朱克春 馬 萍

（成都中醫(yī)藥大學(xué)，成都611130）

炎癥是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，是機(jī)體對(duì)組織損傷或感染而產(chǎn)生的防御反應(yīng)，炎癥反應(yīng)的發(fā)生與機(jī)體內(nèi)炎癥相關(guān)細(xì)胞有關(guān)，并伴隨多種化學(xué)物質(zhì)的合成和釋放[1］。研究表明，多種疾病如心臟病、關(guān)節(jié)炎、糖尿病、膿毒癥等都與炎癥有關(guān)[2］。炎癥反應(yīng)過(guò)程中，巨噬細(xì)胞作用廣泛，巨噬細(xì)胞是一種固有免疫細(xì)胞，其可以通過(guò)模式識(shí)別受體介導(dǎo)天然免疫應(yīng)答，影響宿主相關(guān)炎癥因子如IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-2和炎癥介質(zhì)NO 的分泌，促進(jìn)NO 合酶誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）的表達(dá)[3］。脂多糖（lipopolysaccharides，LPS）是細(xì)胞內(nèi)毒素的有效成分，是激活機(jī)體炎癥反應(yīng)的重要誘導(dǎo)因子[4］。蒺藜又名白蒺藜、刺蒺藜，是植物蒺藜的干燥成熟果實(shí)，其含有多種有效成分，其中以皂苷類(lèi)研究最多[5］。蒺藜總皂苷有抗衰老、調(diào)節(jié)血脂、抗腫瘤等功效[6］。研究顯示，蒺藜總皂苷還具有消炎作用，其可以抑制心肌缺血再灌注、動(dòng)脈粥樣硬化等疾病發(fā)生中炎癥因子的釋放[7］。Toll 樣受體4（toll-like receptor-4，TLR4）是一個(gè)與炎癥有關(guān)的調(diào)控因子，其是LPS激活誘導(dǎo)的炎癥信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)受體，TLR4表達(dá)水平升高后促進(jìn)炎癥反應(yīng)[8］。目前對(duì)蒺藜總皂苷在LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞炎癥因子釋放中的作用還不十分明確。本次實(shí)驗(yàn)以巨噬細(xì)胞RAW264.7 作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，探討蒺藜總皂苷對(duì)LPS 條件下巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)中的作用和機(jī)制，為明確蒺藜總皂苷抗炎作用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料 Lipofectamine 2000購(gòu)自美國(guó)Invitrogen；巨噬細(xì)胞RAW264.7 購(gòu)自上海復(fù)祥生物科技有限公司；蒺藜總皂苷購(gòu)自西安昌岳生物科技有限公司；IL-6 檢測(cè)試劑盒、IL-1β 檢測(cè)試劑盒購(gòu)自深圳市科潤(rùn)達(dá)生物工程有限公司；pcDNA3.1-TLR4 由漢恒生物科技（上海）有限公司構(gòu)建；TNF-α檢測(cè)試劑盒、IL-2 檢測(cè)試劑盒購(gòu)自廣東體必康生物科技有限公司；LPS 購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司；NO 含量檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上海索橋生物科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 CCK-8 方法檢測(cè)蒺藜總皂苷對(duì)巨噬細(xì)胞增殖活性影響 巨噬細(xì)胞按照1×106個(gè)/孔接種到96孔細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)，每個(gè)孔內(nèi)添加100 μl 的細(xì)胞懸浮液，培養(yǎng)2 h 后，把上清溶液棄掉，加入含有蒺藜總皂苷濃度為0、10、20、40、80、160 μg/ml 的細(xì)胞培養(yǎng)液各100 μl，放在37℃的培養(yǎng)箱內(nèi)孵育培養(yǎng)24 h后，取出培養(yǎng)板，在每個(gè)孔內(nèi)分別加入10 μl的CCK-8溶液，放在37℃繼續(xù)培養(yǎng)2 h。酶標(biāo)儀測(cè)定450 nm的OD 值。計(jì)算細(xì)胞存活率。細(xì)胞存活率（%）=實(shí)驗(yàn)組OD值/對(duì)照組OD值×100%。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)分組處理 巨噬細(xì)胞分成Control、LPS、GSTT-L、GSTT-M、GSTT-H 組，Control 組為空白對(duì)照細(xì)胞；LPS 組在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)用含有LPS 濃度為1 μg/ml 的細(xì)胞培養(yǎng)液處理培養(yǎng)；CCK-8 結(jié)果表明，10、20、40 μg/ml濃度的蒺藜總皂苷對(duì)巨噬細(xì)胞無(wú)毒性，因此選擇10、20、40 μg/ml濃度的蒺藜總皂苷處理巨噬細(xì)胞。GSTT-L、GSTT-M、GSTT-H組細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)以含有蒺藜總皂苷濃度為10、20、40 μg/ml和LPS濃度為1 μg/ml的細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)。

1.2.3 ELISA 法檢測(cè)IL-1β、IL-6、TNF- α、IL-2 水平 取已經(jīng)培養(yǎng)24 h 后的Control、LPS、GSTT-L、GSTT-M、GSTT-H組細(xì)胞，連同培養(yǎng)液一起轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，以4℃、12000 g離心10 min，收集上清溶液，用ELISA方法檢測(cè)培養(yǎng)液上清中IL-6、IL-1β、TNF-α、IL-2 含量，步驟完全參照IL-6、IL-1β、TNF-α、IL-2 檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.2.4 Griess 法檢測(cè)NO 含量 取已經(jīng)培養(yǎng)24 h 后的Control、LPS、GSTT-L、GSTT-M、GSTT-H 組細(xì)胞，連同培養(yǎng)液一起轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，以4℃、12000 g離心10 min，收集上清溶液，按照NO 含量檢測(cè)試劑盒測(cè)定NO的含量。

1.2.5 Western blot 檢測(cè)iNOS、TLR4 蛋白表達(dá) 取已經(jīng)培養(yǎng)24 h 后的Control、LPS、GSTT-L、GSTT-M、GSTT-H 組細(xì)胞，在細(xì)胞內(nèi)添加RIPA 試劑（含有PMSF），12000 g 離心10 min，吸取上清用于BCA 蛋白定量檢測(cè)。按照20 μg/孔的蛋白上樣量進(jìn)行SDS-PAGE 電泳，選擇10% 的分離膠以及5% 的濃縮膠進(jìn)行電泳，首先以90 V 的電壓電泳約30 min 后，此時(shí)可觀(guān)察到溴酚藍(lán)染料進(jìn)入到分離膠，把電壓調(diào)整為110 V 繼續(xù)電泳，肉眼觀(guān)察溴酚藍(lán)進(jìn)入到凝膠的底部以后，關(guān)閉電源。取出分離膠，將NC 膜裁剪成合適大小，浸泡在轉(zhuǎn)移緩沖液中平衡10 min。以50 V 的電壓轉(zhuǎn)膜，轉(zhuǎn)膜放在冰上進(jìn)行。將NC 膜取出，放在5% 脫脂奶粉溶液中封閉2 h，然后將NC 膜置于TBST 溶液中漂洗3 次，放在一抗稀釋液（iNOS抗體以1∶800 稀釋?zhuān)琓LR4 抗體以1∶1000 稀釋?zhuān)┲?，?℃過(guò)夜反應(yīng)，經(jīng)TBST 漂洗以后，放在1∶2000 稀釋的二抗溶液中，室溫結(jié)合2 h。ECL顯色試劑盒顯色，以ScnImage 分析條帶的灰度值。GAPDH 作為參照，分析計(jì)算iNOS、TLR4蛋白表達(dá)水平。

1.2.6 TLR4對(duì)蒺藜總皂苷影響LPS條件下巨噬細(xì)胞分泌炎癥因子和NO 的作用檢測(cè) 巨噬細(xì)胞密度為60% 時(shí)，用Lipofectamine 2000將pcDNA3.1-TLR4和pcDNA3.1分別轉(zhuǎn)染到細(xì)胞內(nèi)，以含有蒺藜總皂苷濃度為20 μg/ml 和LPS 濃度為1 μg/ml 的細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)，命名為GSTT-M+TLR4和GSTT-M+Vector組。細(xì)胞培養(yǎng)24 h后，CCK-8檢測(cè)增殖，ELISA法測(cè)定IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-2 水平，Griess 法檢測(cè)NO 含量，Western blot 檢 測(cè)iNOS、TLR4 蛋 白 表 達(dá)，步 驟 同1.2.5。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS21.0 軟件分析，計(jì)量資料用±s表示，兩組數(shù)據(jù)間比較用t檢驗(yàn)，多組差異比較用單因素方差，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 蒺藜總皂苷對(duì)巨噬細(xì)胞增殖活性影響 見(jiàn)表1，與0 μg/ml 蒺藜總皂苷處理的細(xì)胞比較，10、20、40 μg/ml 的蒺藜總皂苷處理后巨噬細(xì)胞存活率無(wú)顯著性變化；80、160 μg/ml 蒺藜總皂苷處理后的巨噬細(xì)胞存活率降低。綜合考慮，選擇對(duì)巨噬細(xì)胞無(wú)毒性的蒺藜總皂苷作后續(xù)實(shí)驗(yàn)，因此選擇10、20、40 μg/ml濃度的蒺藜總皂苷處理巨噬細(xì)胞。

表1 蒺藜總皂苷處理后巨噬細(xì)胞存活率變化（±s，μg/ ml，%）Tab.1 Changes of survival rate of macrophages treated with gross saponins of tribulus terrestris （±s，μg/ ml，%）

表1 蒺藜總皂苷處理后巨噬細(xì)胞存活率變化（±s，μg/ ml，%）Tab.1 Changes of survival rate of macrophages treated with gross saponins of tribulus terrestris （±s，μg/ ml，%）

Note：Compared with 0 μg/ ml，1）P<0.05.

Action concentration of gross saponins of tribulus terrestris 010204080160 F P Survival rate 100.00±10.2399.52±9.6197.85±8.3295.23±8.7180.01±6.761）61.15±6.201）30.540<0.001

2.2 蒺藜總皂苷對(duì)LPS 條件下巨噬細(xì)胞增殖活性影響 見(jiàn)表2，與Control 組比較，LPS 組巨噬細(xì)胞存活率下降（P<0.05）；與LPS組比較，GSTT-L、GSTT-M、GSTT-H 組巨噬細(xì)胞存活率逐漸升高（P<0.05）。蒺藜總皂苷提高LPS條件下巨噬細(xì)胞增殖活性。

表2 蒺藜總皂苷處理后LPS 條件下巨噬細(xì)胞存活率（±s，%）Tab.2 Survival rate of macrophages treated with gross saponins of tribulus terrestris induced by LPS（±s，%）

表2 蒺藜總皂苷處理后LPS 條件下巨噬細(xì)胞存活率（±s，%）Tab.2 Survival rate of macrophages treated with gross saponins of tribulus terrestris induced by LPS（±s，%）

Note：Compared with control，1）P<0.05；compared with LPS，2）P<0.05；compared with GSTT-L，3）P<0.05；compared with GSTTM，4）P<0.05.

Groups Control LPS GSTT-L GSTT-M GSTT-H F P Survival rate 100.00±9.6256.35±5.721）68.94±6.332）80.65±4.202）3）93.51±6.682）3）4）62.506<0.001

2.3 蒺藜總皂苷對(duì)LPS 條件下巨噬細(xì)胞分泌IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-2 影響 見(jiàn)表3，與Control 組比較，LPS 組巨噬細(xì)胞分泌IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-2水平升高（P<0.05）；與LPS組比較，GSTT-L、GSTTM、GSTT-H組巨噬細(xì)胞分泌IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-2水平逐漸降低（P<0.05）。蒺藜總皂苷抑制LPS條件下巨噬細(xì)胞分泌炎癥因子。

表3 蒺藜總皂苷處理后LPS條件下巨噬細(xì)胞分泌IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-2水平（±s，pg/ ml）Tab.3 Levels of IL-1β，IL-6，TNF-α and IL-2 secreted by macrophages under LPS condition after treatment with gross saponins of tribulus terrestris（±s，pg/ ml）

表3 蒺藜總皂苷處理后LPS條件下巨噬細(xì)胞分泌IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-2水平（±s，pg/ ml）Tab.3 Levels of IL-1β，IL-6，TNF-α and IL-2 secreted by macrophages under LPS condition after treatment with gross saponins of tribulus terrestris（±s，pg/ ml）

Note：Compared with control，1）P<0.05；compared with LPS，2）P<0.05；compared with GSTT-L，3）P<0.05；compared with GSTT-M，4）P<0.05.

Groups Control LPS GSTT-L GSTT-M GSTT-H F P TNF-α 128.62±12.54246.53±15.581）193.51±12.032）163.87±12.912）3）135.22±10.462）3）4）127.552<0.001 IL-1β 203.61±20.87376.98±22.691）301.78±20.132）256.30±15.472）3）211.34±16.832）3）4）122.738<0.001 IL-635.20±2.69120.84±11.631）89.67±7.222）62.95±5.202）3）40.16±2.252）3）4）254.178<0.001 IL-28.25±0.9635.14±3.201）26.54±2.252）17.46±1.362）3）9.87±0.942）3）4）307.176<0.001

2.4 蒺藜總皂苷對(duì)LPS條件下巨噬細(xì)胞iNOS和NO水平影響 見(jiàn)圖1和表4，與Control組比較，LPS組巨噬細(xì)胞NO含量和iNOS蛋白水平均升高（P<0.05）；與LPS組比較，GSTT-L、GSTT-M、GSTT-H組巨噬細(xì)胞NO含量和iNOS蛋白水平逐漸降低（P<0.05）。蒺藜總皂苷抑制LPS條件下巨噬細(xì)胞合成NO。

圖1 Western blot檢測(cè)蒺藜總皂苷對(duì)LPS條件下巨噬細(xì)胞中iNOS蛋白表達(dá)影響Fig.1 Western blot was used to detect effect of gross sapo?nins of tribulus terrestris on iNOS protein expres?sion in macrophages under LPS condition

表4 蒺藜總皂苷處理后LPS條件下巨噬細(xì)胞NO含量和iNOS蛋白水平（±s）Tab.4 Contents of NO and iNOS protein in macrophages treated with gross saponins of tribulus terrestris（±s）

表4 蒺藜總皂苷處理后LPS條件下巨噬細(xì)胞NO含量和iNOS蛋白水平（±s）Tab.4 Contents of NO and iNOS protein in macrophages treated with gross saponins of tribulus terrestris（±s）

Note：Compared with control，1）P<0.05；compared with LPS，2）P<0.05；compared with GSTT-L，3）P<0.05；compared with GSTTM，4）P<0.05.

Groups Control LPS GSTT-L GSTT-M GSTT-H F P NO（μmol/L）12.04±1.0932.65±2.281）26.30±2.152）21.11±1.062）3）16.78±1.542）3）4）200.815<0.001 iNOS 0.20±0.030.75±0.071）0.46±0.052）0.33±0.042）3）0.21±0.032）3）4）215.208<0.001

2.5 蒺藜總皂苷對(duì)LPS條件下巨噬細(xì)胞中TLR4表達(dá)影響 見(jiàn)圖2和表5，與Control組比較，LPS組巨噬細(xì)胞TLR4蛋白水平升高（P<0.05）；與LPS組比較，GSTT-L、GSTT-M、GSTT-H組巨噬細(xì)胞TLR4蛋白水平逐漸降低（P<0.05）。蒺藜總皂苷抑制LPS條件下巨噬細(xì)胞中TLR4表達(dá)。

圖2 Western blot檢測(cè)蒺藜總皂苷對(duì)LPS條件下巨噬細(xì)胞中TLR4蛋白表達(dá)影響Fig.2 Western blot was used to detect effect of gross sapo?nins of tribulus terrestris on TLR4 protein expres?sion in macrophages under LPS condition

表5 蒺藜總皂苷處理后LPS條件下巨噬細(xì)胞TLR4蛋白水平（±s）Tab.5 TLR4 protein levels of macrophages treated with gross saponins of tribulus terrestris under LPS condition（±s）

表5 蒺藜總皂苷處理后LPS條件下巨噬細(xì)胞TLR4蛋白水平（±s）Tab.5 TLR4 protein levels of macrophages treated with gross saponins of tribulus terrestris under LPS condition（±s）

Note：Compared with control，1）P<0.05；compared with LPS，2）P<0.05；compared with GSTT-L，3）P<0.05；compared with GSTT-M，4）P<0.05.

Groups Control LPS GSTT-L GSTT-M GSTT-H F P TLR40.23±0.040.96±0.101）0.56±0.062）0.32±0.042）3）0.24±0.032）3）4）242.085<0.001

2.6 TLR4對(duì)蒺藜總皂苷影響LPS條件下巨噬細(xì)胞炎癥因子和NO合成作用 見(jiàn)圖3和表6，與GSTTM+Vector組比較，GSTT-M+TLR4組巨噬細(xì)胞TLR4、iNOS蛋白水平升高，細(xì)胞增殖活性下降，細(xì)胞分泌的IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-2增多，細(xì)胞合成的NO增多（P<0.05）。TLR4逆轉(zhuǎn)蒺藜總皂苷對(duì)LPS條件下巨噬細(xì)胞炎癥因子和NO合成影響。

表6 蒺藜總皂苷處理后LPS條件下巨噬細(xì)胞存活率和分泌IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-2水平以及NO水平和TLR4、iNOS蛋白水平（±s）Tab.6 Survival rate and secretion levels of IL-1β，IL-6，TNF-α，IL-2，NO level and TLR4，iNOS protein levels with TLR4 up-regulated in gross saponins of tribulus terrestris treated macrophages under LPS condition（±s）

表6 蒺藜總皂苷處理后LPS條件下巨噬細(xì)胞存活率和分泌IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-2水平以及NO水平和TLR4、iNOS蛋白水平（±s）Tab.6 Survival rate and secretion levels of IL-1β，IL-6，TNF-α，IL-2，NO level and TLR4，iNOS protein levels with TLR4 up-regulated in gross saponins of tribulus terrestris treated macrophages under LPS condition（±s）

Note：Compared with GSTT-M+Vector，1）P<0.05.

Groups GSTT-M+Vector GSTT-M+TLR4 t P Survival rate（%）100.00±11.2572.36±7.141）6.223<0.001 TNF-α（pg/ml）160.52±13.47210.59±16.721）6.996<0.001 IL-1β（pg/ml）258.94±17.78325.68±30.641）5.652<0.001 IL-6（pg/ml）63.05±4.4789.66±8.861）8.044<0.001 IL-2（pg/ml）18.94±1.5634.82±2.371）16.790<0.001 NO（μmol/L）22.04±1.1729.65±2.761）7.616<0.001 iNOS 0.38±0.060.77±0.081）11.700<0.001 TLR40.31±0.060.68±0.071）12.040<0.001

圖3 Western blot檢測(cè)上調(diào)TLR4對(duì)蒺藜總皂苷影響LPS條件下巨噬細(xì)胞中TLR4、iNOS蛋白表達(dá)作用Fig.3 Western blot analysis TLR4 and iNOS levels with TLR4 up-regulated in gross saponins of tribulus terrestris treated macrophages under LPS condition

3 討論

巨噬細(xì)胞參與人體免疫反應(yīng)，其在受到外界因素刺激以后，可以產(chǎn)生并釋放大量的炎癥因子，這些炎癥因子參與機(jī)體免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)過(guò)程，巨噬細(xì)胞本身具有多種功能，能夠影響各種感染性原因引起的炎癥性疾病，巨噬細(xì)胞通過(guò)引起免疫-炎癥反應(yīng)將病原體排除，調(diào)控機(jī)體問(wèn)題[9］。LPS是常見(jiàn)的炎癥誘導(dǎo)因子，其可以激活組織和細(xì)胞炎癥反應(yīng)，誘導(dǎo)炎癥因子釋放[4］。NO是存在于機(jī)體內(nèi)的炎癥介質(zhì)，其在炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用[10］。iNOS是機(jī)體內(nèi)合成NO的重要蛋白酶，主要在巨噬細(xì)胞中表達(dá)，當(dāng)巨噬細(xì)胞受到LPS等刺激以后，iNOS水平會(huì)大大增加，進(jìn)而合成大量的NO，介導(dǎo)炎癥反應(yīng)[11］。研究表明，LPS處理以后的巨噬細(xì)胞增殖活性下降，細(xì)胞炎癥因子釋放水平增加[12-13］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，LPS刺激以后的巨噬細(xì)胞增殖能力下降，細(xì)胞分泌的IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-2增多，細(xì)胞合成的NO增多，細(xì)胞中iNOS水平增加，提示LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞炎癥損傷，這為后續(xù)實(shí)驗(yàn)奠定基礎(chǔ)。

蒺藜被稱(chēng)為“草中名藥”，是蒺藜科植物蒺藜的干燥果實(shí)，具有名目止癢、活血祛風(fēng)等功效，蒺藜有多種活性成分，如生物堿、黃酮類(lèi)、皂苷類(lèi)、無(wú)機(jī)鹽、脂肪酸等等，其中皂苷類(lèi)的研究最為廣泛[6］?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，蒺藜總皂苷有心血管保護(hù)作用，其可以軟化血管、調(diào)節(jié)血脂，對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化有治療和預(yù)防作用[7］。蒺藜總皂苷還具有消炎、抗菌、抗氧化等功效[14］。蒺藜總皂苷處理后的腦缺血大鼠腦組織中炎癥因子表達(dá)水平明顯下降[15］。本實(shí)驗(yàn)用蒺藜總皂苷處理LPS條件下巨噬細(xì)胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，蒺藜總皂苷能夠提高LPS條件下巨噬細(xì)胞增殖活性，減少細(xì)胞釋放IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-2，抑制細(xì)胞產(chǎn)生NO，提示蒺藜總皂苷具有抗巨噬細(xì)胞炎癥的作用。

TLR4是Toll樣受體家族成員之一，其是Ⅰ型跨膜受體蛋白，包含胞內(nèi)區(qū)、跨膜段、胞外區(qū)共3個(gè)部分，其基因定位在9q染色體上，在巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等多種細(xì)胞中表達(dá)[16-17］。TLR4有多種生物學(xué)作用，與免疫反應(yīng)、炎癥、細(xì)胞生長(zhǎng)等有關(guān)，參與膿毒癥、糖尿病、腫瘤等多種疾病進(jìn)展[18-20］。TLR4參與LPS介導(dǎo)的細(xì)胞炎癥，其是LPS激活信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)受體，能夠調(diào)控TNF-α、IL-6等炎癥因子的表達(dá)[21-22］。本實(shí)驗(yàn)顯示，LPS處理后的巨噬細(xì)胞中TLR4的表達(dá)水平升高，并且蒺藜總皂苷可以降低LPS條件下巨噬細(xì)胞中TLR4的表達(dá)水平，提示蒺藜總皂苷作用機(jī)制可能與TLR4有關(guān)。本課題組進(jìn)一步通過(guò)細(xì)胞轉(zhuǎn)染的方式提高巨噬細(xì)胞中TLR4的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，上調(diào)TLR4可以逆轉(zhuǎn)蒺藜總皂苷對(duì)LPS條件下巨噬細(xì)胞炎癥因子分泌和NO合成的影響，這充分證明，蒺藜總皂苷通過(guò)下調(diào)TLR4的表達(dá)抑制LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞炎癥因子表達(dá)。

總而言之，蒺藜總皂苷可以減輕LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞炎癥，其通過(guò)下調(diào)TLR4的表達(dá)發(fā)揮抗炎癥作用，這為研究蒺藜總皂苷的藥理學(xué)作用提供了參考，為研究蒺藜總皂苷在炎癥反應(yīng)中的作用機(jī)制提供了資料。后續(xù)會(huì)繼續(xù)研究蒺藜總皂苷的具體靶向調(diào)控機(jī)制。