張奉蘇，房克慧，阮洪生，陳宏降，羅益遠(yuǎn)*，張 璐，孔 燕

（1. 揚州市食品藥品檢驗檢測中心，江蘇 揚州225000；2. 浙江醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校 中藥學(xué)院，浙江 寧波 315100）

雷公藤Tripterygium wilfordiiHook. f.是衛(wèi)矛科落葉灌木植物，以根、葉等入藥，主產(chǎn)于浙江、湖北、江西、四川等地。性涼，味苦、辛，有大毒，具有祛風(fēng)除濕、活血通絡(luò)、消腫止痛、殺蟲解毒等功效，臨床用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腎病、皮膚病及器官移植后的免疫排斥反應(yīng)等癥[1-2]。其主要成分有二萜類、三萜類、倍半萜類、生物堿類等[3-6]。近年來對雷公藤化學(xué)成分的研究多集中在生物堿類、二萜類等，對于雷公藤藥材的評價多集中于對主要有效成分雷公藤甲素或雷公藤紅素的含量測定，單一化學(xué)成分不能全面反映藥材質(zhì)量[7-9]，且對于雷公藤揮發(fā)性成分的現(xiàn)代研究相對較少。本實驗在前期研究基礎(chǔ)上[10-11]，以不同產(chǎn)地（江西、四川、湖北、浙江）、不同部位（根、葉、根皮、莖）的雷公藤為樣品，采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀分析，比較不同樣品中揮發(fā)性成分的差異，為雷公藤藥材質(zhì)量的評價提供科學(xué)依據(jù)，同時為雷公藤的品質(zhì)形成機制奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

島津 TQ8040型氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（日本島津公司）；GC-MS Postrun Analysis分析軟件、NIST2014質(zhì)譜檢索庫；XS205D型電子天平（十萬分之一，瑞士梅特勒—托利多公司）；環(huán)已烷（分析純，國藥集團化學(xué)試劑有限公司，批號：20190822）；無水硫酸鈉（分析純，國藥集團化學(xué)試劑有限公司，批號：20190917）。

所有樣品為實地采收于規(guī)范化種植基地的雷公藤，經(jīng)揚州市食品藥品檢驗檢測中心房克慧主任中藥師鑒定為衛(wèi)矛科雷公藤屬植物雷公藤Tripterygium wilfordiiHook. f.的干燥根、葉、莖、根皮，留樣保存于揚州市食品藥品檢驗檢測中心中藥檢驗室。

1.2 方法

1.2.1 樣品制備 取50 g雷公藤樣品粉末（過二號篩），分別置于500 mL圓底燒瓶中，加入7倍量的蒸餾水浸泡2 h，加入3 mL環(huán)已烷，照《中國藥典》2020年版（通則2204）揮發(fā)油提取法提取5 h，得到淡黃色的油狀物（含有環(huán)己烷），過0.45 μm微孔濾膜，濾過，即得樣品。

1.2.2 GC-MS條件 GC條件：以5%苯甲基聚硅氧烷為固定液，以HP-5MS彈性石英毛細(xì)管柱規(guī)格為（30 m × 250 μm，0.25 μm）。程序升溫條件初始溫度為80 ℃，持續(xù)2 min，以 5℃/min升至150℃并持續(xù)5 min，再以5℃/min升至195℃并持續(xù)2 min，最后以10℃/min升至230℃并持續(xù)2 min。進樣口溫度為250℃；載氣為高純度氦氣（純度：99.999%）；柱內(nèi)載氣體積流量為1.93 mL/min；分流比為10∶1；進樣量為1 μL。

MS條件：電子轟擊（EI）離子源；離子源溫度為200℃；接口溫度為250 ℃；電子能量為70 eV；質(zhì)量掃描范圍m/z為44 ～ 550。

1.2.3 數(shù)據(jù)分析 所有經(jīng)過GC-MS分析得到對應(yīng)的總離子色譜圖，原始圖譜在儀器工作站中進行峰對齊、切割、濾噪等處理后，所得色譜圖和質(zhì)譜信息通過數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)與內(nèi)存標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜檢索庫（NIST 2014）分析確認(rèn)出化合物，利用峰面積歸一化法計算出各個化學(xué)成分的相對百分含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同產(chǎn)地雷公藤樣品分析

不同產(chǎn)地雷公藤樣品揮發(fā)性成分分析結(jié)果，見圖1、表1。

表1 不同產(chǎn)地雷公藤樣品中揮發(fā)性成分分析結(jié)果Tab. 1 Results of volatile components of T. wilfordii of different origin

圖1 不同產(chǎn)地雷公藤樣品中揮發(fā)性成分GC-MS總離子流圖Fig.1 GC-MS total ion flow diagram of T. wilfordii of different origin

結(jié)果顯示不同產(chǎn)地樣品中揮發(fā)性成分差異顯著，江西產(chǎn)樣品中共鑒定出25種揮發(fā)性成分，占總含量的85.53%；湖北產(chǎn)雷公藤樣品中共鑒定出25種成分，占總量的72.12%；四川產(chǎn)樣品中共鑒定出21種成分，占總含量的79.16%；浙江產(chǎn)雷公藤樣品中共鑒定出26種揮發(fā)性成分，占總含量的89.59%。不同產(chǎn)地共有的揮發(fā)性成分有14種，分別是2,3-二甲基-2-戊烯、環(huán)庚三烯、正己醛、順-2-己烯-1-醇、丙烯酸正丁酯、苯甲醛、2-正戊基呋喃、環(huán)己甲醇、辛酸、香葉基丙酮、柏木腦、（2R,4aR）-2-萘甲醇,1,2,3,4,4a,5,6,7-八氫-a,a,4a,8-四甲基、鄰苯二甲酸二異丁酯、棕櫚酸。其中，江西產(chǎn)地中含有特有揮發(fā)性成分左旋香芹酮（2.36%）；湖北產(chǎn)地中含有特有揮發(fā)性成分間異苯基甲苯、2-甲基-5-（1-甲基乙烯基）環(huán)己酮、β-桉葉醇、白秋李醇；四川產(chǎn)雷公藤中特有的揮發(fā)性成分正二十烷；浙江產(chǎn)地中含有特有揮發(fā)性成分（1R）-（+）-α蒎烯、肉桂醛。

進一步對不同產(chǎn)地雷公藤樣品中揮發(fā)性成分類型分析結(jié)果顯示，江西產(chǎn)雷公藤藥材中酸類（41.30%）>烴類（14.55%）>醇類（8.22%）>醛類（7.66%）>酯類（4.26%）>酮類（4.11%）>醚類（3.27%）>其它類（2.16%）；湖北產(chǎn)雷公藤藥材中酸類（39.73%）>醇類（12.68%）>醛類（5.88%）>酯類（4.12%）>烴類（4.03%）>酮類（2.73%）>其它類（2.05%）>醚類（0.9%）；四川產(chǎn)樣品酸類（62.17%）>醛 類（4.12%）>酯 類（3.27%）>醇類（3.23%）>烴類（2.64%）>其它類（1.49%）>醚類（1.35%） >酮類（0.89%）；浙江產(chǎn)樣品酸類（47.57%）>醛類（17.04%）>烴類（7.59%）>醇類（7.25%）>酯類（5.75%）>酮類（2.35%）>其它類（1.67%）>醚類（0.37%）。

2.2 不同部位雷公藤樣品分析

浙產(chǎn)雷公藤不同部位揮發(fā)性成分分析結(jié)果，見圖2、表2。不同部位揮發(fā)性成分差異明顯，從雷公藤根、葉、莖和根皮中分別鑒定了26、30、11、23種揮發(fā)性成分。面積歸一化法確定其相對含量，根、葉、莖和根皮中已鑒定的揮發(fā)性成分的相對含量占總含量的89.59%、53.77%、59.05%、59.46%。根和葉中共有12種成分；根和莖中共有10種成分；根和根皮中共有20種揮發(fā)性成分；葉和莖中共有10種成分；葉和根皮中共有14種成分；莖和根皮共有10種成分。

表2 雷公藤不同部位揮發(fā)性成分分析結(jié)果Tab. 2 Results of volatile components from different parts of T. wilfordii

圖2 不同部位雷公藤樣品中揮發(fā)性成分GC-MS總離子流圖Fig.2 GC-MS total ion flow diagram of T. wilfordii of different parts

浙產(chǎn)雷公藤不同部位樣品中各類化合物的相對含量差異明顯。根、葉、莖、根皮烴類化合物的含量分別為7.59%、5.10%、18.95%、17.84%；醇類化合物的含量分別為7.25%、9.96%、15.36%、11.78%；酯類化合物分別為5.75%、3.58%、17.39%、8.10%；醛類化合物的含量分別為17.04%、9.10%、5.13%、8.36%；醚類存在于根和葉中，相對含量分別為0.37%、1.08%，莖和根皮中未檢測醚類成分；酚類成分僅存在于葉中，其相對含量為2.95%；酮類成分在根、葉、莖、根皮的含量分別為2.35%、19.88%、0.00%、0.97%；酸類化合物的含量分別為47.57%、0.64%、0.00%、11.41%；其它類成分的含量分別為1.67%、1.48%、2.22%、1.00%。

3 討論

不同產(chǎn)地雷公藤藥材揮發(fā)性成分組成和相對含量也有較大差別，可能是由于藥材在不同生態(tài)環(huán)境和種質(zhì)資源等條件下，使植物揮發(fā)油成分在生物合成過程中受到不同的影響。針對上述情況，鑒定出的各產(chǎn)地的特有成分，大量樣本分析結(jié)果可對藥材中的產(chǎn)地和品種進行鑒別，這也為雷公藤藥材的品種和產(chǎn)地的鑒別提供了一個新方法。傳統(tǒng)雷公藤以根入藥，現(xiàn)代研究表明雷公藤莖、葉中具有多種活性成分[12]。所鑒定的揮發(fā)性成分也具有較多的生物活性，其中，醛類和醇類化合物具有抑菌消毒的作用[13-15]；異龍腦具有一定的抗氧化能力，其機制可能與增強抗氧化成分活性和減少氧自由基相關(guān)[11]；肉豆蔻醚具有抗腫瘤、抗真菌、抑制肝脂質(zhì)過氧化的作用；丹皮酚通過下調(diào)HMGB1并減輕ox-LDL導(dǎo)致的VSMC炎癥反應(yīng)，并因此有效抑制了VSMC的增殖和遷移，對動脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展具有抑制作用[16]。這些活性成分與雷公藤的傳統(tǒng)功效“祛風(fēng)除濕、活血通絡(luò)、消腫止痛、殺蟲解毒”具有一定的關(guān)系。

4 結(jié)論

本實驗通過采用水蒸氣蒸餾法結(jié)合GC-MS技術(shù)對不同產(chǎn)地和不同部位雷公藤藥材中揮發(fā)性成分進行分析。系統(tǒng)分析產(chǎn)地因素對揮發(fā)性成分的影響和不同部位揮發(fā)性成分分布，不同產(chǎn)地和部位藥材揮發(fā)性成分種類和相對含量存在差異，各產(chǎn)地藥材均含有多種特殊成分，這也為后續(xù)雷公藤藥材的產(chǎn)地識別奠定基礎(chǔ)，還可為雷公藤藥材質(zhì)量的綜合評價和質(zhì)量控制提供依據(jù)。