陳英

摘 要：運用超高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS）同時測定辣椒面、火鍋料、辣條、鴨蛋、鴨血中的蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ。通過優(yōu)化萃取試劑、樣品基質(zhì)效應(yīng)的消除、色譜及質(zhì)譜條件等參數(shù)，檢測方法的靈敏度和適用性。在電噴霧離子源正離子模式下，多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）方式檢測，外標(biāo)法定量。蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)（r2）均大于0.999，蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ在3個添加水平下，回收率范圍為85.1%～104.9%，標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）均小于6.2%，檢出限和定量限為1.0～6.0?g/kg。本方法處理過程簡單、分析時間短、準(zhǔn)確度高，適用于辣椒面、火鍋料、辣條、鴨蛋和鴨血中的蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ檢測，可用于食品中非法添加蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的篩查。

關(guān)鍵詞：超高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜法;蘇丹紅;非法添加

蘇丹紅共有4個組分，為蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ，是一種紅色顆?；蚍勰畹募t色染料常用于工業(yè)上色如鞋、地板等的增光，因為有致癌作用危害人體健康，我國和歐盟都禁止其用于食品生產(chǎn)[1]。市面上有一些不法分子為了產(chǎn)品成色漂亮好出售，依然違法添加工業(yè)染料。

目前，蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ檢測方法主要有薄層色譜法[2]、紫外可見分光光度法[3]、近紅外顯微成像光譜法[4]、液相色譜法[5-6]、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[7-8]和化學(xué)發(fā)光分析法[9]，這些方法前處理復(fù)雜、試劑用量大、檢測周期長、準(zhǔn)確度不高，不適應(yīng)實際工作中遇到的多種復(fù)雜基質(zhì)中蘇丹紅的篩查測定。本試驗通過對色譜條件和質(zhì)譜參數(shù)的研究、優(yōu)化，建立了高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜同時分析蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的方法。本方法前處理簡單，7 min即可同時測出蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的含量，方法快速簡單，結(jié)果準(zhǔn)確，可以用于食品中非法添加蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的篩查。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀：Qtrap 5500三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀（美國AB SCIEX公司）;配有電噴霧離子源（ESI）;LC20A超高效液相色譜儀（日本Shimadzu公司）;MS1003S電子天平（瑞士Mettler Toledo公司）;Milli-Q超純水儀（美國Millipore公司）;MFV-24智能氮吹儀（廣州德泰儀器科技有限公司）。

1.2 藥品及試劑

實驗用蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)品，純度均大于95%，購自Dr.Ehrenstorfer GmbH;甲醇、乙腈（色譜純，美國Mreda公司）;甲酸（色譜純，美國Fisher Scientific公司）;水為超純水。

樣品辣椒面、火鍋料、辣條、鴨蛋、鴨血均為市售。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

分別各精密量取適量標(biāo)準(zhǔn)溶液，加乙腈制成每1 mL中各約含1.0 mg的溶液，為標(biāo)準(zhǔn)儲備液密封，于4 ℃保存。分別量取上述蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)儲備液適量，用甲醇稀釋成約0.5 mg/mL的混合對照品儲備液。精密量取混合對照品儲備液適量，加空白樣品基質(zhì)提取液配制系列混合基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.4 樣品處理方法

提取。取待測試樣適量混勻，研細(xì)，稱取粉末5.0 g（準(zhǔn)確至0.001 g），置50 mLpvc離心管中，加15 mL乙腈超聲提?。üβ?00 W，頻率50 kHz）30 min，以6000 r/min離心5 min，取上清有機液，殘渣加15 mL乙腈復(fù)提一次，合并兩次有機液于雞心瓶，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干，備用。

凈化。將上述提取的樣品用1 mL的乙腈溶解，混勻，轉(zhuǎn)移到氧化鋁層析柱上，用正己烷洗脫，氮吹濃縮置近干，1 mL乙腈復(fù)溶，過0.22 μm濾膜，備用。

1.5 色譜條件和質(zhì)譜條件

色譜柱：Waters UPLC BEH柱（3.0 ?m，2.1mm×100 mm）;柱溫：35 ℃;進樣量：5 μL;流動相：A相為0.1%甲酸水溶液，B相為乙腈溶液，進行梯度洗脫，流速：0.6 mL/min。

電離源模式：電噴霧離子化;電離源極性：正離子模式;霧化氣：氮氣;掃描方式：正離子掃描;檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）;電噴霧電壓：4000 V;離子源溫度：150 ℃、碰撞電壓（CE）為20～30 V、去簇電壓（DP）30～40 V。具體待測物的準(zhǔn)確質(zhì)量數(shù)及碎片離子為：蘇丹紅Ⅰ249.1/156.1，249.1/232.2;蘇丹紅Ⅱ277.3/156.1，277.3/160.1;蘇丹紅Ⅲ253.2/156.1，253.2/197.0;蘇丹紅Ⅳ381.1/224.3，381.1/275.8。

2 結(jié)果和分析

2.1 質(zhì)譜方法的建立

將蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)品儲備液分別稀釋成濃度約為200 ?g/L，按照上述色譜和質(zhì)譜條件進樣檢測，在7 min內(nèi)蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ能得到很好分離，方法條件滿足辣椒面、火鍋料、辣條、鴨蛋、鴨血中的蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的測定。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢出限

在上述本實驗色譜和質(zhì)譜條件下，取1.3混合系列標(biāo)準(zhǔn)溶液0～500 μg/L，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以定量離子峰面積y對質(zhì)量濃度x（μg/L）做線性回歸，得到蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的線性方程和相關(guān)系數(shù)。蘇丹紅Ⅰ：y=1 271.7x+3 854.8，蘇丹紅Ⅱ：y=1 540.1x+4 678.5，蘇丹紅Ⅲ：y=1 383.2x+2 432.3，蘇丹紅Ⅳ：y=1 262.1x+2 743.3，r2均大于等于0.999。將混合系列溶液的最低濃度點溶液稀釋后進樣分析，測定信噪比，取信噪比約為3的溶液濃度作為定性檢測限，信噪比約為10的溶液濃度作為定量檢測限。檢出限和定量限為1.0～6.0 ?g/kg。

2.3 精密度和重復(fù)性試驗

按本實驗條件，在5種不同基質(zhì)樣品中進行3個添加水平（0.1 ?g/mL、0.2 ?g/mL、0.5 ?g/mL）的加標(biāo)回收實驗，每個添加水平平行實驗6次。蘇丹紅Ⅰ的平均回收率為89.3%、93.5%、91.9%;蘇丹紅Ⅱ的平均回收率為92.2%、91.4%、104.9%;蘇丹紅Ⅲ的平均回收率為87.9%、88.0%、90.5%;蘇丹紅Ⅳ的平均回收率為85.1%、86.9%、91.5%，平均相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為4.05%、3.2%、6.18%，表明該方法具有良好的精密度和準(zhǔn)確度。可滿足食品中蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的分析要求。

2.4 樣品測定

應(yīng)用建立的本方法，對市場銷售的50批次辣椒面、火鍋料、辣條、鴨蛋、鴨血樣品進行了篩查，所測樣品中均未檢出蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ。

3 結(jié)論

本研究建立的UPLC-MS/MS高分辨率質(zhì)譜檢測方法，可同時測定食品中非法添加蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ，樣品沒有復(fù)雜的處理過程，操作簡便，可在7 min內(nèi)完成整個分析，提高了檢驗效率。采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的MRM模式進行定性和定量檢測，靈敏度、準(zhǔn)確度高，適用于食品中非法添加蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的檢測。

參考文獻

[1]牛家華，盧明華，王勇.食品中7種常見的非食用色素檢測研究進展[J].化學(xué)通報，2020，83（9）：805-812.

[2]佟蕊，齊穎，扈曉鵬，等.薄層色譜與表面增強拉曼光譜聯(lián)用快速檢測辣椒油高脂肪基質(zhì)中的蘇丹紅[J].中國食品學(xué)報，2019，19（6）：223-229.

[3]李錦城.紫外可見分光光度法檢測蛋黃中微量蘇丹紅Ⅳ[J].食品安全導(dǎo)刊，2019（3）：60-61.

[4]石冬冬，康雪，李慶波，等.近紅外顯微成像光譜法快速定性鑒別蛋鴨飼料中的蘇丹紅[J].飼料研究，2017 （21）：36-41.

[5]孫雪娜.高效液相色譜法測定食品中蘇丹紅的研究[J].中國食品，2021（9）：68.

[6]聞威，張文芬，張巖皓，等.多孔芳香骨架吸附劑-固相萃取-高效液相色譜法同時測定辣椒粉中4種偶氮類染料[J].色譜，2019，37（5）：491-498.

[7]彭飛進，楊云華，李艷梅，等.凝膠色譜-HPLC及LC/MS/MS法測定食品中蘇丹紅染料[J].中國調(diào)味品，2020，45（12）：145-148.

[8]范賽，張楠，劉平，等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測熟肉制品中10種工業(yè)染料殘留[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報，2020，11（13）：4177-4184.

[9]虞葉道，趙舒景.食品中蘇丹紅的電化學(xué)測定研究[J].廣東化工，2018，45（18）：74-75.