陳朝暉

【摘要】目的：建立用高效液相色譜法測(cè)定重感靈片中安乃近的含量。方法：色譜柱為C18柱（Luna 250 mm×4.6 mm，5μm），流動(dòng)相為甲醇磷酸酯溶液（0.05 mol/l磷酸二氫鉀溶液，用1%磷酸調(diào)節(jié)pH值至4.5±0.5）（22：78），檢測(cè)波長(zhǎng)：275nm，流速：1.0 mL·min-1，柱溫：30℃。結(jié)果：安乃近在0.178 2～3.564 mg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，r=0.999 9；平均回收率：為99.8%，RSD=1.1%（n=6）。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可作為該制劑的質(zhì)量控制依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】HPLC；重感靈片；安乃近對(duì)照品

[中圖分類號(hào)]R284.1；O657.72 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A [文章編號(hào)]2096-5249（2021）07-0177-02

重感靈片為甘肅省西峰制藥有限公司生產(chǎn)品種，基片為0.25 g，本標(biāo)準(zhǔn)為“國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品國家標(biāo)準(zhǔn)WS-10872（ZD-0872）-2002-2011Z”。該方含有中藥、西藥成份，配比為七味中藥，具體劑方：毛冬青、羌活、葛根、馬鞭草、板藍(lán)根、青蒿，2個(gè)西藥（馬來酸氯苯那敏、安乃近）。根據(jù)藥品的相關(guān)改進(jìn)技術(shù)需求，并根據(jù)原有的標(biāo)準(zhǔn)和2010年版第一冊(cè)的中國藥典》[1]，進(jìn)行了各項(xiàng)目的研究工作，含量測(cè)定項(xiàng)修訂了原標(biāo)中安乃近含量的方法，建立了HPLC法測(cè)定重感靈片制劑中安乃近含量測(cè)定的方法。

1 儀器與試藥

1.1儀器 安捷倫1200高效液相色譜儀（美國）。

1.2試藥 安乃近對(duì)照品（批號(hào)：100002-201307，購自中國藥品生物制品檢定所）；重感靈片由甘肅省西峰制藥有限公司提供，規(guī)格：0.25 g/片；甲醇為色譜純，磷酸，磷酸二氫鉀為分析純，水為重蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 取安乃近適量（約10 mg），精密稱定，置棕色量瓶中，用甲醇-水（70： 30）混合液配制，用量為0.1 mg/mL，搖勻，既得。掃描范圍為200～400 nm，最大吸收波長(zhǎng)為275 nm。參考國家食品藥品監(jiān)督管理總局國家藥品標(biāo)準(zhǔn)（WS-10872（ZD-0872）-2002-2011Z）[2]重感靈片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定安乃近的檢測(cè)波長(zhǎng)275 nm，采用275 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.2流動(dòng)相的選擇 取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取0.1 g，置100 mL棕色容量瓶中，臨用前加甲醇-水（70： 30）的混合溶液40 mL，振搖提取3 min，加入甲醇-水（70： 30）混合液，稀釋至刻度，搖勻，過濾，取連續(xù)濾液10μL注入液相色譜儀，國家食品藥品監(jiān)督管理總局國家藥品標(biāo)準(zhǔn)（WS-10872（ZD-0872）-2002-2011Z）[2]中重感靈片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的流動(dòng)相，采用甲醇-磷酸鹽溶液（取0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液，用1%磷酸調(diào)節(jié)pH值至4.5±0.5）（25： 75）為流動(dòng)相，結(jié)果安乃近色譜峰與相鄰峰分不開。通過調(diào)整流動(dòng)相比例，以甲醇-磷酸鹽溶液（取0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液，用1%磷酸調(diào)節(jié)pH值至4.5±0.5）（22： 78）作為流動(dòng)相，安乃近和相鄰色譜峰其分離是完全的，所得的色譜峰比較好。

2.3色譜條件 磷酸二氫鉀（C18.0μm流動(dòng)相）色譜柱；流動(dòng)相色譜法（C14.0μm，甲醇）；高效液相色譜法（用1%磷酸調(diào)節(jié)pH值至4.5±0.5）（22： 78）；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為275 nm；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：10μL；理論塔板數(shù)按安乃近峰計(jì)算不低于3500。

2.4干擾試驗(yàn) 按處方量配制陰性樣品，按供試品溶液的制備方法配制供試品溶液和陰性樣品溶液。精密量取供試品溶液和陰性樣品溶液各10μL，按上述色譜條件測(cè)定，并記錄色譜圖。結(jié)果陰性品的色譜圖在安乃近峰處無色譜峰。結(jié)果表明，其他藥材和輔料對(duì)安乃近的含量測(cè)定無干擾。

2.5校正曲線與線性關(guān)系 精密稱取安乃近標(biāo)準(zhǔn)品0.017 82 g置100 mL量瓶中，用甲醇-水（70： 30）的混合溶液溶解并稀釋至刻度，精密測(cè)定1，2，5，7，10，12，15，20μL注入液相色譜儀。記錄色譜圖。以溶液濃度（x）為橫坐標(biāo)，峰面積（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸分析?；貧w方程為y-0.001 2x-0.008 6。結(jié)果表明，安乃近的線性范圍為0.178 2～3.564 mg/mL，r=0.999 9。

2.6重復(fù)性試驗(yàn) 按上述色譜條件對(duì)同一批號(hào)（批號(hào)：406093）的6個(gè)樣品進(jìn)行稱重測(cè)定，并計(jì)算含量。結(jié)果6個(gè)樣品重復(fù)性良好（RSD=1.1%，n=6）。

2.7精密度試驗(yàn) 取上述對(duì)照品溶液1份，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定安乃近色譜峰積分面積，結(jié)果RSD=0.2%（n=6）。

2.8待測(cè)溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 取上述同一樣品溶液，分別于0、2、4、6、8 h進(jìn)樣，測(cè)定安乃近色譜峰的積分面積，結(jié)果在室溫條件下樣品中安乃近在8 h內(nèi)穩(wěn)定，RSD=0.5%。

2.9回收率試驗(yàn) 精密稱取每個(gè)樣品0.07 g，共稱取6個(gè)樣品，精密稱取安乃近對(duì)照品0.022 36 g，置于50 mL容量瓶中。加入甲醇和水的混合溶液（70： 30）稀釋至刻度。分別精密測(cè)定10、15、20 mL兩個(gè)樣品，共6個(gè)樣品。平均回收率為99.8%，RSD=1.1%（n=6）。

2.10色譜系統(tǒng)耐用性試驗(yàn) 色譜條件：安捷倫1200高效液相色譜（美國）；色譜柱：采用C18柱（Luna（C18）250 mm×4.6 mm，5μm）為流動(dòng)相，用1%磷酸調(diào)節(jié)pH值至（4.5±0.5）（22： 78）；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為275 nm；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：10μL；理論塔板數(shù)按安乃近峰計(jì)算不低于3500。

樣品溶液和對(duì)照品溶液的色譜峰峰形良好，陰性樣品溶液和空白溶媒均不干擾。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該方法耐用性良好。

2.11樣品含量測(cè)定 ①對(duì)照溶液的制備：取安乃近對(duì)照品（約18 mg），精密稱定，置100 mL容量瓶中，用甲醇-水（70： 30）溶液溶解，稀釋至刻度，搖勻得（每1 mL約0.2 mg安乃近）；②供試品溶液的制備：取樣品粉末0.1 g，精密稱定，置100 mL量瓶中，加甲醇-水（70： 30）的混合溶液40 mL，振搖提取3 min，加入甲醇-水（70： 30）混合液，稀釋至刻度，搖勻，過濾，取連續(xù)濾液，（避光操作，確保立即進(jìn)樣）；③測(cè)定法：取三批樣品，按供試品的制備方法配制供試品溶液。分別精密量取對(duì)照品溶液10μL和供試品溶液3批，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計(jì)算峰面積。

結(jié)果三批樣品含量分別為標(biāo)示量的99.75%、98.75%、96.70%，根據(jù)國家食品藥品監(jiān)督管理總局國家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS-10872（ZD-0872）-2002-2011Z中安乃近的含量限度和處方中根據(jù)安乃近的比例，結(jié)合實(shí)際生產(chǎn)、儲(chǔ)存、運(yùn)輸?shù)纫蛩兀科邪材私╟13h16n3nao4s·H2O）的含量應(yīng)為標(biāo)示量的85.0%～115.0%。詳見表1。

3 討論

3.1流動(dòng)相的選擇 流動(dòng)相為甲醇磷酸溶液（0.05 mol/ L磷酸二氫鉀溶液，用1%磷酸調(diào)節(jié)pH值至4.5±0.5）的比例分別為（25： 75）（24： 76）（23： 77）（22： 78），結(jié)果只有在流動(dòng)相比例為（22： 78）的條件下，對(duì)照品色譜峰才能與相鄰組分的干擾峰達(dá)到完全分離，故選用（22： 78）為流動(dòng)相的比例。

3.2樣品處理方法的選擇 曾選用樣品加流動(dòng)相，振搖提取，放置4 h后進(jìn)樣；經(jīng)比較樣品于臨用前加甲醇-水（70： 30）的混合溶液振搖提取后立即進(jìn)樣，所測(cè)得樣品的含量更加穩(wěn)定，故本實(shí)驗(yàn)采用了樣品于臨用前加甲醇-水（70： 30）的混合溶液振搖提取后立即進(jìn)樣作為樣品的提取方法。

3.3對(duì)照品配制方法的選擇 曾選用對(duì)照品加磷酸鹽溶液，放置4 h后進(jìn)樣的配制方法；經(jīng)比較對(duì)照品于臨用前加甲醇-水（70： 30）的混合溶液，搖勻，既得。所測(cè)得對(duì)照品的色譜峰更加穩(wěn)定，故本實(shí)驗(yàn)采用了對(duì)照品于臨用前加甲醇-水（70： 30）的混合溶液，搖勻，即得。作為對(duì)照品的配制方法。

參考文獻(xiàn)

[1] 《中國藥典》2010年版一部.

[2] 國家食品藥品監(jiān)督管理國家藥品標(biāo)準(zhǔn)（WS-10872（ZD-0872）-2002-2011Z）。.