李瑞萍，劉長國，張 碩 ，董麗艷，王秋霞，徐時(shí)湘，李國勤，田 勇，柴一秋，劉素貞*，盧立志*

(1.浙江農(nóng)林大學(xué) 動(dòng)物科技學(xué)院，浙江 杭州 311300；2.浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 畜牧獸醫(yī)研究所，浙江 杭州 310021；3.溫州科技職業(yè)學(xué)院 動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，浙江 溫州 325000；4.浙江省亞熱帶作物研究所 溫州市蟲生真菌資源研究與開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江 溫州 325005)

從國家實(shí)施減抗政策以來，養(yǎng)雞業(yè)從提高生物安全、研究新型飼料添加劑替抗等方面來改善養(yǎng)雞業(yè)的養(yǎng)殖現(xiàn)狀。日前，養(yǎng)殖場采用的替抗產(chǎn)品有微生態(tài)制劑、中草藥、植物提取物等。其中，中草藥中的蟬花備受專家學(xué)者關(guān)注，其粗多糖含量占比達(dá)到2.27%～3.58%[1]，含有的多糖成分在有效成分中占比達(dá)到21.73%[2]。近年來，將蟬花多糖應(yīng)用于小鼠[3]、大鼠[4]、果蠅[5]的研究均有報(bào)道，研究表明，蟬花多糖具有促進(jìn)機(jī)體免疫調(diào)節(jié)[6]和抗腫瘤[7]等作用。本課題組前期的研究結(jié)果表明，蟬花多糖在提高肉雞體質(zhì)量、降低料重比和雞新城疫抗體水平方面有積極作用[8-9]。但蟬花多糖對肉雞脂質(zhì)代謝和免疫相關(guān)生化指標(biāo)的報(bào)道不盡全面。因此，本試驗(yàn)以雁蕩麻雞為研究對象，探討飼糧中添加蟬花多糖對雞脂質(zhì)代謝和免疫功能的影響，為提高雞健康水平和改善肉品質(zhì)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料試驗(yàn)所用蟬花多糖由浙江省亞熱帶作物研究所提供，實(shí)驗(yàn)室自主栽培蟬花蟲草子實(shí)體，通過實(shí)驗(yàn)室工藝手段干燥即得蟬花蟲草粗多糖粉末，再經(jīng)過大孔樹脂法和去蛋白法(Sevag 法)分離得到蟬花多糖[10]。桿菌肽鋅(批號：P181013)，由綠康生化有限公司提供。雞新城疫活疫苗La Sota株由博美萊生物制品有限公司提供。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與試驗(yàn)設(shè)計(jì)將購自浙江綠雁有限公司的1日齡雁蕩麻雞270隨機(jī)分為6組，公母各半，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)15只，以每個(gè)重復(fù)為單位單籠飼養(yǎng)。設(shè)置空白對照組(Ⅰ組)、免疫對照組(Ⅱ組)、抗生素對照組(Ⅲ組)和3個(gè)試驗(yàn)組(Ⅳ～Ⅵ組)，按照表1方案，根據(jù)每組雞的平均體質(zhì)量按照灌服劑量計(jì)算添加劑劑量，每天14:00對每只試驗(yàn)雞(1次/d)進(jìn)行灌服，灌服試驗(yàn)時(shí)間分別為11～17日齡和25～31日齡。

表1 雁蕩麻雞灌服添加劑成分及劑量

1.3 飼養(yǎng)管理與試驗(yàn)飼糧試驗(yàn)前對雞舍進(jìn)行消毒，2019年5月在溫州種子種苗科技園進(jìn)行試驗(yàn)，采用雙層籠養(yǎng)。日常飼養(yǎng)采用常規(guī)消毒、自由飲食、自然光照和通風(fēng)。雁蕩麻雞飼喂無抗飼料(不含藥物成分)，飼糧成分見表2。Ⅱ～Ⅵ組在14，28日齡進(jìn)行新城疫點(diǎn)眼免疫(除Ⅰ組外)，空白對照組(Ⅰ組)用等量生理鹽水點(diǎn)眼。試驗(yàn)從1日齡起至42日齡結(jié)束。

表2 無抗基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平 %

1.4 測定指標(biāo)及方法

1.4.1血液生化和免疫指標(biāo) 試驗(yàn)?zāi)┢?，每組隨機(jī)抽取18只試驗(yàn)雞(每個(gè)重復(fù)6只)，靜脈采血，3 000 r/min 離心15 min后，分離血清并放置-20℃保存。血清脂質(zhì)代謝指標(biāo)，包括總蛋白(TP)、總膽固醇(TC)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、甘油三酯(TG)、肌酐(CREA)，采用北京華英生物技術(shù)研究所的比色試劑盒和邁瑞B(yǎng)S-420全自動(dòng)生化儀檢測；血清免疫指標(biāo)，包括免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、補(bǔ)體C3(C3)、補(bǔ)體C4(C4)含量，采用北京華英生物技術(shù)研究所的比色試劑盒，全自動(dòng)生化儀(邁瑞B(yǎng)S-420)測定；干擾素-γ(IFN-γ)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素-2(IL-2)、白介素-4(IL-4)含量采用北京華英生物技術(shù)研究所的酶免試劑盒，酶標(biāo)分析儀(華為德朗DR-200BS)測定。

1.4.2免疫器官指數(shù) 試驗(yàn)雞于42日齡屠宰，無菌采取脾臟、法氏囊等免疫器官，測質(zhì)量并記錄。免疫器官指數(shù) = 器官質(zhì)量/試驗(yàn)雞活體空腹體質(zhì)量。

2 結(jié)果

2.1 蟬花多糖對雁蕩麻雞血清脂質(zhì)代謝相關(guān)指標(biāo)的影響由表3可知，Ⅳ～Ⅵ組血清中TC含量低于Ⅰ～Ⅲ組，且顯著低于Ⅲ組(P<0.05)，Ⅳ組TC含量顯著低于Ⅰ～Ⅲ組(P<0.05)，同時(shí)，Ⅰ、Ⅱ組TC含量顯著低于Ⅲ組(P<0.05)；Ⅴ、Ⅵ組血清中TP含量高于Ⅰ～Ⅲ組，其中Ⅴ組TP含量顯著高于Ⅰ～Ⅲ組(P<0.05)，Ⅵ組TP含量顯著高于Ⅰ、Ⅱ組(P<0.05)；Ⅴ、Ⅵ組血清中GLB含量高于Ⅰ～Ⅲ組，其中Ⅴ組GLB含量顯著高于Ⅰ、Ⅱ組(P<0.05)，Ⅵ組GLB含量顯著高于Ⅰ組(P<0.05)，Ⅲ組TP、GLB含量高于Ⅰ、Ⅱ組，但差異不顯著(P>0.05)；Ⅳ～Ⅵ組血清中ALB含量高于Ⅰ～Ⅲ組，CREA含量低于Ⅰ～Ⅲ組，但差異不顯著(P>0.05)；Ⅳ～Ⅵ組血清中TG含量低于Ⅰ～Ⅲ組，其中Ⅳ組TG含量顯著低于Ⅰ組(P<0.05)，Ⅲ組TG含量低于Ⅰ、Ⅱ組，但差異不顯著(P>0.05)。

2.2 蟬花多糖對雁蕩麻雞免疫器官指數(shù)的影響由表4可知，42日齡，蟬花多糖未對試驗(yàn)雞的脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)產(chǎn)生顯著性影響(P>0.05)，但從數(shù)值上發(fā)現(xiàn)，Ⅴ組脾臟指數(shù)高于Ⅲ組，Ⅳ～Ⅵ組法氏囊指數(shù)高于Ⅰ～Ⅲ組。

2.3 蟬花多糖對雁蕩麻雞免疫相關(guān)生化指標(biāo)的影響由表5可知，Ⅳ～Ⅵ組IgA含量高于Ⅰ～Ⅲ組，Ⅴ組在各組中IgA含量最高，較Ⅰ～Ⅲ組分別高出12.0%，12.0%，7.4%，且與Ⅰ、Ⅱ組存在顯著性差異(P<0.05))；Ⅳ～Ⅵ組IgG含量高于Ⅰ～Ⅲ組(P>0.05)；Ⅳ組、Ⅵ組C3含量顯著高于Ⅰ組(P<0.05)，Ⅴ組C3含量顯著高于Ⅰ～Ⅲ組(P<0.05)，Ⅱ、Ⅲ組C3含量顯著高于Ⅰ組(P<0.05)；Ⅳ組C4含量顯著高于Ⅰ、Ⅲ組(P<0.05)。

表3 蟬花多糖對雁蕩麻雞血清脂質(zhì)代謝相關(guān)指標(biāo)的影響

表4 蟬花多糖對42日齡雁蕩麻雞免疫器官指數(shù)的影響 mg/g

Ⅳ、Ⅴ組IFN-γ含量顯著高于Ⅱ組(P<0.05)，Ⅳ～Ⅵ組IFN-γ含量顯著高于Ⅲ組(P<0.05)，同時(shí)Ⅰ組IFN-γ含量顯著高于Ⅲ組(P<0.05)；Ⅳ組TNF-α含量顯著高于Ⅰ～Ⅲ組(P<0.05)，Ⅴ組TNF-α含量顯著高于Ⅱ、Ⅲ組(P<0.05)，Ⅵ組TNF-α含量顯著高于Ⅲ組(P<0.05)，同時(shí)Ⅰ組TNF-α含量顯著高于Ⅱ、Ⅲ組(P<0.05)；Ⅳ～Ⅵ組IL-2含量顯著高于Ⅰ～Ⅲ組(P<0.05)，Ⅰ、Ⅱ組IL-2含量顯著高于Ⅲ組(P<0.05)；Ⅴ、Ⅵ組IL-4含量高于Ⅰ、Ⅱ組，且與Ⅱ組存在顯著性差異(P<0.05)，Ⅲ組IL-4含量顯著高于Ⅰ、Ⅱ組(P<0.05)。

表5 蟬花多糖對42日齡雁蕩麻雞免疫相關(guān)生化指標(biāo)的影響

3 討論

3.1 蟬花多糖對雁蕩麻雞血清脂質(zhì)代謝的影響機(jī)體血清中TC和TG的含量是反映機(jī)體內(nèi)脂類合成和代謝之間平衡的重要指標(biāo)[11]。TP包括ALB和GLB，ALB負(fù)責(zé)運(yùn)輸代謝物、調(diào)節(jié)被運(yùn)輸物質(zhì)以及維持血液膠體滲透壓的作用，GLB則能增強(qiáng)機(jī)體抵抗疾病能力，血清中TP含量的升高對機(jī)體免疫力和代謝能力有積極影響[12]。本試驗(yàn)中，灌喂蟬花多糖的試驗(yàn)雞TC、TG含量低于空白對照組、免疫對照組和抗生素對照組。LIU等[13]研究表明，機(jī)體內(nèi)TC[14]、TG水平越低對機(jī)體體內(nèi)脂質(zhì)代謝越有利。蟬花多糖作為飼料添加劑可能有利于肉雞的脂質(zhì)代謝。類似于黃芪多糖能促進(jìn)機(jī)體脂肪沉積，提高血清中TP的水平[15]。然而中藥多糖對機(jī)體脂質(zhì)合成和代謝能力發(fā)揮作用的機(jī)制還需要進(jìn)一步研究。綜合各組脂質(zhì)代謝數(shù)值，蟬花多糖中劑量組(50 mg/kg)血清中TP、GLB、ALB和CREA均有所增多，其脂質(zhì)代謝能力在各組中最佳。另有研究表明，山黃粉和黃芪多糖能促進(jìn)動(dòng)物體內(nèi)蛋白質(zhì)的消化吸收和代謝沉積能力[16]。這與本試驗(yàn)的結(jié)果類似，說明中草藥多糖對動(dòng)物的脂質(zhì)代謝水平能產(chǎn)生積極影響，從而間接提高動(dòng)物的生長性能和健康水平。

3.2 蟬花多糖對雁蕩麻雞免疫功能的影響

3.2.1蟬花多糖對雁蕩麻雞免疫器官指數(shù)的影響 禽類的免疫功能直接影響機(jī)體的生長性能，法氏囊、脾臟是禽類的主要免疫器官[17]，免疫器官指數(shù)可作為評判機(jī)體免疫功能的初步依據(jù)[18]。李思迪等[19]研究表明，蟬花復(fù)方能提高小鼠的胸腺及脾指數(shù)。羅靖璠[20]的研究表明，隨著灌喂小鼠的蟬花菌核和子實(shí)體劑量增大，脾指數(shù)也在增加。本試驗(yàn)中脾臟和法氏囊指數(shù)均未有顯著性差異，但添加蟬花多糖的試驗(yàn)雞脾臟指數(shù)高于抗生素對照組，法氏囊指數(shù)略高于空白對照組、免疫對照組和抗生素對照組，說明在雞的生長中添加蟬花多糖對免疫器官發(fā)育有一定的積極影響。有研究報(bào)道，多糖能正向促進(jìn)禽類免疫器官發(fā)育，但對其免疫器官指數(shù)沒有顯著提高[21]，這與本試驗(yàn)結(jié)果相似。

3.2.2蟬花多糖對雁蕩麻雞免疫相關(guān)生化指標(biāo)的影響 免疫球蛋白和補(bǔ)體在機(jī)體的體液免疫中起到重要作用，禽類血清中IgG作為機(jī)體抗感染的中堅(jiān)力量，在體內(nèi)維持時(shí)間長；而IgA通過聚集顆粒性抗原和中和病毒的能力從而抵抗微生物入侵機(jī)體的腸道、消化道等部位；補(bǔ)體則在機(jī)體內(nèi)活化后擴(kuò)大體液免疫反應(yīng)。研究表明，中草藥多糖起到增強(qiáng)機(jī)體體液免疫的作用[22-24]。方磊涵等[22]研究表明中草藥復(fù)方多糖能提高試驗(yàn)雞新城疫抗體效價(jià)及其血清中補(bǔ)體C3、C4水平。孫甜甜等[24]試驗(yàn)表明在肉仔雞生長中添加枸杞粗多糖能有效提高其血清中IgG含量。本試驗(yàn)中，飼喂蟬花多糖(50 mg/kg)的試驗(yàn)雞血清中IgA、C3水平高于空白對照組、免疫對照組、抗生素對照組。因此，在雞的生長中添加50 mg/kg 蟬花多糖能顯著提高血清中免疫球蛋白和補(bǔ)體含量，由此提高機(jī)體免疫力。說明真菌多糖中的活性物質(zhì)作為免疫調(diào)節(jié)劑對機(jī)體免疫起到了促進(jìn)作用[24]。

IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4在機(jī)體免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要功能，其含量能不同程度地反應(yīng)機(jī)體當(dāng)下免疫應(yīng)答水平。IFN-γ可以調(diào)節(jié)T細(xì)胞和B細(xì)胞的免疫功能，促進(jìn)巨噬細(xì)胞吞噬能力[25]。TNF-α具有眾多免疫活性，參與單核巨噬細(xì)胞的活化、產(chǎn)生其他細(xì)胞因子和自身分泌的調(diào)節(jié)[26]。IL-2、IL-4具有激活和提高免疫細(xì)胞等多種功能，發(fā)揮著各自特殊的作用[27-28]。本試驗(yàn)中，飼喂蟬花多糖的試驗(yàn)雞血清中IFN-γ、TNF-α、IL-2含量都有不同程度的提高，而飼喂抗生素的試驗(yàn)雞血清中IFN-γ、TNF-α、IL-2含量顯著低于飼喂蟬花多糖的試驗(yàn)雞。由此推測蟬花多糖能激活機(jī)體體內(nèi)巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞和B細(xì)胞釋放細(xì)胞因子發(fā)揮非特異性免疫作用,其中蟬花多糖中劑量組(50 mg/kg)對提高試驗(yàn)雞血清中IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4含量效果最佳，而在雞的生長中添加抗生素會(huì)抑制體內(nèi)巨噬細(xì)胞釋放細(xì)胞因子間接致使機(jī)體免疫力低下。此結(jié)果與宋佳敏等[29]的研究中金蟬花多糖可以提高小鼠血清中干擾素、免疫球蛋白和白介素含量的結(jié)論相似。日本蟲草子實(shí)體同樣通過刺激小鼠體內(nèi)的巨噬細(xì)胞釋放IL-2、TNF-α從而對機(jī)體發(fā)揮免疫干預(yù)[30]。張偉云等[31]報(bào)道通過腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞和小鼠碳廓清試驗(yàn)，蛹蟲草對機(jī)體內(nèi)巨噬細(xì)胞吞噬能力表現(xiàn)顯著提高。蘆薈多糖和植物乳桿菌在雞的生長中聯(lián)合使用能使雞血清中IFN-γ、IL-2、IL-4含量提高[32]。結(jié)合本試驗(yàn)蟬花多糖能提高雞的免疫能力且效果顯著，說明蟬花多糖可作為新的添加劑應(yīng)用在雞的養(yǎng)殖中來提高雞的脂質(zhì)代謝水平和免疫功能，這為開發(fā)綠色養(yǎng)殖模式提供了新的途徑。

在雞生長中添加蟬花多糖能提高雁蕩麻雞脂質(zhì)代謝水平，并提高雁蕩麻雞免疫相關(guān)生化指標(biāo)從而增強(qiáng)機(jī)體免疫應(yīng)答水平。本試驗(yàn)條件下，蟬花多糖中劑量組(50 mg/kg)效果最佳。