徐凱 藍美英 石明睿 鄭曉斌

（麗珠集團麗珠制藥廠 廣東珠海 519090）

1 前言

阿奇霉素為大環(huán)內酯類抗生素，用于敏感細菌所引起的上呼吸道、下呼吸道、皮膚和軟組織等感染[1]。阿奇霉素分散片臨床應用廣泛，在肺炎支原體感染[2]、宮頸炎[3]和尿道炎[4]等治療方面均有應用。阿奇霉素分散片中阿奇霉素的含量測定方法主要有旋光法[5]、HPLC法[6]和分光光度法[7]，其中，旋光法檢測迅速，但需要較穩(wěn)定的環(huán)境溫度；HPLC法測定出峰時間較晚，檢測周期較長；分光光度法需用硫酸顯色后再檢測，其專屬性有待提高。超高效液相色譜技術（UPLC）具有超高效、超高分離度、超高靈敏度和試劑用量少等特點[8]，在藥物分析方面應用廣泛[8-9]。為減少試劑使用量進而減少對環(huán)境的破壞，更加快速、方便和準確的獲得檢測結果，本文采用UPLC法對阿奇霉素分散片中阿奇霉素的含量測定進行了研究。

2 儀器與試藥

儀器：WATERS ACQUITY Arc超高效液相色譜儀；MS105DU電子天平。

試藥：阿奇霉素分散片（藥店購買，批號：27420 0305）；阿奇霉素（批號：130593-202004，含量94.3%，中國食品藥品檢定研究院）；乙腈為色譜純；水為自制純化水。

3 方法

3.1 色譜條件

色譜柱：WATERS ACQUITY BEH C18，其中柱規(guī)格為50×2.1 mm，粒徑1.7μm；流動相：稱取4.6 g磷酸二氫鉀，用1L水溶解后，用1 mol/L氫氧化鈉溶液調pH值到7.5作為A相，乙腈作為B相，A相與B相的比例為38∶62；柱溫設成40℃；流速0.3 mL/min；檢測波長210 nm；進樣量4μL。

3.2 對照品溶液配制

取流動相做稀釋劑，精密稱取一定量阿奇霉素對照品，用稀釋劑制得均一溶液（濃度為1 mg/mL），用作對照品溶液。

3.3 供試品溶液配制

取20片樣品，置于研缽中用研棒研磨，得到藥品細粉，精密稱取相當于50 mg阿奇霉素的細藥粉，轉移至50 mL的容量瓶中，添加25 mL乙腈，振搖20 min，添加流動相至刻度后輕輕振搖，把搖勻的液體倒適量于離心管中離心，上清液作為供試品溶液。

4 結果

4.1 專屬性試驗

將樣品置于研缽中用研棒研磨，得到藥品細粉，精密稱取相當于50 mg阿奇霉素的藥粉，共稱5份，轉移至50 mL的容量瓶里，添加25 mL乙腈，分別將5份樣品做酸、堿、高溫、氧化和光照破壞后添加流動相至刻度，輕輕振搖至溶液均勻，離心后進樣測定。結果色譜圖中阿奇霉素與前后色譜峰的分離度都達到定量要求（>1.5），純度分析顯示純度符合含量測定的要求。

4.2 精密度試驗

連續(xù)進樣測定一份對照品溶液，結果顯示6次連續(xù)測定得到的峰面積RSD為0.61%，說明儀器的精密度達到測定要求。

4.3 線性范圍考察

精密稱取一定重量的阿奇霉素對照品，用流動相作稀釋劑制得標準液1（1.703 mg/mL），再取適當體積的標準液1用流動相配制1.363、1.022、0.6813和0.3406 mg/mL的溶液，記為標準液2、3、4和5。分別進樣測定標準液1、2、3、4和5，用峰面積對濃度作線性回歸，得到方程為Y=291001X-468，r為0.9999。結果顯示阿奇霉素進樣4μL、檢測濃度為0.3406～1.703 mg/mL時線性良好。

4.4 溶液穩(wěn)定性

取阿奇霉素分散片，按3.3步驟制得供試品溶液，分別在配制后的第0、1、2、3和5 h進行測定。把各個時間點峰面積與0 h峰面積計算比值，結果顯示比值均在98.0%～102.0%范圍內，表明供試品溶液配制后在室溫5 h內任何時間進樣測定對測定結果沒有影響。

4.5 重復性試驗

取阿奇霉素分散片（同一批號）置于研缽中用研棒研磨，得到藥品細粉，按3.3制備6份供試品溶液，測定。根據(jù)記錄的峰面積計算結果，得到阿奇霉素平均含量為98.1%，RSD為0.98%，結果顯示樣品重復測定結果較好。

4.6 回收率試驗

將樣品置于研缽中用研棒研磨，得到藥品細粉，精密稱取相當于25 mg阿奇霉素的藥粉，共稱9份，轉移到50 mL的容量瓶里，把9份樣品分成3組，每3份樣品作為一組，分別加入對照品約20、25和30 mg，按供試品溶液配制方法制得測定回收率的供試溶液，進樣測定，計算，結果見表1。結果顯示本方法準確度良好。

表1 回收率試驗結果

4.7 色譜條件耐用性考察

考察色譜條件的耐用性（各個條件的變化范圍為：流速0.3±0.02mL/min、pH值7.5±0.2，流動相比例36∶64和40∶60、柱溫40±2℃、磷酸鹽緩沖液中磷酸二氫鉀濃度4.6±0.2 g/L），將各條件所測得含量與上文提到的色譜條件測得含量進行比較，結果顯示比值都在98.0%～102.0%范圍內，說明色譜條件發(fā)生了一些細微變化，并不會影響含量測定的結果。

5 討論

采用PDA檢測器在190～400 nm范圍對阿奇霉素對照品溶液進行掃描，根據(jù)吸收曲線設置檢測波長為210 nm。

對流動相pH值進行優(yōu)化，考察pH值為7.0、7.5、8.0和8.5，結果顯示pH值調至7.5時，色譜峰峰形最好、柱效最高，因此將流動相的pH值確定為7.5。

本文對UPLC法測定阿奇霉素分散片中阿奇霉素的含量進行研究，所建立方法具有快速、準確、試劑消耗少的特點，進行大批量的樣品檢驗時能極大地提高檢驗效率，值得應用于阿奇霉素分散片的質量控制，尤其適用于檢品龐大的藥檢機構。