王燕英，陳海榮，張偉，李名蘭

急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)是一種較為嚴(yán)重心血管類疾病，起病急、病死率高，嚴(yán)重威脅患者生命健康[1-3]。目前臨床上治療AMI最有效的方法為經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療(percutaneous coronary intervention，PCI)，大大降低了患者的病死率，但PCI術(shù)后部分患者心肌得不到有效灌注，即出現(xiàn)冠狀動(dòng)脈無復(fù)流現(xiàn)象，顯著增加了不良心血管事件的發(fā)生率，對(duì)患者預(yù)后造成嚴(yán)重影響[4-5]。因此，尋找影響AMI患者PCI術(shù)后冠狀動(dòng)脈無復(fù)流現(xiàn)象發(fā)生的相關(guān)因素，對(duì)預(yù)防無復(fù)流現(xiàn)象發(fā)生，改善患者預(yù)后具有重要價(jià)值。微小RNA-374a-5p(miR-374a-5p)是一種內(nèi)源性小分子單鏈RNA，有研究顯示，miR-374a-5p與心血管疾病的發(fā)生密切相關(guān)[6]。白介素-10(interleukin-10，IL-10)是機(jī)體內(nèi)重要的一種細(xì)胞因子，研究顯示，IL-10在維持人體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定、免疫調(diào)節(jié)等方面發(fā)揮重要作用[7]。然而，有關(guān)miR-374a-5p、IL-10對(duì)AMI患者PCI術(shù)后冠狀動(dòng)脈無復(fù)流的影響尚不完全清楚。鑒于此，現(xiàn)分析AMI患者血漿miR-374a-5p、IL-10表達(dá)及其與PCI術(shù)后冠狀動(dòng)脈無復(fù)流的相關(guān)性，以期為臨床治療AMI提供參考，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2018年11月—2021年2月中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院附屬海口醫(yī)院全科醫(yī)學(xué)科和心血管內(nèi)科首次確診并行PCI的AMI患者300例為研究對(duì)象，根據(jù)PCI術(shù)后患者心肌梗死溶栓治療臨床試驗(yàn)(TIMI)血流分級(jí)[8]分為無復(fù)流組(TIMI<2級(jí))46例和復(fù)流組(TIMI≥2級(jí))254例。2組患者基線臨床資料比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過(倫審字2018-093號(hào))，患者及家屬自愿加入本項(xiàng)研究，并簽署知情同意書。

表1 PCI術(shù)后無復(fù)流組及復(fù)流組患者臨床資料比較例(%)]

1.2 病例選擇標(biāo)準(zhǔn) (1)納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)心血管病學(xué)分會(huì)制定的有關(guān)AMI的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[9]；②在本院行PCI治療者；③臨床資料完整者。(2)排除標(biāo)準(zhǔn)：①患有肝腎等功能不全者；②有心力衰竭、風(fēng)濕性心臟病史者；③患有惡性腫瘤者；④有PCI手術(shù)禁忌證者。

1.3 觀測(cè)指標(biāo)與方法 PCI術(shù)后清晨抽取患者空腹靜脈血5 ml， 抗凝離心后收集血漿，并置于-70℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.1 血漿miR-374a-5p表達(dá)檢測(cè)：取出待測(cè)血漿，用總RNA提取試劑盒(無錫百泰克生物技術(shù)有限公司，批號(hào)RP2401)并嚴(yán)格按照說明書順序提取總RNA，然后經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄得到cDNA(逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購自北京諾爾賽克科技有限公司，批號(hào)K1629)。以上述逆轉(zhuǎn)錄合成的cDNA為模板，進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測(cè)(qRT-PCR儀購自美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司，型號(hào)StepOne TM)。PCR反應(yīng)條件為：94℃、3 min，94℃、25 s，60℃、30 s，72℃、20 s，共35個(gè)循環(huán)。miR-374a-5p及內(nèi)參U6的引物序列見表2，均由北京寶日醫(yī)生物技術(shù)有限公司合成。采用2-△△CT法計(jì)算血漿miR-374a-5p相對(duì)表達(dá)水平。

表2 血漿miR-374a-5p引物序列

1.3.2 血漿IL-10表達(dá)檢測(cè)：采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血漿IL-10表達(dá)水平，試劑盒購自上海博湖生物科技有限公司，批號(hào)BH-H6445，操作步驟按照試劑盒說明書進(jìn)行。

2 結(jié) 果

2.1 血漿miR-374a-5p、IL-10表達(dá)比較 無復(fù)流組血漿miR-374a-5p表達(dá)高于復(fù)流組，血漿IL-10表達(dá)低于復(fù)流組(P<0.05)，見表3。

表3 PCI術(shù)后無復(fù)流組及復(fù)流組患者血漿miR-374a-5p、IL-10表達(dá)比較

2.2 血漿miR-374a-5p、IL-10表達(dá)的相關(guān)性 無復(fù)流組患者血漿miR-374a-5p與IL-10表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.453，P=0.000)。

2.3 血漿miR-374a-5p、IL-10對(duì)AMI患者PCI術(shù)后冠狀動(dòng)脈無復(fù)流發(fā)生的診斷價(jià)值 血漿miR-374a-5p、IL-10診斷AMI患者PCI術(shù)后冠狀動(dòng)脈無復(fù)流的曲線下面積(AUC)為0.847、0.790，截?cái)嘀捣謩e為1.15、2.85 pg/ml，此時(shí)對(duì)應(yīng)敏感度分別為0.826、0.692，特異度分別為0.803、0.788。血漿miR-374a-5p、IL-10聯(lián)合檢測(cè)診斷AMI患者PCI術(shù)后冠狀動(dòng)脈無復(fù)流的AUC為0.900，此時(shí)對(duì)應(yīng)敏感度和特異度分別為0.914、0.767，見表4和圖1。

表4 血漿miR-374a-5p、IL-10表達(dá)水平對(duì)AMI患者PCI術(shù)后冠狀動(dòng)脈無復(fù)流的診斷價(jià)值

圖1 血漿miR-374a-5p、IL-10表達(dá)水平對(duì)AMI患者

2.4 AMI患者PCI術(shù)后冠狀動(dòng)脈無復(fù)流發(fā)生的影響因素分析 以AMI患者PCI術(shù)后冠狀動(dòng)脈無復(fù)流是否發(fā)生為因變量(0=否，1=是)，血漿miR-374a-5p、IL-10表達(dá)水平為自變量，采用Logistic回歸分析，結(jié)果顯示：血漿IL-10高表達(dá)水平是AMI患者PCI術(shù)后冠狀動(dòng)脈無復(fù)流發(fā)生的保護(hù)因素(P<0.05)；血漿miR-374a-5p高表達(dá)水平是AMI患者PCI術(shù)后冠狀動(dòng)脈無復(fù)流發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)，見表5。

表5 AMI患者PCI術(shù)后冠狀動(dòng)脈無復(fù)流發(fā)生的相關(guān)影響因素分析

3 討 論

近年來隨著醫(yī)學(xué)水平的不斷提高，PCI術(shù)成為臨床治療AMI患者較常用且最為有效的治療手段，可提高AMI患者的生存率[10-12]。但研究發(fā)現(xiàn)，部分患者術(shù)后冠狀動(dòng)脈血流灌注較少或無血流再灌注，導(dǎo)致患者預(yù)后不良[13-14]。因此，探究影響AMI患者PCI術(shù)后冠狀動(dòng)脈無復(fù)流現(xiàn)象發(fā)生的相關(guān)因素，對(duì)提高AMI患者的臨床治療效果、降低PCI術(shù)后不良心血管事件的發(fā)生率具有重要意義。

miR-374a-5p是由22個(gè)核苷酸組成的一種非編碼RNA，其基因定位于人X染色體上[15-16]。其在肥胖、腫瘤、血栓形成、急性心肌梗死等疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。紀(jì)潤(rùn)璧等[17]研究發(fā)現(xiàn)，miR-374-5p可通過調(diào)控人胃組織來源間質(zhì)干細(xì)胞，來促進(jìn)影響胃癌增殖和遷移的重要分子，進(jìn)而在胃癌中發(fā)揮作用。王曉燕等[6]研究發(fā)現(xiàn)，miR-374在急性心肌梗死患者心肌組織中呈高表達(dá)，且可通過抑制IL-10的表達(dá)誘導(dǎo)患者心肌纖維化。本研究結(jié)果顯示，無復(fù)流組血漿miR-374a-5p表達(dá)水平較復(fù)流組高，與上述研究相似，提示血漿miR-374a-5p可能與AMI患者PCI術(shù)后冠狀動(dòng)脈無復(fù)流發(fā)生密切相關(guān)。

IL-10是一種主要由Th2細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞抑制因子，在抑制Th1細(xì)胞應(yīng)答、調(diào)控機(jī)體內(nèi)炎性反應(yīng)等方面發(fā)揮重要作用[18-19]。研究顯示，機(jī)體內(nèi)多種物質(zhì)可通過調(diào)控IL-10參與心血管等疾病的發(fā)生發(fā)展過程[20-21]。徐夢(mèng)云等[22]研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)AMI患者PCI術(shù)后進(jìn)行康復(fù)訓(xùn)練，患者IL-10水平升高。本研究結(jié)果顯示，無復(fù)流組血漿IL-10表達(dá)水平較復(fù)流組低，與上述研究結(jié)果類似，提示血漿IL-10可能參與AMI患者PCI術(shù)后冠狀動(dòng)脈無復(fù)流的發(fā)生。劉婧等[23]研究發(fā)現(xiàn)，深靜脈血栓患者血清中IL-10表達(dá)水平降低，而單個(gè)核細(xì)胞中miR-374a-5p表達(dá)水平升高，miR-374a-5p可能通過抑制IL-10表達(dá)進(jìn)而參與深靜脈血栓的形成。本研究發(fā)現(xiàn)，冠狀動(dòng)脈無復(fù)流患者血漿中miR-374a-5p、IL-10表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，提示血漿miR-374a-5p可能通過調(diào)控IL-10表達(dá)，二者共同參與冠狀動(dòng)脈無復(fù)流的發(fā)生及發(fā)展。本研究ROC曲線分析表明，血漿miR-374a-5p、IL-10均可作為診斷AMI患者PCI術(shù)后冠狀動(dòng)脈無復(fù)流發(fā)生的臨床指標(biāo)，但單獨(dú)應(yīng)用價(jià)值有限。因此本研究將二者聯(lián)合應(yīng)用，診斷冠狀動(dòng)脈無復(fù)流的AUC為0.900，提示二者聯(lián)合可能有利于更好的評(píng)估AMI患者PCI術(shù)后冠狀動(dòng)脈無復(fù)流現(xiàn)象。此外，Logistic回歸分析結(jié)果顯示，血漿miR-374a-5p、IL-10表達(dá)水平是影響AMI患者PCI術(shù)后冠狀動(dòng)脈無復(fù)流發(fā)生的相關(guān)因素，提示檢測(cè)AMI患者血漿miR-374a-5p、IL-10表達(dá)水平可為預(yù)測(cè)PCI術(shù)后冠狀動(dòng)脈無復(fù)流現(xiàn)象發(fā)生提供一定的臨床依據(jù)。

綜上所述，AMI患者PCI術(shù)后冠狀動(dòng)脈無復(fù)流發(fā)生者血漿中miR-374a-5p表達(dá)水平升高，IL-10表達(dá)水平降低，血漿miR-374a-5p、IL-10水平對(duì)AMI患者PCI術(shù)后冠狀動(dòng)脈無復(fù)流現(xiàn)象發(fā)生具有一定的臨床診斷價(jià)值，提示二者可作為AMI患者PCI術(shù)后冠狀動(dòng)脈無復(fù)流現(xiàn)象發(fā)生的潛在生物學(xué)指標(biāo)，但二者對(duì)冠狀動(dòng)脈無復(fù)流發(fā)生的具體作用機(jī)制還有待深入研究。

利益沖突：所有作者聲明無利益沖突

作者貢獻(xiàn)聲明

王燕英：設(shè)計(jì)研究方案，實(shí)施研究過程，論文撰寫；陳海榮：提出研究思路，分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)，論文審核；張偉：實(shí)施研究過程，資料搜集整理，論文修改；李名蘭：進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析