吳元鳳 江洋

摘要：研究硅藻頁巖與微生物菌劑主要功能菌（枯草芽孢桿菌、膠凍樣類芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、米曲霉）混配保存問題。試驗采用梯度稀釋法和平板涂布法進行檢測，當微生物菌劑的添加濃度為2億/克、6億/克、10億/克時，其有效菌數變化趨勢基本一致，且與膠凍樣類芽孢桿菌混配最為合適。

關鍵詞：微生物菌劑；硅藻頁巖；混配保存

微生物菌劑的本質特征在于含有已知的、具有特定功能的微生物，并通過微生物的活動產生相應的肥效。已有研究表明，其在改良土壤、提高作物品質和數量等方面具有不可估量的前景。其中枯草芽孢桿菌、膠凍樣類芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、解淀粉、米曲霉等菌株在實際生產中應用領域最為廣泛。農用微生物菌劑作為微生物肥料生產中的一類重要資源，其參與土壤的調控作用，有效抑制病蟲害的侵染，可達到增產提質的效果。

硅藻頁巖是具有會呼吸機能的稀有原生態(tài)海洋古生物活化石，被世界地質學家譽為“地球的肺泡”，地球70%的氧氣是從海洋硅藻中誕生的，它支撐著地球上有生命物種的呼吸所需的氧氣。硅藻頁巖是在礦化腐殖質的基礎上，經過低溫超微細研，形成的一種表面活性強、元素含量豐富、對環(huán)境友好的一種有益物質。因此，硅藻頁巖對微生物的影響不可小覷。

1 材料與方法

1.1 供試材料

供試菌劑：微生物肥料技術研究推廣中心保存的菌劑（枯草芽孢桿菌、膠凍樣類芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、米曲霉）。吸附劑：硅藻頁巖為購買產品。試劑：葡萄糖、磷酸氫二鉀、磷酸氫二鈉、硫酸鎂、氯化鐵、瓊脂、氯化鈉、牛肉膏、蛋白胨等試劑，均為國產分析純和生化試劑。所用檢測培養(yǎng)基：依據微生物肥料產品檢驗規(guī)程NY/T2321-2013執(zhí)行。

1.2 試驗方法

依據農用微生物菌劑標準（GB20287-2006），關于對產品的技術指標要求，粉劑產品有效活菌數要≥2.0億/克，因為在進行相關產品的混配試驗時，其有效活菌數不低于此標準。

樣品混合前，依據檢測結果可知，上述5種菌劑含菌量分別為1000億/克、100億/克、1000億/克、1000億/克、50億/克。將菌劑與硅藻頁巖混合配置100克樣品，設置含菌量濃度分別為2.0億/克、6.0億/克、10.0億/克。

1.3 加樣及培養(yǎng)

在無菌操作臺上用移液器分別吸取適宜的稀釋梯度的菌懸液0.1毫升，添加到事先備好的含有檢測培養(yǎng)基的平板上，并涂布均勻。每個處理重復3次，而后將相關平皿置于32℃恒溫培養(yǎng)箱中，24～48小時后，直到不再長出新菌落為止，計數時取3次重復的平均數。

1.4 數據分析

試驗設置5個菌劑水平（C1、C2、C3、C4、C5），每個水平3個處理（菌粉添加量為2億/克、6億/克、10億/克）。每次處理的首次檢測結果標記為0（即為空白對照），依據混合樣品的保存時長，設置樣品檢測時間，依據檢測的次數，分別記為1、2、3、4。樣品進行檢測時，利用平板梯度稀釋法，每個平板3次重復取平均值。5個菌株共計225個數值，在上述條件下，進行數據分析。

2 結果與分析

2.1 各菌劑間受不同菌劑添加比例的影響

通過各菌劑的不同添加比例數據值的統(tǒng)計發(fā)現，2億/克、6億/克、10億/克時，5種菌劑隨著時間的推移，其有效活菌數的變化趨勢基本一致。在首次混養(yǎng)后，其樣品的有效菌數都保障了添加比例的準確性，伴隨時間推移，其有效菌數有不同程度的改變。C1的主要成分為枯草芽孢桿菌，混合一周后，樣品中的有效活菌數急劇的銳減，一個月后，其有效活菌數有一定的提升，這與硅藻頁巖為枯草芽孢桿菌的生長、發(fā)育、代謝等提供了一定的條件有關。后期基本穩(wěn)定，但其含菌量減少明顯。其原因在于枯草芽孢桿菌本身隨著時間的推移有降解的可能性。

2.2 各菌劑間受不同時期同種菌劑添加比例的影響

同種添加比例混合樣品時，以含菌量10億/克為例。C2在保存一個月后檢樣時含菌量增加，而后逐步減少。10個月后，其有效含菌量仍能保持在相對穩(wěn)定的范圍之內。其余各處理在1次檢樣時，樣品的含菌量急劇減少，以C1變化最為顯著。通過對各個水平進行變異系數的計算，分別為，79.1%、22.7%、38.1%、36.9%、58.9%。其中以C1的變異系數最大，C2的變異系數最小。結合有效活菌數含量的變化，硅藻頁巖與各菌劑混配最適為，C2>C4>C3>C5>C1。

3 結論

微生物菌劑對全世界農業(yè)做出了重要的貢獻，截至目前，針對農用微生物菌劑與農藥相互作用等方面研究較多，指導實際生產的研究相對甚少。本試驗探索了硅藻頁巖與常用微生物菌劑混配的初步階段，通過本試驗可知，硅藻頁巖與膠凍樣類芽孢桿菌混配最為適宜，在實際的生產使用過程中，菌劑添加量達到相關標準要求即可。