巢穎欣，劉夢詩，楊秀娟，楊得坡，陳柏忠，蔡 軼，陶移文，鄭國棟*

（1.廣州醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，廣東 廣州511436； 2.中山大學(xué)藥學(xué)院，廣東 廣州510006； 3.廣東新寶堂生物科技有限公司，廣東 江門 529000）

陳皮為蕓香科植物橘及其栽培變種的干燥成熟果皮［1］，是我國傳統(tǒng)的“藥食同源”中藥之一，含有豐富的黃酮類、揮發(fā)油成分及少量生物堿、酚酸等成分［2?5］，具有理氣健脾、燥濕化痰等功效［6］。據(jù)2015 年版《中國藥典》記載，陳皮藥材主要分為陳皮與廣陳皮［1］，其中廣陳皮主要來源于廣東、廣西兩省的茶枝柑，以廣東新會所產(chǎn)陳皮最為道地，亦稱“新會陳皮”。由于廣陳皮與陳皮化學(xué)成分較為接近，目前尚無簡單有效的鑒別方法對兩者進行區(qū)分，尤其當(dāng)藥材加工為飲片或粉末時鑒別難度大大增加，不利于廣陳皮與陳皮產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展，故尋找一種快速簡便的方法準(zhǔn)確鑒別廣陳皮與陳皮顯得尤為重要。

2015 年版《中國藥典》 及相關(guān)報道中關(guān)于陳皮薄層鑒別大多僅以橙皮苷為單一指標(biāo)［1，7］，未能全面反映陳皮藥材特征且難以區(qū)分廣陳皮與陳皮。而相關(guān)文獻表明［8］，陳皮中除了含量較高的橙皮苷外，多甲氧基黃酮類成分如川陳皮素也是其主要成分之一，具有顯著的抗炎、抗病毒、抗腫瘤等作用［9?11］。此外，陳皮中還富含揮發(fā)油成分［12］，具有抗氧化、平喘鎮(zhèn)咳、抗炎抑菌等良好作用［13?14］。故本實驗在藥典的基礎(chǔ)上加以改進，采用薄層色譜法同時鑒別黃酮類成分橙皮苷、川陳皮素及揮發(fā)性成分2?甲氨基?苯甲酸甲酯，建立客觀科學(xué)的標(biāo)準(zhǔn)以快速鑒別區(qū)分廣陳皮與陳皮。

1 材料

HK?04B 搖擺式粉碎機（廣州市旭陽機械設(shè)備有限公司）；ME 104 電子分析天平（十萬分之一，瑞士梅特勒?托利多公司）；KQ?800KDE 超聲波清洗機（昆山市超聲儀器有限公司）；ZF?20D 暗箱式紫外分析儀（鞏義市予華儀器有限公司）；Canon EOS M3 照相機（日本Canon 公司）；1～10 μL 玻璃點樣毛細(xì)管（華西醫(yī)科大學(xué)儀器廠）；薄層色譜雙槽展開缸（20 cm×20 cm，上海信誼儀器廠有限公司）；硅膠G60 薄層玻璃板（10 cm×20 cm，德國Merck 公司）；硅膠GF254薄層玻璃板（20 cm×20 cm，山東煙臺江友硅膠開發(fā)有限公司）；硅膠G60 薄層鋁板（20 cm×20 cm，德國Merck 公司）；硅膠GF254薄層鋁板（20 cm×20 cm，上海薩恩化學(xué)技術(shù)有限公司）。橙皮苷對照品（成都曼思特生物科技有限公司，批號MUST?15070211，純度≥98%）；川陳皮素對照品（成都曼思特生物科技有限公司，批號MUST?15110911，純度≥99%）；2?甲氨基?苯甲酸甲酯對照品（上海阿拉丁生化科技股份有限公司，批號K1809090，純度≥98%）。20 批廣陳皮與14 批陳皮藥材于2017 年10月至2018 年12 月收集自全國各柑橘主產(chǎn)地，并均經(jīng)廣州醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院鄭國棟教授鑒定為正品，信息見表1。其他試劑均為分析純。

表1 樣品信息

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液制備 取適量橙皮苷、川陳皮素及2?甲氨基?苯甲酸甲酯對照品，加甲醇搖勻后制得含1.39 mg／mL橙皮苷、1.00 mg／mL 川陳皮素、0.14 mg／mL 2?甲氨基?苯甲酸甲酯的對照品溶液。

2.2 供試品溶液制備 取適量樣品于打粉機內(nèi)進行粉碎并過40 目篩。精密稱取0.5 g 藥材粉末置于具塞錐形瓶，加入5 mL 甲醇，密塞，稱定質(zhì)量，超聲提取30 min（320 W），放冷后用甲醇補足減失的質(zhì)量，濾過，取上清液，即得。

2.3 薄層色譜鑒別 采用2015 年版《中國藥典》 薄層色譜法（第四部通則0502），吸取對照品、供試品溶液各2 μL，分別點于同一硅膠G60薄層板上，先以環(huán)己烷?乙酸乙酯（5 ∶1）為展開劑，展至約8 cm，取出，晾干；再以乙酸乙酯?甲醇（10 ∶3）為展開劑，展至約3 cm，取出，晾干；最后以環(huán)己烷?乙酸乙酯（1 ∶1）為展開劑，展至約5.5 cm，取出，晾干，噴以1%三氯化鋁乙醇試液，置于紫外燈（365 nm）下驗視，結(jié)果見圖1，可知廣陳皮供試品色譜在與對照品色譜對應(yīng)的位置均顯示相同顏色的斑點，而陳皮供試品色譜中無明顯的2?甲氨基?苯甲酸甲酯斑點。

圖1 34 批樣品薄層色譜圖

2.4 薄層色譜方法學(xué)驗證

2.4.1 專屬性試驗 吸取橙皮苷對照品溶液（1.39 mg／mL）、川陳皮素對照品溶液（1.00 mg／mL）、2?甲氨基?苯甲酸甲酯對照品溶液（0.14 mg／mL）、藥材供試品溶液（S7、S9、S20、S23）各2 μL，在“2.3”項條件下展開，未噴1%三氯化鋁乙醇試液前于UV 365 nm 處檢識，結(jié)果見圖2，可知供試品色譜與川陳皮素、2?甲氨基?苯甲酸甲酯對照品相應(yīng)位置顯示相同顏色的斑點。再噴以1%三氯化鋁乙醇試液后于UV 365 nm 處檢識，發(fā)現(xiàn)橙皮苷對照品斑點變成亮黃色，且供試品色譜在相應(yīng)位置呈現(xiàn)相同顏色的斑點，表明該方法專屬性良好。

圖2 專屬性試驗結(jié)果

2.4.2 穩(wěn)定性試驗 吸取對照品溶液以及供試品溶液（放置0、1、3 d）各2 μL，在“2.3”項條件下展開，噴以1%三氯化鋁乙醇試液于UV 365 nm 處檢識。結(jié)果表明，供試品溶液在3 d 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.3 耐用性試驗 吸取對照品溶液與供試品溶液（S7、S9、S20、S23）各2 μL，按“2.3”項下條件考察不同廠家薄層板的層析效果，結(jié)果見圖3，可知不同廠家的薄層板（包括玻璃板和鋁板、G60硅膠板和GF245硅膠板）均能檢測到橙皮苷、川陳皮素、2?甲氨基?苯甲酸甲酯，且分離效果良好，提示該方法耐用性良好，適用性廣泛。

圖3 不同廠家薄層板的薄層色譜圖對比

3 討論

3.1 樣品前處理方法考察 考察了臨用前粉碎、放置一段時間（1 d、20 d、6 個月）的藥材粉末。圖4 表明，放置一段時間的廣陳皮粉末色譜圖中2?甲氨基?苯甲酸甲酯斑點明顯減弱甚至消失，提示粉碎后陳皮藥材油室被破壞，揮發(fā)性成分2?甲氨基?苯甲酸甲酯易散失，不利于保存，故應(yīng)選擇在臨用前粉碎藥材。

圖4 臨用前粉碎、放置一段時間藥材粉末薄層色譜對比

3.2 供試品溶液制備方法 《中國藥典》 關(guān)于陳皮的薄層色譜鑒別中，采用了加熱回流法提取并進行適當(dāng)濃縮，但較為繁瑣復(fù)雜，而且難以準(zhǔn)確把溶液濃縮至1 mL。本實驗采用超聲提取法，取0.5 g 樣品粉末，加5 mL 甲醇提取20 min（320 W），該方法方便快捷，薄層色譜圖上主斑點清晰明顯，可用于供試品溶液的制備。

3.3 展開系統(tǒng)選擇 由于3 種指標(biāo)成分橙皮苷、川陳皮素、2?甲氨基?苯甲酸甲酯極性相差較大，采用同一種展開劑難以把三者有效分離，故本實驗考慮根據(jù)三者極性的大小采用3 次展開法。首先采用環(huán)己烷?乙酸乙酯（5 ∶1）展至8 cm 以分離2?甲氨基?苯甲酸甲酯等小極性成分，然后采用乙酸乙酯?甲醇（10 ∶3）展至3 cm 以分離橙皮苷等大極性成分，最后采用環(huán)己烷?乙酸乙酯（1 ∶1）展至5.5 cm以分離川陳皮素等中低極性成分。此外，在該展開系統(tǒng)下橙皮苷、川陳皮素、2?甲氨基?苯甲酸甲酯的Rf 值分別為0.22、0.39、0.76，均在0.2～0.8 的范圍內(nèi)，符合薄層色譜的要求。

3.4 方法的優(yōu)良性 采用該方法時，主斑點清晰平整，指標(biāo)成分彼此有效分離，能有效定性鑒別陳皮中的橙皮苷、川陳皮素及2?甲氨基?苯甲酸甲酯。根據(jù)果實的成熟度及采收時間，道地藥材新會陳皮一般分為柑青皮（農(nóng)歷立秋至寒露之間）、微紅皮（農(nóng)歷寒露至小雪之間）、大紅皮（農(nóng)歷小雪至冬至之間），本實驗對柑青皮、微紅皮、大紅皮3種類型新會陳皮樣品進行全面考察，結(jié)果均顯示明顯的2?甲氨基?苯甲酸甲酯斑點。此外，在供試品色譜中其他產(chǎn)地廣陳皮也顯示出明顯的2?甲氨基?苯甲酸甲酯斑點，而其他品種陳皮在橙皮苷和川陳皮素含量上與廣陳皮差異較大，均無明顯的2?甲氨基?苯甲酸甲酯斑點，表明2?甲氨基?苯甲酸甲酯為廣陳皮特征性成分。與采用單一指標(biāo)成分作為判別依據(jù)的文獻相比［1，15］，該方法同時結(jié)合3 種指標(biāo)成分對廣陳皮與陳皮進行分析，更能全面反映兩者在化學(xué)成分上的共性與異性，故可作為其快速鑒別的有效手段。