周曉歡，袁亞敏，余 璽，王璋琳，李 馨，黃建新，劉亞麗

（平頂山學(xué)院醫(yī)學(xué)院，河南 平頂山 467000）

椿根皮是苦木科臭椿屬植物臭椿Ailanthus altissima（Mill.）Swingle 的干燥根皮［1］，主要分布于河南、湖北、海南、青海、江西等省，全年均可采收，其味苦澀性寒，具有清熱燥濕、收斂止帶、止瀉止血的功效，用于濕熱瀉痢、赤白帶下、久瀉久痢、便血、崩漏等［2］，其主要化學(xué)成分包括木脂素、黃酮、三萜、生物堿、有機(jī)酸［3］，具有抑菌、抗腫瘤、抗氧化、提高免疫力、保護(hù)神經(jīng)等活性［4?5］。本實(shí)驗(yàn)對(duì)椿根皮乙醇提取物進(jìn)行分離，得到15 個(gè)化合物，均為首次從該植物中分離得到，其中1～2、4、8、13 為首次從臭椿屬植物中分離得到，8、13 具有一定的體外抗腫瘤活性。

1 材料

APLX6.0 型高分辨質(zhì)譜儀、DRX?800 型核磁共振波譜儀（TMS 內(nèi)標(biāo)）（德國(guó)Bruker 公司）；HQ1431 型電子天平（瑞士Buchi 公司）；KLG120F型超聲清洗器、KT91P 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（鞏義市予華儀器有限公司）；恒溫電熱水浴鍋（廣州菲羅門儀器廠）。Sephadex LH?20（美國(guó)GE Healthcare 公司）；柱色譜硅膠（100～200、300～400 目，青島海洋化工廠）。ALP130 型暗箱式紫外分析儀（德國(guó)Merck 公司）；二甲基亞砜（DMSO，美國(guó)Fisher Scientific 公司）；順鉑（美國(guó)Macklin 公司）；噻唑藍(lán)（MTT，美國(guó)Amresco 公司）。人結(jié)腸癌細(xì)胞株COLO205、人大腸癌細(xì)胞株P(guān)A319、人胰腺癌細(xì)胞株AsPc、人肺腺癌細(xì)胞株A549（中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞庫(kù)）。提取分離試劑均為分析純。

椿根皮采自河南省平頂山市，由平頂山學(xué)院黃建新副教授鑒定為椿根皮Ailanthus altissima（Mill.）Swingle。

2 提取與分離

取干燥椿根皮43.6 kg，加入15 倍95%乙醇回流提取3 次，每次1.5 h，合并提取液，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓回收溶劑，得浸膏7.2 kg。將上述浸膏超聲溶解于2 L 水中，依次用等體積石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得石油醚萃取物（174.6 g，F(xiàn)r.A）、二氯甲烷萃取物（131.4 g，F(xiàn)r.B）、乙酸乙酯萃取物（129.3 g，F(xiàn)r.C）、正丁醇萃取物（137.2 g，F(xiàn)r.D）。Fr.B 經(jīng)硅膠柱，以石油醚?丙酮（90 ∶10～10 ∶90）梯度洗脫，薄層硅膠板檢測(cè)后合并相似組分，得到11 個(gè)餾分（Fr.B1～Fr.B11）。

Fr.B2 經(jīng)硅膠柱，以石油醚?乙酸乙酯（70 ∶30～30 ∶70）梯度洗脫，薄層硅膠板檢測(cè)后，合并相似組分，得到8 個(gè)餾分（Fr.B2?1～Fr.B2?8）。Fr.B2?4 經(jīng)硅膠柱，以石油醚?丙酮（60 ∶40）洗脫，得化合物1（24 mg）；Fr.B2?6 經(jīng)硅膠柱，以石油醚?二氯甲烷（40 ∶60）洗脫，得化合物5（19 mg）、6（31 mg）；Fr.B2?7 經(jīng)結(jié)晶、重結(jié)晶，得化合物4（27 mg）。Fr.B4 經(jīng)硅膠柱，以石油醚?乙酸乙酯（60 ∶40～20 ∶80）梯度洗脫，薄層硅膠板檢測(cè)后合并相似組分，得到13 個(gè)餾分（Fr.B4?1～Fr.B4?13）。Fr.B4?2 經(jīng)硅膠柱，以石油醚?丙酮（50 ∶50）洗脫，得化合物2（26 mg）；Fr.B4?7經(jīng)Sephadex LH?20 分離，以甲醇洗脫，得化合物14（23 mg）。Fr.B7 經(jīng)硅膠柱，以石油醚?乙酸乙酯（30 ∶70～10 ∶90）梯度洗脫，薄層硅膠板檢測(cè)后合并相似組分，得到10 個(gè)餾分（Fr.B7?1～Fr.B7?10）。Fr.B7?3 經(jīng)硅膠 柱，以石油 醚?丙 酮（50 ∶50）洗脫，得化合物15（33 mg）；Fr.B7?5經(jīng)結(jié)晶、重結(jié)晶，得化合物3（21 mg）；Fr.B7?9經(jīng)Sephadex LH?20 分離，以甲醇洗脫，得化合物8（29 mg）。Fr.C 經(jīng)硅膠 柱，以二氯甲烷?丙 酮（90 ∶10～10 ∶90）梯度洗脫，薄層硅膠板檢測(cè)后合并相似組分，得到13 個(gè)餾分（Fr.C1～Fr.C13）。Fr.C3 經(jīng)硅膠柱色譜分離，以二氯甲烷?乙酸乙酯（80 ∶20～20 ∶80）梯度洗脫，薄層硅膠板檢測(cè)后合并相似組分，得到7 個(gè)餾分（Fr.C3?1～Fr.C3?7）。Fr.C3?2 經(jīng)硅膠柱，以二氯甲烷?丙酮（50 ∶50）洗脫，得化合物9（27 mg）；Fr.C3?5 經(jīng)硅膠柱，以二氯甲烷?乙酸乙酯（60 ∶40）洗脫，得化合物13（29 mg）；Fr.C3?7 經(jīng)結(jié)晶、重結(jié)晶，得化合物11（18 mg）。取Fr.C5 經(jīng)硅膠柱，以二氯甲烷?乙酸乙酯（70 ∶30～30 ∶70）梯度洗脫，薄層硅膠板檢測(cè)后合并相似組分，得到6 個(gè)餾分（Fr.C5?1～Fr.C5?6）。Fr.C5?3 經(jīng)硅膠柱，以二氯甲烷?丙酮（50 ∶50）洗脫，得化合物7（35 mg）；Fr.C5?5 經(jīng)硅膠柱，以二氯甲烷?乙酸乙酯（40 ∶60）洗脫，得化合物10（31 mg）；Fr.C3?7 經(jīng)Sephadex LH?20 分離，以甲醇洗脫，得化合物12（21 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色粉末（丙酮）。ESI?MSm／z：296.8 ［M ＋Na］＋。1H?NMR（DMSO?d6，600 MHz）δ：6.91（1H，d，J＝12.0 Hz，H?5′），6.71（1H，dd，J＝12.0，2.2 Hz，H?6′），6.59（1H，d，J＝2.2 Hz，H?2′），6.28（1H，t，J＝2.2 Hz，H?4），6.19（2H，d，J＝2.2 Hz，H?2，6），2.76（4H，m，H?α，α′），3.81（3H，s，3′?OCH3），3.73（3H，s，3?OCH3）；13C?NMR（DMSO?d6，150 MHz）δ：145.1（C?1），107.1（C?2），161.2（C?3），100.2（C?4），157.1（C?5），107.6（C?6），134.1（C?1′），110.7（C?2′），145.2（C?3′），144.1（C?4′），113.6（C?5′），120.7（C?6′），37.5（C?α），36.8（C?α′），54.9（3?OCH3），56.1（3′?OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［6］ 基本一致，故鑒定為gigantol。

化合物2：無色油狀物（甲醇）。ESI?MSm／z：257.3 ［M ＋Na］＋。1H?NMR（DMSO?d6，600 MHz）δ：5.69（1H，s，H?9），2.77（1H，d，J＝12.0 Hz，H?12），2.68（1H，d，J＝8.2 Hz，H?12），2.39（1H，td，J＝12.2，8.2 Hz，H?1），2.31（1H，dd，J＝12.0 Hz，8.2 Hz，H?6），2.09～2.14（1H，m，H?1），2.07（1H，dd，J＝12.0，8.2 Hz，H?7），1.87～1.97（1H，m，H?3），1.79～1.81（1H，m，H?4），1.69（1H，dd，J＝12.0，8.2 Hz，H?6），1.51～1.57（1H，m，H?2），1.49（1H，dq，J＝12.0，8.2 Hz，H?3），1.19～1.24（1H，m，H?2），1.13（3H，s，H?13），1.07（3H，s，H?14），0.91（3H，d，J＝8.2 Hz，H?15）；13C?NMR（DMSO?d6，150 MHz）δ：32.8（C?1），30.1（C?2），29.7（C?3），38.1（C?4），39.4（C?5），39.1（C?6），50.2（C?7），197.4（C?8），121.6（C?9），172.8（C?10），55.7（C?11），55.8（C?12），16.9（C?13），20.8（C?14），17.9（C?15）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］ 基本一致，故鑒定為7α?H?9（10）?ene?11，12?epoxy?8?oxoeremophilane。

化合物3：黃色粉末（甲醇）。ESI?MSm／z：338.6 ［M ＋Na］＋。1H?NMR（DMSO?d6，600 MHz）δ：12.14（1H，s，5?OH），7.08（1H，d，J＝8.2 Hz，H?2′），6.94（1H，d，J＝8.2 Hz，H?5′），6.85（1H，dd，J＝8.2，2.2 Hz，H?6′），5.97（1H，d，J＝8.2 Hz，H?8），5.86（1H，d，J＝12.0 Hz，H?6），5.48（1H，dd，J＝8.2，2.2 Hz，H?2），3.94（3H，s，7?OCH3），3.76（3H，s，4′?OCH3），3.24（1H，dd，J＝8.2，2.2 Hz，H?3a），2.75（1H，dd，J＝8.2，2.2 Hz，H?3b）；13C?NMR（DMSO?d6，150 MHz）δ：104.2（C?1），78.3（C?2），44.1（C?3），199.2（C?4），158.4（C?5），96.1（C?6），168.2（C?7），93.7（C?8），162.3（C?9），102.9（C?10），130.2（C?1′），113.2（C?2′），146.4（C?3′），147.6（C?4′），114.3（C?5′），117.6（C?6′），55.9（4′?OCH3），56.8（7?OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］ 基本一致，故鑒定為5，3′?dihydroxy?7，4′?dime?thoxyflavanone。

化合物4：無色油狀物（甲醇）。ESI?MSm／z：257.2 ［M ＋Na］＋。1H?NMR（DMSO?d6，600 MHz）δ：5.69（1H，s，H?9），2.58（1H，d，J＝8.2 Hz，H?12），2.47（1H，d，J＝8.2 Hz，H?12），2.41（1H，dd，J＝12.0，2.2 Hz，H?7），2.39（1H，t，J＝12.0 Hz，H?1），2.06～2.09（1H，m，H?1），2.04（1H，dd，J＝12.0，8.2 Hz，H?6），1.87～1.93（1H，m，H?2），1.76～1.85（1H，m，H?4），1.54～1.59（1H，m，H?3），1.46～1.51（1H，m，H?3），1.43（1H，dd，J＝12.0，8.2 Hz，H?6），1.39（3H，s，H?13），1.18～1.27（1H，m，H?2），1.06（3H，s，H?14），0.93（3H，d，J＝12.0 Hz，H?15）；13C?NMR（DMSO?d6，150 MHz）δ：32.8（C?1），30.1（C?2），29.7（C?3），39.1（C?4），42.5（C?5），33.8（C?6），48.2（C?7），197.1（C?8），123.4（C?9），171.8（C?10），55.9（C?11），50.6（C?12），20.8（C?13），21.3（C?14），15.9（C?15）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］ 基本一致，故鑒定為7β?H?9（10）?ene?11，12?epoxy?8?oxoeremophilane。

化合物5：無色油狀物（甲醇）。ESI?MSm／z：270.8 ［M ＋Na］＋。1H?NMR（DMSO?d6，600 MHz）δ：6.94（1H，d，J＝8.2 Hz，H?5），6.68（1H，d，J＝8.2 Hz，H?6），6.63（1H，s，H?2），6.08（1H，m，H?3′），4.41（1H，dd，J＝12.0，8.2 Hz，H?9α），4.02（1H，dd，J＝12.0，8.2 Hz，H?9β），3.41（1H，m，H?8），2.30（3H，s，H?7），2.03（3H，d，J＝12.0 Hz，H?4′），1.87（3H，s，H?5′），1.39（3H，d，J＝12.0 Hz，H?10）；13C?NMR（DMSO?d6，150 MHz）δ：139.9（C?1），117.6（C?2），153.8（C?3），128.1（C?4），124.6（C?5），120.8（C?6），20.7（C?7），31.9（C?8），70.2（C?9），17.1（C?10），170.2（C?1′），126.8（C?2′），140.1（C?3′），15.7（C?4′），21.3（C?5′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］ 基本一致，故鑒定為9?angeloyloxythymol。

化合物6：白色粉末（甲醇）。ESI?MSm／z：159.2 ［M ＋Na］＋。1H?NMR（DMSO?d6，600 MHz）δ：8.01（2H，d，J＝12.0 Hz，H?2，6），6.96（1H，d，J＝12.0 Hz，H?3，5），2.63（3H，s，H?8）；13C?NMR（DMSO?d6，150 MHz）δ：130.1（C?1），129.3（C?2），116.2（C?3），159.3（C?4），116.2（C?5），129.3（C?6），200.3（C?7），27.1（C?8）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［11］ 基本一致，故鑒定為對(duì)羥基苯乙酮。

化合物7：黃色油狀物（丙酮）。ESI?MSm／z：264.7 ［M ＋Na］＋。1H?NMR（DMSO?d6，600 MHz）δ：8.03（1H，d，J＝12.0 Hz，H?5），6.28（1H，d，J＝12.0，8.2 Hz，H?6），6.62（1H，d，J＝8.2 Hz，H?8），6.41（1H，d，J＝8.2 Hz，H?1），6.31（1H，d，J＝8.2 Hz，H?3），2.57（4H，s，H?9，10），3.76（3H，s，4?OCH3）；13C?NMR（DMSO?d6，150 MHz）δ：107.9（C?1），158.1（C?2），100.3（C?3），162.4（C?4），129.7（C?5），114.8（C?6），155.7（C?7），114.2（C?8），32.3（C?9），30.7（C?10），139.8（C?1a），117.2（C?4a），125.8（C?5a），147.2（C?8a），56.1（4?OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］ 基本一致，故鑒定為coelonin。

化合物8：白色晶體（丙酮）。ESI?MSm／z：219.3 ［M ＋Na］＋。1H?NMR（DMSO?d6，600 MHz）δ：13.97（1H，s，?OH），5.94（1H，d，J＝8.2 Hz，H?4），5.87（1H，d，J＝8.2 Hz，H?7），3.91（3H，s，6?OCH3），3.79（3H，s，5?OCH3），2.58（3H，s，2?OCH3）；13C?NMR（DMSO?d6，150 MHz）δ：202.8（C?1），105.8（C?2），168.3（C?3），94.2（C?4），165.7（C?5），163.2（C?6），91.3（C?7），32.9（2?OCH3），56.1（5，6?OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］ 基本一致，故鑒定為crototropone。

化合物9：白色粉末（丙酮）。ESI?MSm／z：460.8 ［M ＋Na］＋。1H?NMR（DMSO?d6，600 MHz）δ：7.61（1H，s，H?3），6.08（1H，J＝8.2 Hz，H?1），5.81（1H，s，H?1′），5.59（1H，d，J＝2.2 Hz，H?7），4.63（1H，s，H?6），3.82（3H，s，?OCH3），3.29～3.81（5H，H?2′～6′），3.18（1H，s，H?9），1.76（3H，s，H?10）；13C?NMR（DMSO?d6，150 MHz）δ：93.8（C?1），155.2（C?3），109.3（C?4），72.9（C?5），76.8（C?6），126.9（C?7），142.7（C?8），55.1（C?9），15.2（C?10），169.1（C?11），99.2（C?1′），71.8（C?2′），75.7（C?3′），70.2（C?4′），74.8（C?5′），61.3（C?6′），52.3（?OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］ 基本一致，故鑒定為7，8?dehydropenstemoside。

化合物10：白色粉末（丙酮）。ESI?MSm／z：426.9 ［M ＋Na］＋。1H?NMR（DMSO?d6，600 MHz）δ：5.62（1H，d，J＝2.2 Hz，H?6），4.71（1H，d，J＝8.2 Hz，H?1′），4.48（1H，d，J＝2.2 Hz，H?7），3.76（3H，s，?OCH3），1.32（3H，s，?OCH3）；13C?NMR（DMSO?d6，150 MHz）δ：94.2（C?1），154.1（C?3），110.8（C?4），128.3（C?5），141.7（C?6），76.4（C?7），73.2（C?8），51.6（C?9），15.1（C?10），167.1（C?11），99.2（C?1′），71.8（C?2′），75.8（C?3′），69.8（C?4′），78.2（C?5′），60.7（C?6′），49.6（?OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［14］ 基本一致，故鑒定為gentioside。

化合物11：黃色結(jié)晶（丙酮）。ESI?MSm／z：323.4 ［M ＋Na］＋。1H?NMR（DMSO?d6，600 MHz）δ：13.24（1H，s，5?OH），8.05（d，J＝12.0 Hz，1H），7.71（1H，d，J＝8.2 Hz，H?6′），7.63（1H，d，J＝8.2 Hz，H?2′），7.32（1H，d，J＝12.0 Hz，H?5′），6.76（1H，s，H?3），6.49（1H，d，J＝8.2 Hz，H?8），6.18（1H，d，J＝8.2 Hz，H?6），3.94（3H，s，3′?OCH3）；13C?NMR（DMSO?d6，150 MHz）δ：164.5（C?2），104.2（C?3），182.4（C?4），158.1（C?5），99.3（C?6），163.8（C?7），93.6（C?8），160.8（C?9），102.7（C?10），119.2（C?1′），108.4（C?2′），148.2（C?3′），147.9（C?4′），116.1（C?5′），122.4（C?6′），56.1（3′?OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［15］ 基本一致，故鑒定為金圣草黃素。

化合物12：白色粉末（丙酮）。ESI?MSm／z：553.2 ［M ＋Na］＋。1H?NMR（DMSO?d6，600 MHz）δ：7.61（2H，d，J＝8.2 Hz，H?7′，7″），7.13（2H，m，H?2，2′），6.87（2H，m，H?6′，6″），6.65（2H，m，H?5′，5″），6.18（2H，d，J＝8.2 Hz，H?8′，8″），5.71（1H，m，H?5），4.97（1H，dd，J＝12.0，8.2 Hz，H?4），4.40（1H，m，H?3），3.81（3H，s，?OCH3）；13C?NMR（DMSO?d6，150 MHz）δ：74.9（C?1），37.1（C?2），65.8（C?3），69.2（C?4），69.2（C?5），40.7（C?6），177.1（C?7），169.2（C?9），128.1（C?1′），115.3（C?2′），47.2（C?3′），150.1（C?4′），17.2（C?5′），122.8（C?6′），148.1（C?7′），114.6（C?8′），128.4（C?1″），116.1（C?2″），47.2（C?3″），150.3（C?4″），117.2（C?5″），122.8（C?6″），148.1（C?7″），114.9（C?8″），169.2（C?9″），54.6（?OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［16］ 基本一致，故鑒定為4，5?二咖啡?；鼘幩峒柞?。

化合物13：白色油狀物（丙酮）。ESI?MSm／z：331.4 ［M ＋Na］＋。1H?NMR（DMSO?d6，600 MHz）δ：6.81（1H，s，H?5），5.09（1H，m，H?3），4.62（1H，d，J＝8.2 Hz，H?4），4.07～4.23（1H，m，H?10），4.01（3H，s，6?OCH3），3.79（3H，s，7?OCH3），2.59～2.65（1H，m，H?9β），1.97（1H，ddd，J＝12.0，8.2，2.2 Hz，H?9a），1.71（1H，m，H?11a），1.58（1H，m，H?11b），1.40（2H，m，H?2～12），1.01（3H，t，J＝8.2 Hz，H3?13）；13C?NMR（DMSO?d6，150 MHz）δ：170.2（C?1），82.7（C?3），76.1（C?4），105.8（C?5），159.7（C?6），138.7（C?7），156.8（C?8），39.7（C?9），80.1（C?10），40.3（C?11），21.4（C?12），15.1（C?13），134.2（C?4a），102.7（C?8a），50.3（7?OCH3），57.0（6?OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［16］ 基本一致，故鑒定為monocerin。

化合物14：白色粉末（丙酮）。ESI?MSm／z：400.2 ［M ＋Na］＋。1H?NMR（DMSO?d6，600 MHz）δ：5.24（1H，s，H?14），3.97（1H，t，J＝12.0 Hz，H?15），3.85（1H，t，J＝12.0 Hz，H?16a），3.81（1H，m，H?2），3.72（1H，t，J＝12.0 Hz，H?16b），3.61（1H，d，J＝8.2 Hz，H?19a），3.19（1H，d，J＝8.2 Hz，H?19b），1.37（3H，s，H?22），1.28（3H，s，H?23），1.09（3H，s，H?18），0.87（3H，s，H?17），0.81（3H，s，H?20）；13C?NMR（DMSO?d6，150 MHz）δ：50.1（C?1），65.2（C?2），44.1（C?3），39.7（C?4），55.1（C?5），22.4（C?6），36.1（C?7），138.4（C?8），50.2（C?9），41.7（C?10），20.3（C?11），33.1（C?12），35.9（C?13），127.6（C?14），79.4（C?15），63.9（C?16），24.1（C?17），25.9（C?18），64.7（C?19），17.3（C?20），110.2（C?21），26.1（C?22），25.3（C?23）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［17］ 基本一致，故鑒定為isopropylidenkirenol。

化合物15：無色油狀物（甲醇）。ESI?MSm／z：200.7 ［M ＋Na］＋。1H?NMR（DMSO?d6，600 MHz）δ：7.71（1H，d，J＝12.0 Hz，H?6），6.91（1H，s，H?3），6.69（1H，d，J＝12.0 Hz，H?5），2.49（3H，s，H?10），2.41（3H，s，4?OCH3）；13C?NMR（DMSO?d6，150 MHz）δ：112.8（C?1），163.8（C?2），119.2（C?3），149.7（C?4），120.7（C?5），131.9（C?6），196.1（C?8），200.1（C?9），27.3（C?10），21.9（4?OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［18］ 基本一致，故鑒定為1?（2?hydroxy?4?methylphe?nyl）propan?1，2?dione。

4 體外抗腫瘤活性篩選

采用MTT 法［19?20］測(cè)試化合物1～15、椿根皮粗提物對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞株COLO205、人大腸癌細(xì)胞株P(guān)A319、人胰腺癌細(xì)胞株AsPc、人肺腺癌細(xì)胞株A549 的體外抑制作用，以順鉑為陽(yáng)性對(duì)照藥。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的COLO205、PA319、AsPc、A549細(xì)胞株，胰酶消化，稀釋成濃度3×105／mL 的單細(xì)胞懸液，各濃度均設(shè)置3 個(gè)復(fù)孔，以每孔100 μL置于96 孔板中，在37.0 ℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24 h，分別加入各濃度化合物1～15、椿根皮粗提物（質(zhì)量濃度為45 μg／mL）、順鉑，培養(yǎng)24 h，每孔加入10 μL MTT 試劑染色，孵育5.0 h，棄去上層培養(yǎng)液，每孔加入100 μL DMSO，輕輕搖動(dòng)均勻，用酶標(biāo)儀檢測(cè)510 nm 波長(zhǎng)下的吸光度，計(jì)算細(xì)胞抑制率，采用SPSS 22.0 軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)算各化合物的IC50值。結(jié)果表明，化合物8 對(duì)AsPc 細(xì)胞株、化合物13 對(duì)COLO205 和AsPc 細(xì)胞株均具有較強(qiáng)的體外抑制作用，椿根皮粗提物對(duì)COLO205、PA319、AsPc、A549 細(xì)胞具較強(qiáng)的體外抑制作用，其中體外抑制PA319、A549 活性優(yōu)于順鉑，見表1。

表1 體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)IC50值（μmol／L，， n＝3）Tab.1 IC50 values in antitumor activity in vitro tests（μmol／L，， n＝3）

表1 體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)IC50值（μmol／L，， n＝3）Tab.1 IC50 values in antitumor activity in vitro tests（μmol／L，， n＝3）

5 討論

椿根皮為民間常用藥，在抗腫瘤方劑中多有出現(xiàn)，但關(guān)于其單體化合物活性的報(bào)道較少，僅Yan等［21］從中分離的外消旋苯丙烷具有抗腫瘤活性。課題組前期對(duì)椿根皮抗腫瘤活性進(jìn)行篩選，發(fā)現(xiàn)其對(duì)COLO205、PA319、AsPc、A549 細(xì)胞具較強(qiáng)的體外抑制作用。為了進(jìn)一步探求椿根皮中抗腫瘤活性可能的單體化合物，本研究從中分離得到15 個(gè)化合物，均為首次發(fā)現(xiàn)，其中1～2、4、8、13 為首次從該屬植物中分得。再采用 COLO205、PA319、AsPc、A549 細(xì)胞株對(duì)所得化合物進(jìn)行體外抗腫瘤活性篩選，結(jié)果8、13 具有不同程度的抗腫瘤活性。本研究豐富了椿根皮化學(xué)成分的物質(zhì)基礎(chǔ)，可為相關(guān)抗腫瘤新藥的研發(fā)提供參考。