王為城

摘要：為了解福鼎地區(qū)蜜蜂細(xì)菌性病原菌流行情況。對(duì)2019—2021年采集病死的蜜蜂樣品423份，采用常規(guī)的細(xì)菌分離鑒定和PCR方法進(jìn)行細(xì)菌性并進(jìn)行分離鑒定。結(jié)果顯示，結(jié)果顯示分離得到幼蟲芽孢桿菌、蜂房蜜蜂球菌、屎腸球菌、蜜蜂螺旋體病、蜜蜂敗血桿菌、蜂房哈夫尼菌6種細(xì)菌性疾病，分別占采集樣品的分別占采集樣品的13.5%、13.9%、3.9%、4.5%、14.2%、19.1%，其中以蜜蜂敗血桿菌、蜂房哈夫尼菌、幼蟲芽孢桿菌蜂房蜜蜂球菌4種病原菌為流行的主要病原菌。6種細(xì)菌性疾病呈現(xiàn)混合感染，以二重病原菌感染、三重病原菌感染及四重病原菌感染所占比例較高，分別占采集樣品的14.2%、12.3%、13.5%。說明該地區(qū)蜜蜂細(xì)菌性病較嚴(yán)重，呈現(xiàn)多重感染。

關(guān)鍵詞：蜜蜂;細(xì)菌性疾病;分離鑒定;調(diào)查;分析

中圖分類號(hào)：S895文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Bdoi：10.3969/j.issn.2096-3637.2021.23.003

Investigation and Analysis of Bacterial Pathogens of Honey Bees in Fuding，F(xiàn)ujian Province

WANG Weicheng

（Agricultural Comprehensive Law Enforcement Brigade，F(xiàn)uding City，F(xiàn)ujian Ningde 355200，China）

Abstract：To understand the prevalence of bacterial pathogens in Apis Mellifera in Fuding. 423 Bee samples from 2019——2021 were isolated and identified by routine bacterial isolation and PCR. The results showed that six bacterial diseases were isolated，including Bacillus cereus，bee colony bee coccus，Bee Enterococcus Faecium，Bee spirochete disease，Bee Septicemia Bacillus，and Hafniellacellulosae，13.5%，13.9%，3.9%，4.5%，14.2% and 19.1% of the samples，respectively，among them，Septicemia Bacilli，Hafniellacellulosae and Bacillus cereus were the main pathogens. There were mixed infection in 6 kinds of bacterial diseases，the proportion of double，triple and quadruple pathogens were 14.2%，12.3% and 13.5%，respectively.The results showed that the bacterial venereal disease of honey bees in this area was serious and presented multiple infection.

Keywords：bee，bacterial diseases，isolation and identification，investigation，analysis

0引言

經(jīng)過統(tǒng)計(jì)我國每年蜂蜜產(chǎn)量達(dá)50 t以上，占世界總產(chǎn)量的65%以上，其出口量達(dá)12萬t，養(yǎng)蜂業(yè)成為組成生態(tài)農(nóng)業(yè)的重要組成部分。近年，隨著蜜蜂養(yǎng)殖數(shù)量的增加，蜜蜂細(xì)菌性疾病發(fā)生與流行呈現(xiàn)逐年增高的趨勢(shì)，且成為危害蜜蜂養(yǎng)殖業(yè)的嚴(yán)重的疾病之一，嚴(yán)重影響蜜蜂的經(jīng)濟(jì)效益，臨床中經(jīng)過統(tǒng)計(jì)蜜蜂的細(xì)菌性疾病的的發(fā)生率在50%以上，該病成為奶牛養(yǎng)殖過程中常見疾病，且給養(yǎng)蜂業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。試驗(yàn)對(duì)2019—2021年采集采集病死的蜜蜂樣品423份進(jìn)行細(xì)菌性病原菌分離，為該病的綜合防控提供參考依據(jù)。

1材料與方法

1.1病料來源

2019—2021年采集采集病死的蜜蜂樣品423份進(jìn)行細(xì)菌性病原分離鑒定。

1.2主要試劑

7%綿羊血脫纖培養(yǎng)基，普通營養(yǎng)培養(yǎng)基，均購自青島日水微生物科技有限公司;細(xì)菌鑒定試紙條購自法國梅里埃公司;2ch3TaqMarkerMix，購北京酷來搏科技有限公司;DL2000DNAmarker;購自北京邁瑞達(dá)科技有限公司。

1.3細(xì)菌分離培養(yǎng)

無菌條件下，對(duì)采集的病死蜂樣品進(jìn)行處理，處理的樣品接種于7%綿羊血脫纖培養(yǎng)基恒溫37 ℃培養(yǎng)12～24 h，挑取單個(gè)菌落接種普通營養(yǎng)培養(yǎng)基純化培養(yǎng)，并染色鏡檢。

1.4細(xì)菌生化試驗(yàn)

對(duì)普通營養(yǎng)培養(yǎng)基分離菌株，參照細(xì)菌的試紙條說明書對(duì)分離菌株進(jìn)行生化試驗(yàn)鑒定。

1.5分離菌株的細(xì)菌PCR鑒定

采用水煮法提取分離菌株的基因組DNA，報(bào)道細(xì)菌的16SrRAN通用引物，引物由華大基因公司合成，以提取分離菌株的基因組DNA為模板進(jìn)行PCR鑒定和測(cè)序，測(cè)序結(jié)果根據(jù)Genbank登錄的參考株進(jìn)行同源性對(duì)比。

2結(jié)果

2.1細(xì)菌分離鑒定結(jié)果

對(duì)2019—2021年采集病死的蜜蜂樣品423份，采用常規(guī)的細(xì)菌分離鑒定、生化試驗(yàn)和PCR方法進(jìn)行細(xì)菌的分離鑒定，結(jié)果顯示分離得到美洲幼蟲腐臭?。ㄓ紫x芽孢桿菌）、歐洲幼蟲腐臭?。ǚ浞棵鄯淝蚓⑹耗c球菌、蜜蜂螺旋體病、蜜蜂敗血桿病（蜜蜂敗血桿菌）、蜜蜂副傷寒（蜂房哈夫尼菌）6種細(xì)菌性疾病，分別占采集樣品的13.5%、13.9%、3.9%、4.5%、14.2%、19.1%，其中蜜蜂敗血桿菌、蜂房哈夫尼菌、幼蟲芽孢桿菌蜂房蜜蜂球菌4種病原菌所占比例較高，見表1。

2.2多重病原菌感染分析結(jié)果結(jié)果

對(duì)2019—2021年采集病死的蜜蜂樣品423份，分離得到美洲幼蟲腐臭?。ㄓ紫x芽孢桿菌）、歐洲幼蟲腐臭?。ǚ浞棵鄯淝蚓⑹耗c球菌、蜜蜂螺旋體病、蜜蜂敗血桿?。鄯鋽⊙獥U菌）、蜜蜂副傷寒（蜂房哈夫尼菌）等6細(xì)菌性疾病。并對(duì)6種細(xì)菌性病原進(jìn)行多重感染分析，結(jié)果由表可知，二重病原菌感染、三重病原菌感染、四重病原菌感染、五重病原菌感染、六重病原菌感染分別占采集樣品的14.2%、12.3%、13.5%、4.5%、3.8%，其中以二重病原菌感染、三重病原菌感染及四重病原菌感染所占比例較高，見表2。

3討論與結(jié)論

蜜蜂的細(xì)菌性疾病具有感染率高、死亡率高、危害程度嚴(yán)重、傳播迅速及持續(xù)時(shí)間長等特點(diǎn)。蜜蜂根據(jù)發(fā)病特點(diǎn)蜜蜂的細(xì)菌性疾病主要包括幼蟲的細(xì)菌病和成峰的細(xì)菌病。蜜蜂的細(xì)菌性疾病對(duì)養(yǎng)蜂業(yè)的危害較大，對(duì)其流行病調(diào)查具有重要的意義。2019—2021年采集病死的蜜蜂樣品423份中分離得到幼蟲芽孢桿菌、蜂房蜜蜂球菌、屎腸球菌、蜜蜂螺旋體病、蜜蜂敗血桿菌、蜂房哈夫尼菌等6種細(xì)菌性疾病，其中以蜜蜂敗血桿菌、蜂房哈夫尼菌、幼蟲芽孢桿菌蜂房蜜蜂球菌4種病原菌為流行的主要病原菌，6種細(xì)菌性疾病呈現(xiàn)混合感染，以二重病原菌感染、三重病原菌感染及四重病原菌感染所占比例較高，分別占采集樣品的14.2%、12.3%、13.5%。說明該地區(qū)蜜蜂細(xì)菌性病較嚴(yán)重，呈現(xiàn)多重感染。應(yīng)該引起重視，注意蜜蜂細(xì)菌病的綜合防控。

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