菌球均一性無(wú)明顯差異。因此，在培養(yǎng)玉木耳液體菌種時(shí)，若有條件應(yīng)適當(dāng)增加接種量來(lái)提高液體菌種的菌絲量，從而增加接種后萌發(fā)點(diǎn)。

表4 培養(yǎng)瓶不同接種量試驗(yàn)結(jié)果

3 小結(jié)

試驗(yàn)篩選出適宜玉木耳液體菌種培養(yǎng)基：葡萄糖20 g，玉米粉5 g，豆粉5 g，磷酸二氫鉀0.5 g，硫酸鎂0.5 g，酵母粉1 g，消泡劑0.2 g，水1 000 mL。培養(yǎng)條件為：適宜培養(yǎng)溫度為22℃，培養(yǎng)液初始pH為6.5，條件允許接種量提高至3 mL以上。近兩年來(lái)示范推廣該培養(yǎng)條件培養(yǎng)的液體菌種栽培玉木耳3×105袋，不僅提高了生產(chǎn)效率，且玉木耳產(chǎn)量穩(wěn)定、質(zhì)量良好。