陳霞 胡世君 黃信

摘要：為了解重慶部分地區(qū)牛輪狀病毒病的流行情況，從黔江、長(zhǎng)壽、涪陵等10個(gè)地區(qū)共采集牛血液樣本184份并分離血清，應(yīng)用ELISA方法進(jìn)行牛輪狀病毒病抗體檢測(cè)。結(jié)果表明：重慶部分地區(qū)總陽(yáng)性率為48.34%，牛輪狀病毒病流行較為普遍。從地區(qū)分析，涪陵地區(qū)陽(yáng)性率最高，為62.5%，榮昌最低，為37.5%;從品種分析：西門塔爾牛陽(yáng)性率最高，為58.82%，雜交牛最低，為40%;從年齡分析：3～4歲牛陽(yáng)性率高于其他年齡，為51.5%，1～2歲牛最低，為38.5%;從性別分析：母牛陽(yáng)性率高于公牛，分別為50.70%、46.8%。

關(guān)鍵詞：牛輪狀病毒;ELISA;病原流行病學(xué)調(diào)查

中圖分類號(hào)：S858.23文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Bdoi：10.3969/j.issn.2096-3637.2021.23.002

Sero-epidemiological Investigation of Bovine Rotavirus in Chongqing

CHEN Xia1，HU Shijun2，HUANG Xin2

（1.Chongqing Yubei District Animal Husbandry and Fishery Station，Chongqing 401120，China;2.School of Animal Sciences，Southwest University，Chongqing 402460，China ）

Abstract：In order to understand the prevalence of bovine rotavirus in some areas of Chongqing，184 bovine blood samples were collected from 10 areas including Qianjiang River，Changshou and Fuling District，and Sera were isolated. The results showed that the total positive rate was 48.34% in some areas of chongqing，and bovine rotavirus was prevalent. The positive rate in Fuling District was the highest （62.5%），the lowest （37.5%），the highest （58.82%），the lowest （40%），the highest （51.5%），the lowest （58.82%），the lowest （40%），and the highest （51.5%），the lowest （51.5%），the lowest （40%），the lowest （32.5%），respectively，the positive rate of cow was 50.70% and 46.8%，respectively.

Keywords：bovine rotavirus，elisa，etiological epidemiological investigation

0引言

牛輪狀病毒（Bovine Rotavirus，BRV）又稱犢牛腹瀉病毒（Calf Diarrheal Virus），屬于呼腸孤病毒科（Reoviridae）輪狀病毒屬（Rotavirus）[1-2]，1968年美國(guó)Mebus[3]等人用電鏡從新生犢牛腹瀉糞便中檢測(cè)到輪狀病毒，并命名為NCDV株（Nebraska Calfdiarrhea Virus，NCDV）。隨后，歐美各國(guó)及澳大利亞等國(guó)都發(fā)現(xiàn)輪狀病毒引起的犢牛腹瀉。輪狀病毒是引起犢牛腹瀉的重要病原之一，高達(dá)50%的新生犢牛腹瀉與輪狀病毒感染有關(guān)。其中1～7日齡的新生犢牛最易感，最早的發(fā)生于出生后12h內(nèi)的犢牛，最遲的發(fā)生在2～3周齡，而成年牛呈隱性感染。感染的犢牛以突然下痢、嘔吐為主要臨床特征，糞便呈黃色或淡黃綠色，有時(shí)混有血液，嚴(yán)重時(shí)會(huì)造成脫水、酸堿平衡紊亂而不能起立，經(jīng)1～2 d后死亡。

在BRV污染的牛場(chǎng)中，病毒是長(zhǎng)期存在的，牛會(huì)反復(fù)感染該病毒，而現(xiàn)在還沒(méi)有輪狀病毒的特效藥，且該病毒極易與冠狀病毒、隱抱子蟲、致病性大腸桿菌混合感染，牛群一旦發(fā)病，病情復(fù)雜，導(dǎo)致腹瀉愈發(fā)嚴(yán)重，又難以治療，發(fā)病率和死亡率會(huì)大幅度升高，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。不論是散戶養(yǎng)殖還是規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)的養(yǎng)牛數(shù)量都在不斷增加，如果沒(méi)有及時(shí)了解該病毒在本地的流行情況、制定免疫程序和有效的防控措施，輪狀病毒將不斷擴(kuò)散，給養(yǎng)牛業(yè)造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。

為進(jìn)一步了解重慶部分地區(qū)牛輪狀病毒病的發(fā)病及流行情況，降低發(fā)病率，減少犢牛死亡帶來(lái)的經(jīng)濟(jì)損失，故本試驗(yàn)在重慶市黔江、長(zhǎng)壽、涪陵等10個(gè)地區(qū)采集牛血清樣本，在采集樣本時(shí)考慮地區(qū)分布、年齡、性別等因素，使其具有代表性，并對(duì)牛血清樣本進(jìn)行輪狀病毒ELISA抗體檢測(cè)，為重慶市牛輪狀病毒的感染、流行情況及制定有效的防控措施提供科學(xué)依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

（1）被檢血清。從重慶市黔江、長(zhǎng)壽、涪陵、梁平、巫山、榮昌、云陽(yáng)、開州、江津、潼南等地區(qū)分別采集牛血液（均未免疫過(guò)牛輪狀病毒病疫苗）樣本184 份，分離血清，置-20 ℃保存待檢。

（2）主要試劑。牛輪狀病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：201712），購(gòu)于上海酶聯(lián)生物科技有限公司。

1.2BRVELISA抗體檢測(cè)方法

（1）樣品及試劑準(zhǔn)備。樣品準(zhǔn)備：將待檢血清從-20℃冰箱中拿出靜置30 mm，用試劑盒樣本稀釋液做5倍稀釋，即待檢血清10 uL中加入樣本稀釋液40 uL。對(duì)照血清不稀釋。洗滌緩沖液準(zhǔn)備：用蒸餾水20倍稀釋，即1份洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

（2）操作步驟。嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

（3）結(jié)果判斷。按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔OD值平均值≥1.00;陰性對(duì)照孔OD值平均值≤0.15;臨界值計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15;陽(yáng)性判斷：樣品OD值>臨界值，樣品為陽(yáng)性;陰性判斷：樣品OD值<臨界值，樣品為陰性。

2結(jié)果與分析

2.1重慶不同地區(qū)BRVELISA抗體檢測(cè)結(jié)果

對(duì)重慶市黔江、長(zhǎng)壽、涪陵、梁平、巫山、榮昌、云陽(yáng)、開州、江津、潼南等10個(gè)地區(qū)采集的184份血清樣本進(jìn)行ELISA抗體檢測(cè)，結(jié)果陽(yáng)性率分別為50%、50%、62.5%、40%、45%、37.5%、50%、40%、50%、53.3%，總陽(yáng)性率為48.34%，見(jiàn)表1。

2.3重慶部分地區(qū)不同年齡段牛BRVELISA抗體檢測(cè)結(jié)果

ELISA抗體檢測(cè)結(jié)果顯示，0～1歲、1～2歲、2～3歲、3～4個(gè)年齡段的陽(yáng)性率分別為51.3%、38.4%、50%、51.5%，見(jiàn)表3。

2.4重慶部分地區(qū)不同性別牛BRVELISA抗體檢測(cè)結(jié)果

ELISA抗體檢測(cè)結(jié)果顯示，公牛、母牛陽(yáng)性率分別為46.8%和50.7%，見(jiàn)表4。

2.2重慶部分地區(qū)不同品種牛BRVELISA抗體檢測(cè)結(jié)果

ELISA抗體檢測(cè)結(jié)果顯示，黑白花奶牛、黃牛、雜交牛和西門塔爾牛陽(yáng)性率分別為50%、48%、40%、58.8%，見(jiàn)表2。

3分析與討論

（1）根據(jù)ELISA試驗(yàn)結(jié)果可以看出，重慶不同區(qū)縣的BRV抗體陽(yáng)性率不一致，在檢測(cè)的184份血清樣本中，BRV抗體陽(yáng)性血清89份，總陽(yáng)性率高達(dá)48%，來(lái)自不同地區(qū)的牛血清樣品陽(yáng)性率均在37.5%以上，其中以涪陵地區(qū)最高，為62.5%，黔江、長(zhǎng)壽、云陽(yáng)、江津、潼南地區(qū)的陽(yáng)性率也高達(dá)50%以上，榮昌地區(qū)的抗體陽(yáng)性率最低，為37.5%，以上結(jié)果表明，BRV在重慶大部分地區(qū)流行較為普遍，而采集的血清樣本均未進(jìn)行過(guò)BRV疫苗免疫，說(shuō)明眾多養(yǎng)牛場(chǎng)對(duì)該病未引起足夠的重視。在10個(gè)地區(qū)中，以榮昌地區(qū)的抗體陽(yáng)性率最低，可能與榮昌作為畜牧科技城，飼養(yǎng)管理方面比其他地區(qū)要求更高，疾病防制方面更重視有關(guān)。據(jù)彭巍等[4]、侯美如等[5]報(bào)道，該病易發(fā)生在潮濕地區(qū)，而重慶位于長(zhǎng)江上游地區(qū)，屬于亞熱帶季風(fēng)性濕潤(rùn)氣候，年平均降水量較豐富，年平均濕度70%～80%，重慶地區(qū)牛群易發(fā)生BRV感染，試驗(yàn)結(jié)果也表明重慶地區(qū)感染率較高。

（2）從ELISA抗體檢測(cè)結(jié)果看，黑白花奶牛和西門塔爾牛陽(yáng)性率最高，分別為50%、58.8%，以引進(jìn)的良種牛感染率最高，是否與外來(lái)品種，對(duì)本地毒株耐受力不強(qiáng)，易感性比本地品種高有關(guān)，需進(jìn)一步研究。從年齡分析，不同年齡牛的BRV抗體陽(yáng)性率不一樣，以3～4 歲年齡段的成年?？贵w陽(yáng)性率最高、其次為0～1歲、以1～2歲年齡段的牛最低。李鑫等報(bào)道[6]BRV以小牛最易感，在成年牛以隱性感染為主，被輪狀病毒污染過(guò)的牛場(chǎng)，病毒是長(zhǎng)期存在于牛群中，反復(fù)感染牛群，但并不發(fā)病，所以年齡越大，反復(fù)感染的次數(shù)越多，感染率越高，本試驗(yàn)牛群均未免疫過(guò)BRV疫苗，所以BRV抗體陽(yáng)性率隨年齡增長(zhǎng)而呈上升趨勢(shì)。而0～1歲的犢?？贵w陽(yáng)性率也較高，可能與母源抗體水平較高及犢牛易感性高有關(guān)。從年齡看，母牛的抗體陽(yáng)性率高于公牛，由于母牛主要作為繁殖種牛及奶牛，使用年限較長(zhǎng)，易造成BRV的反復(fù)感染，因而陽(yáng)性率較高。

（3）為減少BRV在牛群中的傳播所造成的經(jīng)濟(jì)損失，養(yǎng)牛場(chǎng)要加強(qiáng)飼養(yǎng)管理和完善綜合防制措施。對(duì)于懷孕母牛，在分娩前1～3個(gè)月時(shí)可接種牛輪狀病毒、冠狀病毒和大腸桿菌三聯(lián)苗，再在產(chǎn)前1月接種輪狀病毒油乳劑滅活苗進(jìn)行加強(qiáng)免疫，使母源抗體持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng)，更好的預(yù)防BRV引起犢牛腹瀉。在產(chǎn)后還應(yīng)加強(qiáng)母牛營(yíng)養(yǎng)，保證蛋白質(zhì)及鈣等微量元素的攝入，同時(shí)注意犢牛的防寒保暖、降溫去暑，保持干燥、通風(fēng)的環(huán)境，要勤換墊料，及時(shí)打掃，擠奶時(shí)要做好工具的消毒，以免造成交叉感染，防止?fàn)倥RV的發(fā)生。

4結(jié)束語(yǔ)

牛輪狀病毒病在重慶部分地區(qū)流行較為普遍，總陽(yáng)性率為48.34%。從地區(qū)分析：涪陵地區(qū)陽(yáng)性率最高，為62.5%，榮昌最低，為37.5%;從品種分析：西門塔爾牛陽(yáng)性率最高，為58.82%，雜交牛最低，為40%;從年齡分析：3～4歲牛陽(yáng)性率高于其他年齡，為51.5%，1～2 歲牛最低，為38.5%;從性別分析：母牛陽(yáng)性率高于公牛，分別為50.70%、46.8%。為減少BRV在牛群中的傳播所造成的經(jīng)濟(jì)損失，養(yǎng)牛場(chǎng)要加強(qiáng)飼養(yǎng)管理和完善綜合防制措施。

參考文獻(xiàn)

[1]蔡寶祥.家畜傳染病（第四版）[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2001.

[2]殷震，劉景華.動(dòng)物病毒學(xué)（第二版）[M].北京：科學(xué)出版社，1997.

[3]Matsuno，S.，Mukoyama，A. JGenVirol：Polypeptides of bovine rotavirus[J]. 1979，43（2）：309-316.

[4]彭巍，張君，徐尚榮.高寒牧區(qū)牦牛犢腹瀉病防治技術(shù)規(guī)程[J].青海畜牧獸醫(yī)雜志，2014，44（1）：22-23.

[5]侯美如，侯喜林，高俊峰，等.牛輪狀病毒雙抗體加薪ELISA檢測(cè)方法的建立[J].黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，23（3）：19-23.

[6]李鑫，常繼濤，劉海軍，等.我國(guó)A群輪狀病毒感染的血清流行病學(xué)調(diào)查[J].中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2010，32（9）：664-667.