馮雪 李婷婷 鄭欣 蒼鵬 王佳欣 楊紅育

（長春生物制品研究所有限責(zé)任公司 吉林長春 130012）

1 前言

凍干人用狂犬病疫苗（Vero細(xì)胞）是用狂犬病病毒固定毒接種于Vero細(xì)胞，主要用于預(yù)防狂犬病。《中國藥典》2020年版三部中收載的水分測定法包括費(fèi)休氏法、烘干法、減壓干燥法、甲苯法和氣相色譜法[1]。此外，熱重分析法、差式掃描量熱法等方法也常應(yīng)用于藥物中水分的分析[2-9]。本文參照《中國藥典》中卡爾費(fèi)休容量法，聯(lián)用市售卡氏干燥爐測定水分，并將測定的結(jié)果與未聯(lián)用卡氏干燥爐的方法進(jìn)行比較。

2 儀器與試劑

2.1 儀器

V30型水分測定儀（METTLER TOLEDO）；Stromboli型卡氏干燥爐（METTLER TOLEDO）；XS205型電子天平（METTLER TOLEDO）。

2.2 試劑

無水甲醇（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；1mg/mL費(fèi)休氏試液（Merck）；2mg/mL費(fèi)休氏試液（Merck）；5 mg/mL費(fèi)休氏試液（Merck）；固體標(biāo)準(zhǔn)水（Merck）。

2.3 實(shí)驗(yàn)樣品

凍干人用狂犬病疫苗（Vero細(xì)胞）（長春生物制品研究所有限責(zé)任公司）。

3 實(shí)驗(yàn)方法

3.1 卡氏爐-卡爾費(fèi)休聯(lián)用法

3.1.1 操作條件

（1）卡氏干燥爐加熱溫度：150℃±2℃。

（2）卡氏干燥爐加熱時(shí)間：10 min。

（3）費(fèi)休氏試液滴定度：1、2、5 mg/ml。

（4）載氣：空氣。

3.1.2 樣品測定

精密稱取樣品適量于樣品瓶中，密封后將其放入卡氏干燥爐的相應(yīng)位置并啟動(dòng)，用費(fèi)休氏試液滴定至終點(diǎn)。

3.2 卡爾費(fèi)休法

以無水甲醇為溶劑，按照《中國藥典》中的卡爾費(fèi)休容量法測定。

4 結(jié)果與討論

4.1 費(fèi)休氏試劑滴定度的選擇

不同滴定度的費(fèi)休氏試液測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.103%，無明顯差異。

4.2 稱樣量的選擇

采用滴定度為1 mg/ml的費(fèi)休氏試劑，在150℃加熱10 min的測定條件下，分別稱取0.04、0.08、0.12、0.16、0.20 g的樣品，考察樣品程樣量對測定結(jié)果的影響。結(jié)果表明，不同樣品稱量質(zhì)量測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.048%，無明顯差異。

4.3 精密度實(shí)驗(yàn)

采用滴定度為1 mg/ml的費(fèi)休氏試劑，150℃加熱10 min的測定條件下，由2位不同實(shí)驗(yàn)人員在不同時(shí)間對樣品進(jìn)行測定，每位實(shí)驗(yàn)人員精密稱取6份樣品測定水分，測定結(jié)果見表1。計(jì)算2位實(shí)驗(yàn)人員12次測定結(jié)果的RSD為0.128%，精密度良好。

表1 精密度實(shí)驗(yàn)的測定結(jié)果（%）

4.4 回收率實(shí)驗(yàn)

經(jīng)測定，加標(biāo)回收率在87.74%～105.01%。

4.5 比對實(shí)驗(yàn)

以無水甲醇為溶劑，按照《中國藥典》卡爾費(fèi)休容量法，由2位不同實(shí)驗(yàn)人員在不同時(shí)間對樣品進(jìn)行測定，每位實(shí)驗(yàn)人員精密稱取6份樣品測定水分，并將測定結(jié)果與精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比對。實(shí)驗(yàn)人員A與實(shí)驗(yàn)人員B比對結(jié)果的RSD分別為0.0877%和0.133%，結(jié)果基本一致。

5 結(jié)論

本文建立了凍干人用狂犬病疫苗（Vero細(xì)胞）水分的檢測方法，考察了該方法的影響因素。研究表明，費(fèi)休氏試液滴定度及稱量質(zhì)量對檢測結(jié)果無顯著影響；采用2種方法對樣品進(jìn)行測定，結(jié)果表明2種方法的測定結(jié)果基本一致，但聯(lián)用卡氏干燥爐能夠避免樣品中其他輔料對測定結(jié)果的影響，操作方便簡潔，準(zhǔn)確度高，為凍干人用狂犬病疫苗（Vero細(xì)胞）水分的檢測提供參考方法。