李志賢 禹婷婷 黃志明 李而珍 徐宇嘉 虞與理 王孝德*

（1賀州市動物疫病預防控制中心，廣西賀州 542899；2賀州市八步區(qū)賀街鎮(zhèn)農業(yè)農村服務中心，廣西賀州 542802）

豬瘟病毒（CSFV）、豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）、豬偽狂犬病毒 （PRV） 以及豬圓環(huán)病毒（PCV）一直是危害生豬養(yǎng)殖環(huán)節(jié)中的主要病原體，制約生豬養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展。當前4種疫病的臨床癥狀逐漸非典型化，繼發(fā)感染與混合感染現象普遍發(fā)生[1]。了解這4種病毒病的流行情況，可以給廣大養(yǎng)豬場（戶）制定合理的免疫程序、運用合理的豬病防控措施提供參考與幫助。在豬病防控中，關鍵是找出有效應對動物疫病預防控制的方法，從而凈化生物環(huán)境，提高生產效率，增加養(yǎng)殖戶效益。本研究對2018年3月至2019年12月在廣西賀州市無害化處理場采集的病死豬樣品進行了病原學調查并初步分析不同豬病的感染情況，以期為豬病的區(qū)域防控提供借鑒。

1 材料與方法

1.1 檢測樣品

2018年3月至2019年12月在賀州市無害化處理場共采集病死豬樣品352份。將當日新鮮的病死豬解剖，無菌采集腎臟、脾臟、肝臟、扁桃體、淋巴結、喉頭、肺臟等組織后，及時冷凍保存。

1.2 檢測儀器

ABI QuantStudio5熒光PCR儀

1.3 檢測試劑

豬瘟病毒通用型實時熒光RT-PCR檢測試劑盒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒通用型實時熒光RT-PCR檢測試劑盒、豬偽狂犬病毒實時熒光PCR檢測試劑盒、豬圓環(huán)病毒1型實時熒光PCR檢測試劑盒、豬圓環(huán)病毒2型實時熒光PCR檢測試劑盒、豬圓環(huán)病毒3型實時熒光PCR檢測試劑盒等。柱式DNA核酸提取試劑盒、柱式RNA核酸提取試劑盒。以上試劑盒均購自哈爾濱元亨生物藥業(yè)有限公司。

1.4 方法

采用熒光定量PCR方法對采集的病死豬樣品進行病毒核酸檢測。檢測步驟與結果依照試劑盒說明書進行操作和判定，記錄試驗結果并進行分析。

CSFV、PRRSV、PCV1結果判定：陽性對照CT值≤30并出現特定的擴增曲線，陰性對照無CT值并且無特定擴增曲線，試驗結果成立。被檢樣品CT值≤30并出現特定的擴增曲線判為陽性；被檢樣品30＜CT值＜37并出現特定的擴增曲線，判為可疑，需重新取樣進行結果判定，如仍是可疑，則判定為陽性；被檢樣品CT值≥37時，超過本方法檢測靈敏度范圍，判定為陰性。對于某些未呈現S型曲線，但樣品本底較高的應為陰性。

PRV結果判定：陽性對照CT值≤30并出現特定的擴增曲線，陰性對照無CT值并且無特定擴增曲線，試驗結果成立。被檢樣品CT值≤30并出現特定的擴增曲線判為PRV陽性；被檢樣品30＜CT值＜35并出現特定的擴增曲線，判為可疑，需重新取樣提取DNA，擴增后進行結果判定，如仍是可疑，則判定為陽性；被檢樣品CT值≥35時，超過本方法檢測靈敏度范圍，判定為陰性。對于某些未呈現S型曲線，但樣品本底較高的應判定為陰性。

PCV2/PCV3結果判定：陽性對照CT值≤30并出現特異性擴增曲線，陰性對照無CT值并且無特異性擴增曲線，試驗結果成立。被檢樣品若FAM熒光信號CT值≤30并出現特異性擴增曲線判為PCV2陽性；被檢樣品若HEX熒光信號CT值≤30并出現特異性擴增曲線判為PCV3陽性；被檢樣品30＜CT值＜36并出現特異性擴增曲線，判為可疑，需重檢測，如仍是可疑，則判定為陽性；被檢樣品CT值≥36時，超過本方法檢測靈敏度范圍，判定為陰性。對于某些未呈現S型曲線，但樣品本底較高的應判定為陰性。

2 結果與分析

2.1 不同病毒的檢測結果

由表1可知，除2018年一季度外，其他不同季度均存在4種病毒不同程度的感染。從2018—2019年2年的合計數據看，豬瘟病毒的感染陽性率為3.98%，豬繁殖與呼吸綜合征病毒的陽性率為27.84%，豬偽狂犬病毒的陽性率為2.56%，豬圓環(huán)病毒的陽性率為58.52%。豬圓環(huán)病毒1型的陽性率為3.41%，豬圓環(huán)病毒2型的陽性率為53.98%，豬圓環(huán)病毒3型的陽性率為7.95%。由此可知，豬圓環(huán)病毒的陽性率最高，且豬圓環(huán)病毒中2型的陽性率最高，為53.98%。其次是豬繁殖與呼吸綜合征病毒，感染率為27.84%，感染率最低的為豬偽狂犬病病毒，感染率為2.56%。說明賀州地區(qū)的養(yǎng)豬場（戶）中存在CSFV、PRRSV、PRV、PCV 4種病毒的散發(fā)性流行以及較高的豬圓環(huán)病毒2型的感染情況。

表1 不同病毒的檢測結果

2.2 4種病毒混合感染的統計結果

由表2可知，豬繁殖與呼吸綜合征病毒和豬圓環(huán)病毒混合感染率最高，為14.20%，豬瘟病毒和豬繁殖與呼吸綜合征病毒的混合感染率為0.57%，豬瘟病毒和豬圓環(huán)病毒的混合感染率為2.27%，豬繁殖與呼吸綜合征病毒和豬偽狂犬病毒的混合感染率為0.28%，豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬偽狂犬病毒和豬圓環(huán)病毒3種病毒的混合感染率為0.28%，豬瘟病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬偽狂犬病毒和豬圓環(huán)病毒4種病毒的混合感染率為0.57%，其余的混合感染率未檢出。說明賀州地區(qū)存在4種病毒混合感染的情況，以豬繁殖與呼吸綜合征病毒與豬圓環(huán)病毒的混合感染最突出。也存在少量的多種病毒同時感染的情況。

表2 4種病毒混合感染的統計結果

2.3 豬繁殖與呼吸綜合征病毒與豬圓環(huán)病毒不同基因型的混合感染統計結果

由表3可知，豬繁殖與呼吸綜合征病毒和豬圓環(huán)病毒2型的混合感染率最高，為13.64%，豬繁殖與呼吸綜合征病毒和豬圓環(huán)病毒1型、3型的混合感染率分別為1.14%、1.99%?？梢娯i繁殖與呼吸綜合征病毒和豬圓環(huán)病毒不同基因型的混合感染中以豬圓環(huán)病毒2型的混合感染為主。

表3 豬繁殖與呼吸綜合征病毒和豬圓環(huán)病毒不同基因型的混合感染統計結果

2.4 豬圓環(huán)病毒的不同基因型間的混合感染統計結果

由表4可知，豬圓環(huán)病毒1型、2型混合感染的感染率為2.56%，2型、3型混合感染的感染率為4.26%，其余豬圓環(huán)病毒1型與3型以及豬圓環(huán)病毒3個不同基因型間的混合感染情況未檢出。說明賀州市豬圓環(huán)病毒的感染情況中，存在一定程度2種亞型的混合感染。

表4 豬圓環(huán)病毒的不同基因型間的混合感染統計結果

3 討論

3.1 豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病等4種豬病以PCV2感染率最高

本次對2018—2019年賀州市無害化處理場進行采樣監(jiān)測共采集的352份病死豬樣品中，顯示PCV病毒核酸陽性檢出率最高，達58.52%。其中PCV2病毒核酸陽性檢出率最高，為53.98%。該市無害化處理場病死豬中檢測出的PCV2病毒核酸陽性率比王懷禹等[1]在2018—2019年對四川南充地區(qū)規(guī)?；i場的152份臨床病料樣品PCV2病原學檢出率（22.37%）和吳瑗等[2]在2007—2012年對浙江省及周邊地區(qū)不同豬場中豬圓環(huán)病毒2型的監(jiān)測結果PCV2陽性率（41.4%）都高。檢測結果與李玲等[3]于2008—2011年期間共采集福建省、江西省、廣東省、安徽省、浙江省、河南省、河北省、廣西壯族自治區(qū)、內蒙古自治區(qū)、上海市、江蘇省、山西省共12個?。ㄊ?、區(qū)）的健康豬群和發(fā)病豬群共452份樣品中，有354份樣品檢測為PCV2陽性，感染率高達78.3%的檢測結果要低；與蔣新華等[4]對2013—2017年采自江西地區(qū)的1 082份樣品進行檢測，有610份為PCV2陽性，總陽性率為56.4%的檢測結果接近。說明PCV2在我國養(yǎng)豬場的流行較普遍。豬圓環(huán)病毒病沒有被國家列為強制免疫病種，大多數養(yǎng)殖場（戶）不重視豬圓環(huán)病毒的免疫工作或免疫效果不好，導致疫病散發(fā)、多發(fā)。因此，養(yǎng)豬場應加強豬圓環(huán)病毒疫苗和免疫程序的研究，并加強豬場生物安全防護措施，減少PCV2病毒的感染。

3.2 PCV2與PRRSV的混合感染率最高

目前，在豬病流行日益復雜，多病原混合、繼發(fā)、協同感染普遍的情況下，賀州地區(qū)養(yǎng)豬場（戶）的豬群以PCV2與PRRSV的混合感染率最高。從4種病毒混合感染情況分析發(fā)現，該市存在多種病毒的混合感染，且混合感染類型較多，情況復雜，其中豬繁殖與呼吸綜合征病毒和豬圓環(huán)病毒2型混合感染較高，典型混合感染率為13.64%。與于學武[5]報道的對2008—2010年的2 813份發(fā)病豬群組織病料進行的病原學檢測，PCV2與PRRSV總體混合感染率達13.97%的結果相近；與宋玉慧[6]報道的2013—2015年采集來自河南各地區(qū)58個規(guī)模養(yǎng)殖場豬病料樣品146份，在混合感染中多以二重感染為主，其中CSFV與PRRSV混合感染率最高，占混合感染的7.53%的結果有一定差別。梁彭帥[7]報道PCV2與PRRSV混合感染后2種病毒在豬體內具有相互促進增殖的作用，而且協同抑制感染豬的免疫功能，因此二者的混合感染具有更強的致病性。因此在預防和診斷過程中要給予足夠的重視?！邦A防為主，防治結合”，養(yǎng)豬場需通過完善飼養(yǎng)管理、強化生物安全等措施預防和控制病原入侵，有效防止病毒的感染，保障養(yǎng)豬場健康發(fā)展。