金 姚， 黃 暉， 吳志俊

（上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院心內(nèi)科，上海200025）

急性冠脈綜合征是一組由于冠狀動(dòng)脈（冠脈）斑塊破裂、出血等繼發(fā)病變引起冠脈閉塞而導(dǎo)致的急性心肌缺血綜合征，包括急性心肌梗死和不穩(wěn)定型心絞痛。急性冠脈綜合征起病突然，發(fā)展迅速，隨時(shí)可能導(dǎo)致生命危險(xiǎn)，是全球致死性疾病的首要因素[1]。既往動(dòng)物實(shí)驗(yàn)與基因組學(xué)研究提示分泌性白細(xì)胞蛋白酶抑制劑（secretory leukocyte protease inhibitor，SLPI）在心肌梗死后表達(dá)增加[2-3]，但是SLPI的表達(dá)在急性冠脈綜合征中的臨床意義尚不明確。本研究擬探究血清SLPI水平與急性冠脈綜合征的相關(guān)性以及SLPI在心肌梗死后室壁瘤組織中的表達(dá)。

對(duì)象與方法

一、研究對(duì)象

連續(xù)納入2018年7月至2020年9月期間于上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院行冠脈造影的243例急性冠脈綜合征患者作為觀察組，包括臨床診斷為不穩(wěn)定型心絞痛、非ST段抬高心肌梗死和ST段抬高心肌梗死的患者。入選標(biāo)準(zhǔn)包括：①年齡≥18歲；②至少有1條主要冠脈狹窄程度≥50%；③肌鈣蛋白I＞0.12 mg/L。同時(shí)選取242例同期因胸部不適等原因接受冠脈造影檢查，但結(jié)果未見明顯異?；蚬诿}狹窄程度＜50%，并且性別、年齡分布較觀察組無(wú)顯著差異者作為對(duì)照組。排除卒中、瓣膜性心臟病、心肌病、急慢性傳染病、惡性腫瘤、結(jié)締組織疾病、嚴(yán)重腎功能衰竭等。本研究經(jīng)我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有研究對(duì)象入組前簽署知情同意書。

二、臨床資料采集

采集所有研究對(duì)象的性別、年齡、體質(zhì)量指數(shù)（body mass index，BMI）、收縮壓、舒張壓等臨床資料，以及空腹血糖、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、估算腎小球?yàn)V過(guò)率 （estimated glomerular filtration rate，eGFR）、三酰甘油、高敏C反應(yīng)蛋白（high sensitivity C-reactive protein，hsCRP）等實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指標(biāo)。

三、血樣采集及檢測(cè)

入院后24 h內(nèi)采集所有研究對(duì)象靜脈血，分離血清置于-80℃保存。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清SLPI水平。檢測(cè)試劑盒購(gòu)自美國(guó)R&D系統(tǒng)公司，嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行操作。

四、室壁瘤組織采集及免疫熒光

通過(guò)室壁瘤切除術(shù)采集1例心肌梗死后室壁瘤患者的室壁瘤組織。固定包埋室壁瘤組織，制備石蠟切片。切片經(jīng)脫臘水化、抗原修復(fù)、封閉等處理后SLPI和α平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）一抗4℃孵育過(guò)夜，熒光二抗室溫孵育1 h，4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(4’,6-diamidino-2-phenylindole，DAPI)染核5 min。熒光顯微鏡下觀察并拍照。SLPI一抗購(gòu)自美國(guó)賽默飛世爾科技公司，α-SMA一抗購(gòu)自美國(guó)Abcam公司。

五、統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS 26.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。連續(xù)數(shù)據(jù)以x±s顯示，分類數(shù)據(jù)以例數(shù)（百分比）顯示。分別采用t檢驗(yàn)和χ2檢驗(yàn)比較連續(xù)數(shù)據(jù)和分類數(shù)據(jù)的組間差異。采用多因素Logistic回歸分析血清SLPI水平與急性冠脈綜合征的相關(guān)性。統(tǒng)計(jì)顯著性定義為雙側(cè)P＜0.05。

結(jié) 果

一、血清SLPI水平比較

觀察組和對(duì)照組性別、年齡、BMI、收縮壓、舒張壓、LDL-C、eGFR差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），空腹血糖、HDL-C、三酰甘油、hsCRP差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。觀察組血清SLPI水平顯著高于對(duì)照組（P＝0.032）（見表1）。

表1 觀察組與對(duì)照組的基線特征比較[±s/n(%)]

表1 觀察組與對(duì)照組的基線特征比較[±s/n(%)]

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二、多因素Logistic回歸

所有連續(xù)數(shù)據(jù)通過(guò)四分位轉(zhuǎn)換為分類變量。以急性冠脈綜合征為應(yīng)變量，以性別、年齡、BMI、收縮壓、舒張壓、空腹血糖、HDL-C、LDL-C、三酰甘油、eGFR、hsCRP、SLPI為自變量，進(jìn)行多因素Logistic回歸分析。結(jié)果顯示：空腹血糖、LDL-C、hsCRP、HDL-C、SLPI均是急性冠脈綜合征的獨(dú)立影響因素（P＜0.05），其中血清SLPI水平升高是急性冠脈綜合征的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[優(yōu)勢(shì)比（odds ratio，OR）＝1.309，95%置 信 區(qū) 間 （confidence interval，CI）：1.040～1.648，P＝0.022]（見表2）。

表2 急性冠脈綜合征危險(xiǎn)因素的多因素Logistic回歸分析

三、SLPI在室壁瘤平滑肌細(xì)胞中的表達(dá)

免疫熒光共定位中，SLPI標(biāo)記為綠色熒光，α-SMA標(biāo)記為紅色熒光，DAPI標(biāo)記為藍(lán)色熒光。結(jié)果顯示SLPI與α-SMA主要分布于胞漿，融合（merge）圖像中部分室壁瘤組織細(xì)胞呈紅綠相間或黃色熒光，表明SLPI與平滑肌細(xì)胞標(biāo)志物α-SMA同時(shí)存在（見圖1）。

圖1 SLPI在患者室壁瘤組織中的表達(dá)

討 論

SLPI是一種絲氨酸蛋白酶抑制劑，主要由免疫細(xì)胞和黏膜表面的上皮細(xì)胞合成，具有多種生物學(xué)活性[4]。SLPI可抑制多種蛋白酶的活性，特別是中性粒細(xì)胞產(chǎn)生的彈性蛋白酶，減輕蛋白酶對(duì)組織蛋白的分解破壞[5]。SLPI也通過(guò)增加抑制劑κB（inhibitor kappa B，IκB）的表達(dá)抑制核因子κB（nuclear factor kappa B，NF-κB）的活性，從而減輕炎癥反應(yīng)[6]。SLPI還參與抵御細(xì)菌、病毒、真菌的侵襲，在先天性免疫反應(yīng)中發(fā)揮作用[7]。

既往多項(xiàng)研究提示SLPI表達(dá)水平可能對(duì)心血管疾病具有預(yù)警作用。代謝障礙與炎癥是心血管疾病的危險(xiǎn)因素。SLPI在肥胖患者的脂肪組織中表達(dá)上調(diào)，并且血清SLPI水平隨代謝障礙程度增加[8]。多種微生物源性的促炎物質(zhì)可通過(guò)觸發(fā)炎癥反應(yīng)增加SLPI的表達(dá)[9-10]。本研究比較了急性冠脈綜合征患者與冠脈正常者的血清SLPI水平，結(jié)果顯示急性冠脈綜合征患者血清SLPI水平顯著升高。多因素Logistic回歸分析表明血清SLPI水平升高是急性冠脈綜合征的危險(xiǎn)因素。本研究結(jié)果與之前的研究相一致，為SLPI在急性冠脈綜合征臨床診療中的應(yīng)用提供了新的理論依據(jù)。

SLPI是心血管疾病的一種保護(hù)因子。目前研究發(fā)現(xiàn)心肌梗死組織中的中性粒細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)SLPI[11-12]。SLPI可通過(guò)抗氧化、抗凋亡作用減輕內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙，維持心肌細(xì)胞的活性，減輕心肌缺血再灌注損傷[12-14]。本研究進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)SLPI在心肌梗死后室壁瘤組織的平滑肌細(xì)胞中表達(dá)，為SLPI在急性冠脈綜合征中的作用機(jī)制提供了新的研究思路。

但是本研究受樣本量限制，難以進(jìn)行下一步亞組分析。同時(shí)由于本研究是一個(gè)橫斷面研究，無(wú)法分析血清SLPI水平對(duì)急性冠脈綜合征患者預(yù)后的影響。解決這些問(wèn)題有待進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量和后期跟蹤隨訪。同時(shí)在急性冠脈綜合征病理生理過(guò)程中SLPI對(duì)平滑肌細(xì)胞的作用還有待進(jìn)一步研究。