吳元鳳 江洋
摘要:研究硅藻頁(yè)巖與微生物菌劑主要功能菌(枯草芽孢桿菌、膠凍樣類芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、米曲霉)混配保存問(wèn)題。試驗(yàn)采用梯度稀釋法和平板涂布法進(jìn)行檢測(cè),當(dāng)微生物菌劑的添加濃度為2億/克、6億/克、10億/克時(shí),其有效菌數(shù)變化趨勢(shì)基本一致,且與膠凍樣類芽孢桿菌混配最為合適。
關(guān)鍵詞:微生物菌劑;硅藻頁(yè)巖;混配保存
微生物菌劑的本質(zhì)特征在于含有已知的、具有特定功能的微生物,并通過(guò)微生物的活動(dòng)產(chǎn)生相應(yīng)的肥效。已有研究表明,其在改良土壤、提高作物品質(zhì)和數(shù)量等方面具有不可估量的前景。其中枯草芽孢桿菌、膠凍樣類芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、解淀粉、米曲霉等菌株在實(shí)際生產(chǎn)中應(yīng)用領(lǐng)域最為廣泛。農(nóng)用微生物菌劑作為微生物肥料生產(chǎn)中的一類重要資源,其參與土壤的調(diào)控作用,有效抑制病蟲(chóng)害的侵染,可達(dá)到增產(chǎn)提質(zhì)的效果。
硅藻頁(yè)巖是具有會(huì)呼吸機(jī)能的稀有原生態(tài)海洋古生物活化石,被世界地質(zhì)學(xué)家譽(yù)為“地球的肺泡”,地球70%的氧氣是從海洋硅藻中誕生的,它支撐著地球上有生命物種的呼吸所需的氧氣。硅藻頁(yè)巖是在礦化腐殖質(zhì)的基礎(chǔ)上,經(jīng)過(guò)低溫超微細(xì)研,形成的一種表面活性強(qiáng)、元素含量豐富、對(duì)環(huán)境友好的一種有益物質(zhì)。因此,硅藻頁(yè)巖對(duì)微生物的影響不可小覷。
1.1 供試材料
供試菌劑:微生物肥料技術(shù)研究推廣中心保存的菌劑(枯草芽孢桿菌、膠凍樣類芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、米曲霉)。吸附劑:硅藻頁(yè)巖為購(gòu)買產(chǎn)品。試劑:葡萄糖、磷酸氫二鉀、磷酸氫二鈉、硫酸鎂、氯化鐵、瓊脂、氯化鈉、牛肉膏、蛋白胨等試劑,均為國(guó)產(chǎn)分析純和生化試劑。所用檢測(cè)培養(yǎng)基:依據(jù)微生物肥料產(chǎn)品檢驗(yàn)規(guī)程N(yùn)Y/T2321-2013執(zhí)行。
1.2 試驗(yàn)方法
依據(jù)農(nóng)用微生物菌劑標(biāo)準(zhǔn)(GB20287-2006),關(guān)于對(duì)產(chǎn)品的技術(shù)指標(biāo)要求,粉劑產(chǎn)品有效活菌數(shù)要≥2.0億/克,因?yàn)樵谶M(jìn)行相關(guān)產(chǎn)品的混配試驗(yàn)時(shí),其有效活菌數(shù)不低于此標(biāo)準(zhǔn)。
樣品混合前,依據(jù)檢測(cè)結(jié)果可知,上述5種菌劑含菌量分別為1000億/克、100億/克、1000億/克、1000億/克、50億/克。將菌劑與硅藻頁(yè)巖混合配置100克樣品,設(shè)置含菌量濃度分別為2.0億/克、6.0億/克、10.0億/克。
1.3 加樣及培養(yǎng)
在無(wú)菌操作臺(tái)上用移液器分別吸取適宜的稀釋梯度的菌懸液0.1毫升,添加到事先備好的含有檢測(cè)培養(yǎng)基的平板上,并涂布均勻。每個(gè)處理重復(fù)3次,而后將相關(guān)平皿置于32℃恒溫培養(yǎng)箱中,24~48小時(shí)后,直到不再長(zhǎng)出新菌落為止,計(jì)數(shù)時(shí)取3次重復(fù)的平均數(shù)。
1.4 數(shù)據(jù)分析
試驗(yàn)設(shè)置5個(gè)菌劑水平(C1、C2、C3、C4、C5),每個(gè)水平3個(gè)處理(菌粉添加量為2億/克、6億/克、10億/克)。每次處理的首次檢測(cè)結(jié)果標(biāo)記為0(即為空白對(duì)照),依據(jù)混合樣品的保存時(shí)長(zhǎng),設(shè)置樣品檢測(cè)時(shí)間,依據(jù)檢測(cè)的次數(shù),分別記為1、2、3、4。樣品進(jìn)行檢測(cè)時(shí),利用平板梯度稀釋法,每個(gè)平板3次重復(fù)取平均值。5個(gè)菌株共計(jì)225個(gè)數(shù)值,在上述條件下,進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。
2.1 各菌劑間受不同菌劑添加比例的影響
通過(guò)各菌劑的不同添加比例數(shù)據(jù)值的統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn),2億/克、6億/克、10億/克時(shí),5種菌劑隨著時(shí)間的推移,其有效活菌數(shù)的變化趨勢(shì)基本一致。在首次混養(yǎng)后,其樣品的有效菌數(shù)都保障了添加比例的準(zhǔn)確性,伴隨時(shí)間推移,其有效菌數(shù)有不同程度的改變。C1的主要成分為枯草芽孢桿菌,混合一周后,樣品中的有效活菌數(shù)急劇的銳減,一個(gè)月后,其有效活菌數(shù)有一定的提升,這與硅藻頁(yè)巖為枯草芽孢桿菌的生長(zhǎng)、發(fā)育、代謝等提供了一定的條件有關(guān)。后期基本穩(wěn)定,但其含菌量減少明顯。其原因在于枯草芽孢桿菌本身隨著時(shí)間的推移有降解的可能性。
2.2 各菌劑間受不同時(shí)期同種菌劑添加比例的影響
同種添加比例混合樣品時(shí),以含菌量10億/克為例。C2在保存一個(gè)月后檢樣時(shí)含菌量增加,而后逐步減少。10個(gè)月后,其有效含菌量仍能保持在相對(duì)穩(wěn)定的范圍之內(nèi)。其余各處理在1次檢樣時(shí),樣品的含菌量急劇減少,以C1變化最為顯著。通過(guò)對(duì)各個(gè)水平進(jìn)行變異系數(shù)的計(jì)算,分別為,79.1%、22.7%、38.1%、36.9%、58.9%。其中以C1的變異系數(shù)最大,C2的變異系數(shù)最小。結(jié)合有效活菌數(shù)含量的變化,硅藻頁(yè)巖與各菌劑混配最適為,C2>C4>C3>C5>C1。
微生物菌劑對(duì)全世界農(nóng)業(yè)做出了重要的貢獻(xiàn),截至目前,針對(duì)農(nóng)用微生物菌劑與農(nóng)藥相互作用等方面研究較多,指導(dǎo)實(shí)際生產(chǎn)的研究相對(duì)甚少。本試驗(yàn)探索了硅藻頁(yè)巖與常用微生物菌劑混配的初步階段,通過(guò)本試驗(yàn)可知,硅藻頁(yè)巖與膠凍樣類芽孢桿菌混配最為適宜,在實(shí)際的生產(chǎn)使用過(guò)程中,菌劑添加量達(dá)到相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)要求即可。