郭康康，張 誠，崔 歡，孟利佳，張 博，陳立功，3，張春茂，劉聚祥，3，郭振東*，董世山，3*

(1.河北農(nóng)業(yè)大學 動物醫(yī)學院，河北 保定 071000；2.軍事科學院 軍事醫(yī)學科學院 軍事獸醫(yī)研究所，吉林 長春 130122；3.農(nóng)業(yè)部動物疫病病原生物學華北科學觀測實驗站， 河北 保定 071000)

高致病性禽流感(highly pathogenic avian influenza，HPAI)具有發(fā)病急，傳播快，死亡率高等特點，因此被世界動物衛(wèi)生組織定為A類傳染病[1]。目前家禽中流行的禽流感(avian influenza，AI)主要有H5、H7和H9亞型，由于疫苗的使用，家禽中的AI疫情得到了較好的控制，但我國部分地區(qū)仍有AI疫情發(fā)生。1975年從美國綠頭鴨體內(nèi)首次分離到H5N6亞型AI病毒呈低致病性，2013年我國出現(xiàn)的禽源H5N6亞型AI表現(xiàn)為高致病性[2-3]。2013年以來，我國多地發(fā)生H5N6亞型AI疫情，對家禽養(yǎng)殖業(yè)造成巨大經(jīng)濟損失，2014年發(fā)生第1例人感染H5N6亞型AI案例，引起社會廣泛關注[4-5]。2020年初我國發(fā)生1起H5N1和6起H5N6亞型AI疫情(家禽2起，野生天鵝4起)[6]。因此，家禽中H5N6亞型AI的防控顯得尤為重要，做好H5N6亞型AI防控工作，不僅可以保證家禽養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展，也為公共衛(wèi)生安全提供有力保障。

1 病原學

禽流感病毒(avian influenza virus，AIV)屬正黏病毒科甲型流感病毒屬，為單股負鏈RNA病毒[7]。根據(jù)表面血凝素( HA) 和神經(jīng)氨酸酶( NA) 蛋白抗原性的差異，A型流感病毒可以分為18種不同的HA亞型和11種不同的NA亞型[8]。H5和H7亞型的部分毒株屬于HPAI，其余亞型AIV為低致病性[7]。通過基因比對和親緣關系分析，H5N6亞型的8個基因片段中，其HA、NA片段可能分別來自H5N1亞型的HA片段和H6N6亞型的NA片段，其余6個基因片段與H5N1亞型的親緣性最高，表明H5N6亞型AIV是由H5N1和H6N6亞型重組而來[9]。HA-NA功能的相互匹配對H5N6亞型AIV的入侵和增殖有重要作用，研究表明HA-NA匹配性好的毒株在雞群內(nèi)的傳播能力更強，因此對雞群的危害性更大[10]。

2 H5N6亞型AIV致病性分析

HA1亞單位結(jié)構(gòu)為HA的主要構(gòu)成，含有抗原決定簇和受體結(jié)合位點，人流感病毒主要識別并結(jié)合唾液酸 α-2,6 受體，而AIV主要識別并結(jié)合唾液酸 α-2,3 受體[10]。目前研究表明，隨著流感病毒的突變和進化，H5N6亞型AIV對人和動物的親和力逐漸增強[11]。周佩嬌等[13]對1株野禽H5N6亞型AIV進行鑒定和遺傳分析發(fā)現(xiàn)HA蛋白受體蛋白結(jié)合位點S137A、K193N突變，增加了對人唾液酸a-2,6受體結(jié)合能力，其HA的第222～224位存在保守氨基酸序列QRG，表明對禽類依舊有感染能力。HA等[16]發(fā)現(xiàn)流感病毒HA蛋白RBS區(qū)域第226，228位氨基酸分別為Q和G時，流感病毒易與禽細胞表面受體結(jié)合。

黃曉峰等[13-16]研究也發(fā)現(xiàn)H5N6亞型AIV的HA基因關鍵位點Q226L、G228S突變，PB2的E627K、Q591K、D701N突變以及NS的G540A獨突變等，都增強了H5N6亞型AIV對哺乳動物的致病性。對活禽市場中分離出的H5N6亞型AIV研究發(fā)現(xiàn)其致病性與HA 蛋白連接肽位點編碼堿性氨基酸數(shù)目的多少有關，毒株A/environment/Hunankaifu/303/2017 (H5N6) HA 蛋白連接肽位點堿性氨基酸數(shù)目為6個，則該毒株對禽表現(xiàn)為高致病性[15]。尤其是H5N6亞型AIV的PB2基因發(fā)生E627K、Q591K、D701N突變都增強了AIV對哺乳動物的致病性。

3 H5N6亞型AIV的傳播途徑

直接接觸傳播是H5N6亞型AIV傳播的重要途徑，活禽市場是H5N6亞型AIV的感染和傳播的重要場所，但目前尚無人與人之間傳播的確切證據(jù)[18]。從貓體內(nèi)分離并鑒別出H5N6亞型AIV，研究表明該病毒與家禽中的高致病性H5N6亞型AIV 2.3.4.4分支密切相關，同時可作為H5N6亞型AIV的宿主，說明病毒很有可能感染并適應貓等哺乳動物后再通過直接接觸傳播給人類[14-18]。從廣州分離出H5N6亞型AIV毒株A/wildfowl/Guangdong/GZ882/2015(H5N6)，其NA基因序列與2015年湖南省分離到的鴨源毒株A/duck/Hubei/XG18/2015(H5N6)相似性達99%，PB2基因序列與2014年越南分離到的鴨流感病毒株A/duck/Vietnam/LBM760/2014(H5N6)相似性達99%。由此推斷該病毒很有可能是野鳥遷徙傳播到我國南方各省份[11]。

4 我國H5N6亞型AI的流行特點

4.1 H5N6亞型AIV成為優(yōu)勢毒株2018—2020年2月我國公布H5亞型AI疫情共計17起，其中H5N6亞型AI疫情14起，H5N1亞型AI疫情僅3起，H5N6亞型AI疫情發(fā)生率達到82.35%[6]。因此，H5N6亞型AI疫情發(fā)生的概率已經(jīng)超過H5N1，但H5N1的防控也不能忽視。此外，2020年初發(fā)生野生天鵝感染H5N6亞型AIV，表明H5N6亞型AIV可能通過野鳥傳播給家禽，另外野鳥的遷徙可能導致H5N6亞型AIV在家禽中更廣泛的傳播[12]。

4.2 南方地區(qū)呈H5N6亞型AI疫情多發(fā)2018—2019年，H5N6亞型AI疫情主要發(fā)生在廣西、貴州、湖南、湖北、云南、江蘇6個省份，南方為疫情多發(fā)地區(qū)；2020年1月野生天鵝H5N6亞型AI疫情發(fā)生4起(表1)[6]。因此應當盡量避免野鳥與家禽接觸，防止野鳥攜帶的病毒在家禽中感染并傳播。

4.3 H5N6亞型AI春秋季多發(fā)2018—2020年2月期間，其中1-3月份有7起H5N6亞型AI疫情，9-11月份發(fā)生4起H5N6亞型AI疫情，5月份僅有1起疫情發(fā)生(表1)；因此，H5N6亞型AI疫情以春季和秋季為主。

4.4 H5N6亞型AI血清學監(jiān)測情況2018年1月至2019年8月，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部發(fā)布我國家禽的監(jiān)測情況，禽場、商品代飼養(yǎng)場、散養(yǎng)戶、交易市場以及其他場所共檢測家禽391.717 5萬份血清樣品，免疫合格樣品364.939 5萬份，合格率為93.16%；其中2018年1月到2019年8月監(jiān)測雞、鴨、鵝血清樣品分別為351.888 6萬份、32.995萬份、68 339份，免疫合格樣品分別為328.977 1萬份、29.907 4萬份、60 550份，合格率分別為93.49%，90.64%，88.60%(表2，3)[19]。因此，由統(tǒng)計出的數(shù)據(jù)得出家禽中雞的血清免疫合格率最高，鵝的免疫合格率最低，家禽整體免疫狀況良好。

表1 2018—2020年2月我國公布的H5N6疫情統(tǒng)計

表2 2018年H5N6亞型AI免疫合格率 %

2019年1—8月免疫合格率 %

4.5 clade 2.3.4.4分支是目前H5N6亞型AIV優(yōu)勢分支H5亞型AIV主要包括2.3.1,2.3.2,2.3.3,2.3.4共4個分支，其中2.3.4又主要包含2.3.4.1,2.3.4.2,2.3.4.3,2.3.4.4，2.3.4.5共5個小分支。目前我國近幾年監(jiān)測和分離到的H5亞型AIV(包括H5N6)主要為clade 2.3.4.4分支，但也有其他分支的H5病毒存在(如2.3.2分支的H5亞型AIV)，從中國香港和中國臺灣野鳥中分離到的H5N6亞型AIV也屬于clade 2.3.4.4[20-21]，因此，當前我國H5N6亞型AIV的優(yōu)勢分支是clade 2.3.4.4。

5 國外H5亞型AI疫情的發(fā)生情況

2019—2020年2月國外發(fā)生H5亞型AI疫情共計194起，其中H5N6亞型疫情共計發(fā)生24起(越南20起)，H5N8亞型疫情96起，H5N1和H5N2亞型疫情分別為30和32起，H5N7亞型疫情僅發(fā)生1起[6]。H5亞型AI疫情多發(fā)生于春冬季節(jié)，夏秋較少，與中國情況類似。

2019—2020年2月野禽發(fā)生H5亞型AI共計18起，其中H5N8亞型疫情11起，H5N1亞型疫情6起，H5亞型未確定NA的1起，其余176起疫情均為感染家禽[6]。2019—2020年2月活禽交易市場共計5起，3起為H5N6亞型，2起H5N8亞型，另有科威特寵物禽鳥商店發(fā)生1起H5N8疫情[6]。因此，H5亞型AI疫情主要發(fā)生地是家禽養(yǎng)殖場，活禽交易場所較少；家禽是H5亞型AIV易感宿主。2019—2020年2月越南累計發(fā)生20起H5N6亞型AI疫情，2018—2020年2月我國發(fā)生14起H5N6亞型AI疫情，有可能因為兩國之間野鳥遷徙，從而為H5N6亞型AIV的感染和傳播提供了機會[20]。

圖1 2019—2020年2月H5亞型AI疫情發(fā)生情況

注：H5.表示未確認NA亞型AI

6 防控要點

6.1 加強飼養(yǎng)和嚴格消毒強化飼養(yǎng)管理，飼料營養(yǎng)做到全面均衡，避免單一。飼養(yǎng)管理員按禽群飼養(yǎng)需求添加維生素和微量元素及中草藥制劑等，增強禽群的抵抗力，保持適當?shù)娘曫B(yǎng)密度，適宜的溫度和濕度。提倡封閉飼養(yǎng)，避免家禽與外界環(huán)境接觸并減少外界環(huán)境對家禽造成的應激[22]。

建立完善消毒制度。按消毒要求對禽場全面消毒。外來人員和車輛進出禽場應做到定點消毒、定點隔離、登記備案等，及時追根溯源。對禽使用的飼料和飲水定期進行病原菌檢測，嚴禁使用污染和霉變的飼料[22-23]。

6.2 保證疫苗質(zhì)量和免疫效果疫苗的購買首先要保證質(zhì)量和免疫效果，禁止養(yǎng)殖企業(yè)使用違法生產(chǎn)的疫苗。相關部門應隨時對疫苗生產(chǎn)企業(yè)抽查、監(jiān)督，杜絕生產(chǎn)和銷售假、劣疫苗。2019年1月20日，我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部(第99號)，組織制定了重組禽流感病毒(H5+H7)二價滅活苗和三價滅活苗等6種疫苗產(chǎn)品，地方政府要擴大宣傳，鼓勵基層干部下地方講解政策[24]。另外，對農(nóng)村獸醫(yī)、駐場獸醫(yī)、飼養(yǎng)員等相關人員定期培訓，教授理論，傳授實踐操作，保證所在轄區(qū)內(nèi)的免疫密度合格。實施2020年國家動物疫病強制免疫計劃，對所涉轄區(qū)內(nèi)的禽場登記在案，養(yǎng)殖戶對禽場用藥等情況要準確記錄[6]。

6.3 加強監(jiān)測和流行病學調(diào)查定期對禽場、野鳥、環(huán)境樣本進行H5亞型HPAIV監(jiān)測，保證H5N6亞型AI抗體滴度較低時要及時查清原因并整改[25]。動物疫病預防控制中心各級單位定期對所在地方所管轄區(qū)域進行流行病學調(diào)查，追蹤溯源，了解病毒變異情況，為防控提供支持。

7 小結(jié)與展望

H5N6亞型HPAI對家禽養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大經(jīng)濟損失的同時，對公共衛(wèi)生健康也構(gòu)成了巨大挑戰(zhàn)。當前我國同時流行H5N1和H5N6兩種亞型AIV，但以H5N6亞型為優(yōu)勢毒株。H5N6亞型AIV是重組病毒，但病毒的不斷突變和變異，使得H5N6亞型AIV致病力有增強趨勢；目前未發(fā)現(xiàn)人傳人的證據(jù)，亦需要保持警惕[7]。未來的防控關鍵應放在疫苗的應用，確保免疫效果。加大對H5N6亞型 AIV的監(jiān)測和流行病學調(diào)查，及時了解病毒變異情況，從而為AI疫苗的更新提供有力的參考基礎，確保AI疫情防患于未然。