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        肺癌組織中長鏈非編碼RNA-H19的表達與患者免疫功能、炎癥反應(yīng)因子及預(yù)后的關(guān)系

        2021-09-25 03:19:40周建英劉震天胡珍珍
        中國免疫學(xué)雜志 2021年16期
        關(guān)鍵詞:試劑盒肺癌炎癥

        周建英 劉震天 胡珍珍 肖 丹

        (江西省腫瘤醫(yī)院,南昌330029)

        肺癌是死亡率以及惡性程度較高的疾病,在歷 年臨床數(shù)據(jù)資料的統(tǒng)計中肺癌導(dǎo)致死亡的患者比率較其他癌癥顯著升高[1]。腫瘤細胞的增殖和不斷轉(zhuǎn)移是肺癌致死的主要原因,目前臨床對于肺癌的治愈率很低,多數(shù)肺癌患者在接受手術(shù)治療后會有疾病轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的可能,患者預(yù)后效果不佳[2-4]。長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,LncRNA)是一類生物學(xué)功能廣泛的RNA分子,研究指出其與多種腫瘤疾病的發(fā)展過程有關(guān),并且有些LncRNA分子能夠指導(dǎo)預(yù)后[5]。LncRNA-H19是一種被學(xué)術(shù)界廣泛研究的標(biāo)志基因[6]。ZHAO等[7]發(fā)現(xiàn),LncRNA-H19能夠在胚胎造血干細胞的發(fā)育過程中,抑制半胱氨酸水解酶活性,加速間質(zhì)細胞的活化。并有學(xué)者在實驗中證明,LncRNA-H19能夠結(jié)合let-7促進滋養(yǎng)層細胞的成球黏附,從而對子宮內(nèi)膜的修復(fù)過程產(chǎn)生作用[8-9]。有臨床試驗指出:LncRNA-H19的異常高表達與子宮內(nèi)膜癌、前列腺癌、肝癌和心腦血管疾病存在相關(guān)[10]。目前,未見LncRNA-H19與肺癌患者免疫功能、炎癥反應(yīng)因子以及臨床預(yù)后關(guān)系的相關(guān)研究,因此本研究就此展開探索并報道如下。

        1 資料與方法

        1.1 資料

        1.1.1 試驗材料 總RNA提取試劑盒(上海晨易生物科技有限公司)、流式細胞儀(上海勁馬實驗設(shè)備有限公司)、IL-1β ELISA試劑盒(上海博燦生物科技有限公司)、IL-6 ELISA試劑盒(上海紅榮微再生物工程技術(shù)有限公司)、TNF-α ELISA試劑盒(武漢華美生物科技有限公司)。

        1.1.2 一般資料 選擇2015年1月至2016年12月于我院進行手術(shù)治療的肺癌患者80例納入研究,收集患者術(shù)中切除的肺癌及其相應(yīng)的癌旁組織。其中Ⅰ期29例、Ⅱ期10例、Ⅲ期11例、Ⅳ期30例,男性50例、女性30例,患者的平均年齡為(48.77±10.34)歲,患者平均BMI為(21.35±2.31)kg/m2,統(tǒng)計患者的TNM分期,按照臨床規(guī)律將患者分為兩組:高期(Ⅲ~Ⅳ期)、低期(Ⅰ~Ⅱ期)。納入標(biāo)準(zhǔn):①經(jīng)病理確診為肺癌;②患者的一般臨床資料完整;③未合并其他腫瘤以及免疫系統(tǒng)疾病。排除標(biāo)準(zhǔn):①有過靶向藥物治療史;②有過放化療和免疫治療史患者;③合并其他臟器類疾病患者。80例參試者及其家屬皆充分了解試驗內(nèi)容并簽署知情同意書,本試驗通過我院倫理委員會批準(zhǔn)。

        1.2 方法

        1.2.1 qRT-PCR法檢測LncRNA-H19的表達 將收集的肺癌組織以及癌旁組織剪碎,于液氮中研磨??俁NA提取試劑盒提取總RNA。定量聚合酶鎖鏈反應(yīng)檢測LncRNA-H19的表達量,采用2-ΔΔCT法計算組織中LncRNA-H19的相對表達量。實驗步驟嚴(yán)格按照相關(guān)儀器和試劑盒的說明書進行。Ln‐cRNA-H19的相對表達量≥3為LncRNA-H19高表達組,<3為LncRNA-H19低表達組。

        1.2.2 免疫功能指標(biāo)檢測 以免疫比濁法對患者外周血清中IgA、IgG、IgM等免疫球蛋白指標(biāo)進行檢測;并在同一時間點采集患者的靜脈血,通過流式細胞儀對CD3+、CD4+、CD8+等T細胞亞群進行檢測,計算出CD4+/CD8+值。

        1.2.3 炎癥反應(yīng)因子檢測 采用ELISA法檢測肺癌患者血清中炎癥反應(yīng)因子IL-1β、IL-6以及TNF-α水平,操作按照IL-1β ELISA、IL-6 ELISA以及TNF-α ELISA試劑盒的操作說明進行。

        1.2.4 隨訪 采用門診復(fù)查及電話隨訪方式對80例肺癌患者進行術(shù)后跟蹤隨訪,了解其生存情況。每6個月隨訪1次,隨訪總周期36個月。

        1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS19.0軟件,計數(shù)資料用±s形式表示,組間比較采用T檢驗和卡平方檢驗,三組及以上組比較行F檢驗,Pearson相關(guān)性分析LncRNA-H19與免疫功能指標(biāo)和炎癥反應(yīng)因子的相關(guān)性,Cox單因素和多因素分析進行影響肺癌患者總生存期的相關(guān)因素分析,P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 LncRNA-H19在肺癌及癌旁組織中的表達LncRNA-H19在肺癌組織中的表達明顯高于癌旁組織(P<0.05),見圖1;Ⅰ期肺癌組織中LncRNA-H19的相對表達量(2.48±0.64)較癌旁組織中(1.13±0.56)高(P<0.05);由于Ⅱ期和Ⅲ期的表達水平基本一致,對兩期進行合并臨床階段分析,LncRNAH19在Ⅱ~Ⅲ期肺癌組織(3.84±0.72)以及Ⅳ期肺癌組織中(4.85±0.83)的相對表達量較癌旁組織中(1.13±0.56)顯著升高(F=15.342,P=0.001),見圖2。提示隨著肺癌組織的分期越高,LncRNA-H19的相對表達越高。

        圖1 肺癌及癌旁組織中LncRNA-H19的表達Fig.1 Expression of LncRNA-H19 in lung cancer and paracancerous tissues

        圖2 不同臨床分期肺癌及癌旁組織中LncRNA-H19的表達Fig.2 Expression of LncRNA-H19 in different clinical stages of lung cancer and adjacent tissues

        2.2 LncRNA-H19表達與臨床病理特征的關(guān)系LncRNA-H19的相對表達量與肺癌患者的性別、年齡以及腫瘤的組織學(xué)類型無關(guān)(P>0.05);而與患者的腫瘤大小、腫瘤分化程度、TNM分期以及淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05),見表1。

        表1 LncRNA-H19表達與臨床病理特征關(guān)系比較Tab.1 Comparison of relationship between LncRNA-H19 expression and clinicopathological characteristics

        2.3 LncRNA-H19表達與患者免疫功能的關(guān)系與LncRNA-H19低表達組比較,LncRNA-H19高表達組患者血清免疫球蛋白指標(biāo)含量顯著下降(P<0.05);且LncRNA-H19高表達組肺癌患者血清T細胞亞群的比例較LncRNA-H19低表達組患者顯著下降(P<0.05),見圖3、表2。提示肺癌組織中Lnc-RNA-H19的高表達常伴隨患者免疫功能的下降。

        表2 LncRNA-H19不同表達組患者T細胞亞群比較(±s,n=40)Tab.2 Comparison of T cell subsets in patients with different expression groups of LncRNA-H19(±s,n=40)

        表2 LncRNA-H19不同表達組患者T細胞亞群比較(±s,n=40)Tab.2 Comparison of T cell subsets in patients with different expression groups of LncRNA-H19(±s,n=40)

        Groups Low expression of LncRNA-H19 High expression of LncRNA-H19 T P CD3+(%)69.98±6.5450.23±5.465.2330.001 CD4+(%)38.77±3.2125.66±2.977.4210.001 CD8+(%)33.56±2.8522.31±1.786.5450.000 CD4+/CD8+(%)1.11±0.151.65±0.221.1010.012

        圖3 LncRNA-H19不同表達組患者免疫球蛋白指標(biāo)比較Fig.3 Comparison of immunoglobulin indexes in patients with different expression groups of LncRNA-H19

        2.4 LncRNA-H19表達與血清炎癥反應(yīng)因子的關(guān)系 與LncRNA-H19低表達組比較,LncRNA-H19高表達組肺癌患者血清中炎癥反應(yīng)因子表達顯著升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見圖4。提示肺癌組織中LncRNA-H19的高表達伴隨著機體炎癥反應(yīng)的加重。

        圖4 LncRNA-H19不同表達組患者血清炎癥反應(yīng)因子比較Fig.4 Comparison of serum inflammatory response fac?tors in patients with different expression groups of LncRNA-H19

        2.5 LncRNA-H19表達與免疫功能指標(biāo)和炎癥反應(yīng)因子的相關(guān)性 肺癌組織中LncRNA-H19的表達與患者血清免疫功能指標(biāo)IgA、IgG、IgM、CD3+、CD4+、CD8+呈負相關(guān)(r<0,P<0.05);與患者血清炎癥反應(yīng)因子IL-1β、IL-6和TNF-α的相對表達呈正相關(guān)(r>0,P<0.05),見表3。

        表3 LncRNA-H19表達與免疫功能指標(biāo)和炎癥反應(yīng)因子的相關(guān)性Tab.3 Correlation between LncRNA-H19 expression and immune function indexes and inflammatory re?sponse factors

        2.6 LncRNA-H19與患者預(yù)后情況分析 隨訪期間,80例研究對象中44例肺癌患者死亡,36例存活。隨訪期間無失訪患者。術(shù)后6個月時,Ln‐cRNA-H19低表達組與LncRNA-H19高表達組肺癌患者未出現(xiàn)死亡,生存率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);6個月后,LncRNA-H19高表達組肺癌患者的生存率較LncRNA-H19低表達組顯著降低(P<0.05);且隨著隨訪時間的延長,兩組生存率差異越大,見圖5。

        圖5 不同LncRNA-H19表達組肺癌患者生存率比較Fig.5 Comparison of survival rates of lung cancer pa?tients in different LncRNA-H19 expression groups

        2.7 影響肺癌患者總生存期的相關(guān)因素分析 單因素分析結(jié)果顯示:LncRNA-H19、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移以及腫瘤分期與肺癌患者的術(shù)后總生存期有關(guān),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),將以上因素納入Cox多因素分析發(fā)現(xiàn),LncRNA-H19高表達、肺癌組織高分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及TNM高分期是影響肺癌患者預(yù)后總生存期的獨立危險因素,見表4。

        表4 影響肺癌患者總生存期的相關(guān)因素分析Tab.4 Analysis of related factors affecting overall survival of lung cancer patients

        3 討論

        肺癌是臨床常見的一類惡性腫瘤,其致死率占癌癥致死率的10%以上,肺癌已經(jīng)漸漸成為危害人們生命健康的一大殺手[11-13]。近年來肺癌發(fā)病率正逐年攀升。2017年的相關(guān)報道指出,外科手術(shù)和免疫治療技術(shù)的成熟為絕大部分癌癥患者帶來福音,但就肺癌手術(shù)的預(yù)后仍然值得關(guān)注,相關(guān)數(shù)據(jù)顯示:肺癌患者術(shù)后3年總生存率在10%以下,術(shù)后無病生存率更低[14-15]。因此,了解肺癌的發(fā)生過程及其具體的分子機制,探索新型腫瘤分子標(biāo)志物對于改善患者預(yù)后有著重要的意義。有報道稱Ln‐cRNA-H19在患者腫瘤組織中的表達出現(xiàn)異常,其能夠通過特異性吸附相關(guān)miRNA,影響相關(guān)酶類的合成,從而發(fā)揮其生物學(xué)效能;也有試驗證明,Ln‐cRNA-H19在腫瘤組織中的表達能夠提示患者的預(yù)后,這可能為治療肺癌的靶向用藥治療方案提供新的思路[16-18]。因此本試驗就LncRNA-H19在肺癌組織中的表達以及與患者免疫功能、炎癥反應(yīng)因子以及臨床預(yù)后關(guān)系展開詳細的研究。

        本研究以80例肺癌患者為研究對象,通過檢測LncRNA-H19表達、患者血清免疫球蛋白、T細胞亞群、炎癥反應(yīng)因子表達。比較LncRNA-H19在肺癌及癌旁組織中的表達及其與肺癌病理特征、免疫功能、炎癥反應(yīng)因子和預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn)Ln‐cRNA-H19在肺癌組織中的相對表達明顯高于癌旁組織;且隨著肺癌組織的分期越高,LncRNA-H19的相對表達越高,提示LncRNA-H19在肺癌的疾病發(fā)展過程中起著關(guān)鍵性的作用。相較于LncRNA-H19低表達組,LncRNA-H19高表達組肺癌患者血清中免疫球蛋白指標(biāo)IgA、IgG、IgM和T細胞亞群的比例顯著下降,血清中炎癥反應(yīng)因子IL-1β、IL-6以及TNF-α的含量顯著升高,說明肺癌組織中LncRNAH19的表達可能是通過影響患者的免疫功能以及直接或者間接地參與了肺癌患者體內(nèi)的炎癥反應(yīng)從而進一步推進該疾病的進程[19]。肺癌組織中Ln‐cRNA-H19的表達與患者血清免疫功能指標(biāo)IgA、IgG、IgM、CD3+、CD4+、CD8+負相關(guān);肺癌組織中Ln‐cRNA-H19的表達與患者血清炎癥反應(yīng)因子IL-1β、IL-6和TNF-α的相對表達正相關(guān),這一結(jié)果進一步證明了LncRNA-H19負向影響機體免疫功能以及正向促進炎癥反應(yīng)相關(guān)因子的增加從而促進炎癥反應(yīng)的作用。提示肺癌組織中LncRNA-H19的高表達往往伴隨著患者免疫功能的下降以及機體炎癥反應(yīng)的加重。LncRNA-H19高表達肺癌患者的術(shù)后生存率較LncRNA-H19低表達患者顯著降低(P<0.05)。死亡患者肺癌組織中LncRNA-H19的相對表達(2.77±0.85)較存活患者(1.75±0.50)顯著升高(P<0.05),說明LncRNA-H19的高表達會導(dǎo)致患者不良預(yù)后的發(fā)生。多因素分析證實LncRNA-H19高表達、肺癌組織高分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及TNM高分期是影響肺癌患者預(yù)后總生存期的獨立危險因素。雖然以上結(jié)果證實LncRNA-H19在肺癌組織中的表達與免疫功能、炎癥反應(yīng)因子以及預(yù)后確有關(guān)系,但對LncRNA-H19進行干擾能否作為治療肺癌的臨床新方案尚需相關(guān)動物試驗進一步明確。

        綜上所述,LncRNA-H19在肺癌組織中的表達增加,其高表達伴隨患者免疫功能的下降和炎癥因子的增加,并且能夠提示患者的不良預(yù)后。

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