陳洪清，梁梅芳，梁麗霞，蘇曉梅，伍肇欣

（肇慶市第一人民醫(yī)院檢驗科，廣東肇慶 526000）

梅毒是一種因感染梅毒螺旋體所引起的慢性、系統(tǒng)性疾病，其被列為乙類傳染病。因其病程長，若不及時治療不僅會對患者身體健康產(chǎn)生危害，也會對他人的生命安全產(chǎn)生威脅，故而加強對梅毒患者的早期診治十分重要。實驗室檢查是診斷梅毒疾病的有效手段，特別是血清學(xué)檢查方法，梅毒螺旋體顆粒凝集試驗（TPPA）與酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）是較為常見的血清學(xué)檢查手段。ELISA具有操作方便、靈敏度高及價格低廉等優(yōu)勢，目前被廣泛應(yīng)用，但仍存在一定的假陰性和假陽性，可導(dǎo)致漏診、誤診[1]。TPPA應(yīng)用基因工程技術(shù)，能吸附已知抗體或抗原與其相應(yīng)載體表面，后通過酶標(biāo)記抗原抗體反應(yīng)，利用洗滌法洗掉液相中游離成分，通過對底物進(jìn)行觀察并得出結(jié)果，診斷效能高，但兩種診斷方法的靈敏度不同，可引起結(jié)果不一致，在低濃度樣本中更為明顯[2]?；诖耍狙芯繉Ρ攘薚PPA聯(lián)合ELISA與單獨檢測梅毒的診斷效能和應(yīng)用價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2020年1月至12月于肇慶市第一人民醫(yī)院進(jìn)行血清學(xué)檢測的800例疑似梅毒患者的臨床資料，其中499例確診為梅毒患者納入梅毒組，梅毒組患者中男性317例，女性182例；年齡20～59 歲，平均（35.45±3.70）歲；病程 9 個月 ～ 2 年，平均（1.06±0.12）年。診斷標(biāo)準(zhǔn)：參照《2015年美國疾病控制中心性傳播疾病診斷和治療指南（續(xù)）：梅毒的診斷和治療指南》[3]中的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合上述診斷標(biāo)準(zhǔn)，且經(jīng)鍍銀染色檢測呈陽性者；均接受TPPA、ELISA檢測者；臨床資料完整者等。排除標(biāo)準(zhǔn)：近期未接受過相關(guān)治療者；心、肝、腎等器官嚴(yán)重受損者；合并嚴(yán)重精神障礙疾病者等。剩余301例非梅毒者為非梅毒組，非梅毒組中男性180例，女性121例；年齡23～62歲，平均（40.29±5.11）歲。研究在肇慶市第一人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準(zhǔn)下實施。

1.2 方法 所有受檢者檢測當(dāng)天空腹、前1 d晚上10：00后禁食，于無菌條件下采集受檢者外周靜脈血5 mL，置于無抗凝劑采血管中，以4 500 r/min離心10 min處理，收集血清。ELISA檢測：使用ELISA試劑盒，將待測樣本對應(yīng)微孔板按序編號，設(shè)陰性對照3孔、陽性對照2孔和標(biāo)準(zhǔn)空白對照1孔，37 ℃孵育1 h，洗板5次，之后于每孔加入酶標(biāo)試劑100 μL，空白孔除外，繼續(xù)孵育0.5 h，再次洗板5次后每孔加入顯色劑A、B液各50 μL，震勻后，在37 ℃環(huán)境下顯色30 min，每孔加終止液50 μL，通過酶標(biāo)儀波長450 nm讀取數(shù)值。TPPA檢測：使用TPPA試劑盒，用微量滴管將血清稀釋液滴入微量反應(yīng)板第1孔中，共計4滴（100 μL），第一孔用微量移液管取2 μL樣本加入，混勻一段時間后取出25 μL，后依次同上操作，從第1孔，稀釋至第4孔，用試劑盒所提供的滴管于第3孔滴入1滴25 μL未致敏粒子，第4孔加入致敏粒子25 μL，用平板混合器以不會導(dǎo)致微量反應(yīng)板內(nèi)容物濺出的強度混合30 s，加蓋后于室溫（15～30 ℃）下水平靜置，2 h后觀察反應(yīng)現(xiàn)象。

1.3 觀察指標(biāo) ①分析ELISA檢測梅毒的結(jié)果。②分析TPPA檢測梅毒的結(jié)果。③分析ELISA聯(lián)合TPPA檢測梅毒的結(jié)果。④分析兩種檢測方法對梅毒的診斷效能，包括靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值。其中靈敏度=真陽性例數(shù)/（真陽性例數(shù)+假陰性例數(shù)）×100%，特異度=真陰性例數(shù)/（真陰性例數(shù)+假陽性例數(shù)）×100%，陽性預(yù)測值=真陽性例數(shù)/（真陽性例數(shù)+假陽性例數(shù)）×100%，陰性預(yù)測值=真陰性例數(shù)/（假陰性例數(shù)+真陰性例數(shù)）×100%。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 文中數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 23.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析處理，計數(shù)資料用[ 例(%)]表示，行χ2檢驗。以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ELISA檢測梅毒的結(jié)果 ELISA檢測梅毒患者457例，非梅毒者343例，其中真陽性439例，真陰性283例，見表1。

2.2 TPPA檢測梅毒的結(jié)果 TPPA檢測梅毒患者492例，非梅毒者308例，其中真陽性452例，真陰性261例，見表2。

2.3 ELISA聯(lián)合TPPA檢測梅毒的結(jié)果 ELISA聯(lián)合TPPA檢測梅毒患者482例，非梅毒者318例，其中真陽性476例，真陰性295例，見表3。

表3 ELISA聯(lián)合TPPA檢測梅毒的結(jié)果(例)

2.4 兩種檢測方法單獨與聯(lián)合檢測對梅毒的診斷效能 ELISA聯(lián)合TPPA檢測梅毒的靈敏度、特異度、陰性預(yù)測值均顯著高于ELISA、TPPA單獨檢測，陽性預(yù)測值高于TPPA單獨檢測，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05），見表 4。

表4 兩種檢測方法單獨與聯(lián)合檢測對梅毒的診斷效能(%)

3 討論

梅毒對人體產(chǎn)生的危害較大，若未能及時發(fā)現(xiàn)和診治，在感染后1～2年內(nèi)具有強烈的傳染性，患者的精液、乳汁和唾液中均有梅毒螺旋體的存在，其會造成血管塌陷，引發(fā)一系列血管炎癥、潰瘍等病變，對人體系統(tǒng)器官造成嚴(yán)重?fù)p傷，且這種損傷是不可逆的。該疾病具有病程長、臨床表現(xiàn)復(fù)雜、多樣性等特點，診斷難度較大。血清學(xué)檢查方法為其主要檢測手段，有甲苯胺紅不加熱血清反應(yīng)素試驗、TPPA、ELISA、化學(xué)發(fā)光等，選擇合適的檢測方法能避免漏診，有助于臨床診治[4]。

ELISA檢測操作簡單、成本低，結(jié)果清晰易判讀，且資料易儲存整理，其在大量疑似梅毒標(biāo)本篩查中有顯著優(yōu)勢。但值得注意的是，ELISA主要檢測的是梅毒免疫球蛋白G（IgG）和免疫球蛋白M（IgM）混合抗體，而梅毒患者經(jīng)有效治療后，即便是患者治愈后，IgG抗體也會長期伴隨甚至出現(xiàn)終身的陽性，無法得知梅毒是否處于活動狀態(tài)；另外ELISA受所用的標(biāo)記抗原、純度和抗原種類、檢測步驟等因素的影響，很有可能會出現(xiàn)一定的假陽性或假陰性[5]。可見，單一應(yīng)用ELISA方法檢測梅毒，很有可能會出現(xiàn)誤診或漏診的情況，需結(jié)合其他檢測方法來彌補不足[6]。TPPA通過將梅毒螺旋體毒株制備成抗原，能與致敏粒子進(jìn)行有效結(jié)合，產(chǎn)生凝聚狀顆粒，靈敏度高，且其不受生物因素的影響，但試劑較貴，步驟復(fù)雜，且只能通過肉眼觀察評價結(jié)果，原始數(shù)據(jù)無法保存[7]。將兩種檢測方法進(jìn)行有效結(jié)合，可提升檢測靈敏度，可先以ELISA展開檢測，若結(jié)果為陽性，進(jìn)一步以TPPA展開檢測，以提升診斷準(zhǔn)確率[8]。本研究中，ELISA聯(lián)合TPPA檢測梅毒的靈敏度、特異度、陰性預(yù)測值均顯著高于ELISA、TPPA單獨檢測，陽性預(yù)測值高于TPPA單獨檢測，表明兩種方法聯(lián)合檢測可提高梅毒檢測的診斷效能，在最大程度上減少誤診、漏診。

綜上，ELISA操作簡單、快捷，適用于大量疑似梅毒篩查中，聯(lián)合TPPA檢測能提高診斷效能，更好地為患者后期治療提供有利的診斷依據(jù)，推廣應(yīng)用價值較高。