吳元鳳 江洋

摘要：研究硅藻頁巖與微生物菌劑主要功能菌（枯草芽孢桿菌、膠凍樣類芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、米曲霉）混配保存問題。試驗(yàn)采用梯度稀釋法和平板涂布法進(jìn)行檢測，當(dāng)微生物菌劑的添加濃度為2億/克、6億/克、10億/克時(shí)，其有效菌數(shù)變化趨勢基本一致，且與膠凍樣類芽孢桿菌混配最為合適。

關(guān)鍵詞：微生物菌劑；硅藻頁巖；混配保存

微生物菌劑的本質(zhì)特征在于含有已知的、具有特定功能的微生物，并通過微生物的活動(dòng)產(chǎn)生相應(yīng)的肥效。已有研究表明，其在改良土壤、提高作物品質(zhì)和數(shù)量等方面具有不可估量的前景。其中枯草芽孢桿菌、膠凍樣類芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、解淀粉、米曲霉等菌株在實(shí)際生產(chǎn)中應(yīng)用領(lǐng)域最為廣泛。農(nóng)用微生物菌劑作為微生物肥料生產(chǎn)中的一類重要資源，其參與土壤的調(diào)控作用，有效抑制病蟲害的侵染，可達(dá)到增產(chǎn)提質(zhì)的效果。

硅藻頁巖是具有會(huì)呼吸機(jī)能的稀有原生態(tài)海洋古生物活化石，被世界地質(zhì)學(xué)家譽(yù)為“地球的肺泡”，地球70%的氧氣是從海洋硅藻中誕生的，它支撐著地球上有生命物種的呼吸所需的氧氣。硅藻頁巖是在礦化腐殖質(zhì)的基礎(chǔ)上，經(jīng)過低溫超微細(xì)研，形成的一種表面活性強(qiáng)、元素含量豐富、對(duì)環(huán)境友好的一種有益物質(zhì)。因此，硅藻頁巖對(duì)微生物的影響不可小覷。

1 材料與方法

1.1 供試材料

供試菌劑：微生物肥料技術(shù)研究推廣中心保存的菌劑（枯草芽孢桿菌、膠凍樣類芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、米曲霉）。吸附劑：硅藻頁巖為購買產(chǎn)品。試劑：葡萄糖、磷酸氫二鉀、磷酸氫二鈉、硫酸鎂、氯化鐵、瓊脂、氯化鈉、牛肉膏、蛋白胨等試劑，均為國產(chǎn)分析純和生化試劑。所用檢測培養(yǎng)基：依據(jù)微生物肥料產(chǎn)品檢驗(yàn)規(guī)程N(yùn)Y/T2321-2013執(zhí)行。

1.2 試驗(yàn)方法

依據(jù)農(nóng)用微生物菌劑標(biāo)準(zhǔn)（GB20287-2006），關(guān)于對(duì)產(chǎn)品的技術(shù)指標(biāo)要求，粉劑產(chǎn)品有效活菌數(shù)要≥2.0億/克，因?yàn)樵谶M(jìn)行相關(guān)產(chǎn)品的混配試驗(yàn)時(shí)，其有效活菌數(shù)不低于此標(biāo)準(zhǔn)。

樣品混合前，依據(jù)檢測結(jié)果可知，上述5種菌劑含菌量分別為1000億/克、100億/克、1000億/克、1000億/克、50億/克。將菌劑與硅藻頁巖混合配置100克樣品，設(shè)置含菌量濃度分別為2.0億/克、6.0億/克、10.0億/克。

1.3 加樣及培養(yǎng)

在無菌操作臺(tái)上用移液器分別吸取適宜的稀釋梯度的菌懸液0.1毫升，添加到事先備好的含有檢測培養(yǎng)基的平板上，并涂布均勻。每個(gè)處理重復(fù)3次，而后將相關(guān)平皿置于32℃恒溫培養(yǎng)箱中，24～48小時(shí)后，直到不再長出新菌落為止，計(jì)數(shù)時(shí)取3次重復(fù)的平均數(shù)。

1.4 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)設(shè)置5個(gè)菌劑水平（C1、C2、C3、C4、C5），每個(gè)水平3個(gè)處理（菌粉添加量為2億/克、6億/克、10億/克）。每次處理的首次檢測結(jié)果標(biāo)記為0（即為空白對(duì)照），依據(jù)混合樣品的保存時(shí)長，設(shè)置樣品檢測時(shí)間，依據(jù)檢測的次數(shù)，分別記為1、2、3、4。樣品進(jìn)行檢測時(shí)，利用平板梯度稀釋法，每個(gè)平板3次重復(fù)取平均值。5個(gè)菌株共計(jì)225個(gè)數(shù)值，在上述條件下，進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 各菌劑間受不同菌劑添加比例的影響

通過各菌劑的不同添加比例數(shù)據(jù)值的統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，2億/克、6億/克、10億/克時(shí)，5種菌劑隨著時(shí)間的推移，其有效活菌數(shù)的變化趨勢基本一致。在首次混養(yǎng)后，其樣品的有效菌數(shù)都保障了添加比例的準(zhǔn)確性，伴隨時(shí)間推移，其有效菌數(shù)有不同程度的改變。C1的主要成分為枯草芽孢桿菌，混合一周后，樣品中的有效活菌數(shù)急劇的銳減，一個(gè)月后，其有效活菌數(shù)有一定的提升，這與硅藻頁巖為枯草芽孢桿菌的生長、發(fā)育、代謝等提供了一定的條件有關(guān)。后期基本穩(wěn)定，但其含菌量減少明顯。其原因在于枯草芽孢桿菌本身隨著時(shí)間的推移有降解的可能性。

2.2 各菌劑間受不同時(shí)期同種菌劑添加比例的影響

同種添加比例混合樣品時(shí)，以含菌量10億/克為例。C2在保存一個(gè)月后檢樣時(shí)含菌量增加，而后逐步減少。10個(gè)月后，其有效含菌量仍能保持在相對(duì)穩(wěn)定的范圍之內(nèi)。其余各處理在1次檢樣時(shí)，樣品的含菌量急劇減少，以C1變化最為顯著。通過對(duì)各個(gè)水平進(jìn)行變異系數(shù)的計(jì)算，分別為，79.1%、22.7%、38.1%、36.9%、58.9%。其中以C1的變異系數(shù)最大，C2的變異系數(shù)最小。結(jié)合有效活菌數(shù)含量的變化，硅藻頁巖與各菌劑混配最適為，C2>C4>C3>C5>C1。

3 結(jié)論

微生物菌劑對(duì)全世界農(nóng)業(yè)做出了重要的貢獻(xiàn)，截至目前，針對(duì)農(nóng)用微生物菌劑與農(nóng)藥相互作用等方面研究較多，指導(dǎo)實(shí)際生產(chǎn)的研究相對(duì)甚少。本試驗(yàn)探索了硅藻頁巖與常用微生物菌劑混配的初步階段，通過本試驗(yàn)可知，硅藻頁巖與膠凍樣類芽孢桿菌混配最為適宜，在實(shí)際的生產(chǎn)使用過程中，菌劑添加量達(dá)到相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)要求即可。