蔡露露

摘要：通過膽總管結(jié)扎術(shù)（BDL）構(gòu)建小鼠膽管阻塞模型，觀察膽囊、膽管及肝臟等病理變化，并模擬臨床膽道阻塞病程變化。取體重26～28g健康雄性ICR小鼠48只，隨機均分為BDL手術(shù)組和假手術(shù)組，通過術(shù)中和術(shù)后2d、1w、2w、4w取材兩組模型觀察其生理狀態(tài)和肝臟、膽囊、膽管的外觀形態(tài)變化，并以HE染色來檢測肝臟的病理變化。ICR小鼠以實施結(jié)扎膽總管手術(shù)造成了梗阻性黃疸，其肝臟和膽囊的病理變化規(guī)律與人類相似，造模的時間短，是研究梗阻性黃疸病理生理機能和治療方案的可靠有效實驗?zāi)Ｐ汀?/p>

關(guān)鍵詞：膽道阻塞;黃疸;膽總管結(jié)扎;病程;病理變化

因為大鼠對黃疸帶來的危害相對不敏感，對黃疸的耐受能力時間長，有利于觀察肝硬化的變化過程，有利于了解各項指標(biāo)的變化情況，同時也相對比較經(jīng)濟且操作簡單方便[1]。為此，過去阻塞性黃疸（即梗阻性膽道）實驗動物模型通常采用大鼠，而大鼠在正常生理結(jié)構(gòu)上不具有膽囊，不符合正常生理結(jié)構(gòu)，且造模時間較長，因而現(xiàn)在通常改用小鼠造模，探究膽總管的充盈變化、膽囊和肝臟的病理變化，觀察各個指標(biāo)的變化，為臨床提供參考依據(jù)。

1? 關(guān)于材料、用具與方法

1.1? 材料

ICR小鼠，雄性，26～28g，清潔級，總共48只。適應(yīng)性飼養(yǎng)一周。

中性樹脂，75%酒精及各濃度酒精溶液，4%水合氯醛，阿托品，10%福爾馬林，二甲苯溶液，蘇木素，伊紅等。

1.2? 工具

電剪，常用手術(shù)器械，小鼠手術(shù)臺，手術(shù)縫合針，手術(shù)縫合線，載玻片，打火機。

1.3? 儀器

手術(shù)顯微鏡，體視顯微鏡，脫水機，包埋機，烘片機，輪轉(zhuǎn)切片機。

1.4? 方法

（1）模型建立

用于實驗的小鼠，術(shù)前先禁食6h，然后在其腹腔注射4%水合氯醛（0.1ml/g）予以麻醉。在麻醉生效之后對小鼠進行保定，術(shù)部用電剪剃毛并消毒。在小鼠腹部中央打開腹腔，用生理鹽水蘸濕的棉簽小心地分開十二指腸和肝葉，將膽總管予以游離之后進行縫合結(jié)扎;假手術(shù)組對膽總管安排游離但不結(jié)扎。術(shù)后以白熾燈提升其體表溫度，盡快恢復(fù)正常體溫，直到小鼠活動自如。2h之后可飲水，6h之后可讓其自主進食。

（2）生理形態(tài)學(xué)觀察

先觀察其精神、食欲、術(shù)部的皮膚情況和皮毛光澤等;等手術(shù)開腹后，觀察肝臟的形狀大小、形態(tài)結(jié)構(gòu)、肝部色澤等。

（3）取材及石蠟標(biāo)本制作

開腹后，小心取下整個肝組織，在冰上用0.9%氯化鈉溶液沖洗干凈，再用棉簽小心地分離各肝葉，小心完整地取下最大的肝葉組織放入福爾馬林中予以固定。2d后，通過脫水機對固定好的肝組織進行脫水蠟化，然后制作成石蠟組織標(biāo)本儲存。

（4）HE染色觀察圖示

石蠟組織標(biāo)本切片，厚度0.4μm，于40℃溫水里展開，并附著在載玻片上，接著放于60℃烤片1h，使切片完全地附著在載玻片上。染色前，將烤好的切片浸泡于二甲苯溶液中脫蠟，再分別浸泡于由高濃度到低濃度的各種酒精，最后入蒸餾水。然后進行切片的HE染色、無水酒精脫水、二甲苯透明，最后再封片。在顯微鏡下觀察切片的組織結(jié)構(gòu)并拍照，記錄實驗結(jié)果。如下圖：

切片 → 展開 → 烤片 → 脫蠟水化 → 染色 → 脫水 → 透明 → 封片

2? 觀察實驗結(jié)果

2.1? 術(shù)中術(shù)后反應(yīng)

手術(shù)過程BDL手術(shù)組和假手術(shù)組均未出現(xiàn)死亡情況。進行BDL手術(shù)組的小鼠，其尿液在術(shù)后1d開始變黃，2d耳朵、肛門位和尾巴漸變黃且食欲下降;1w耳朵、肛門位和尾巴全部變黃，腹部皮膚也變黃且眼睛出現(xiàn)大量眼屎，精神不佳，食欲較2d時進一步下降且體重減輕;2w全身黃染，精神萎靡，生理活動弱，體重進一步下降;4w持續(xù)黃染，精神和食欲不佳，毛發(fā)枯燥散亂無光澤。假手術(shù)組，其皮毛發(fā)亮，食欲良好，精神佳，無嗜睡等不良現(xiàn)象。

2.2? 肝臟標(biāo)本的外觀

術(shù)后2d，BDL手術(shù)組近端膽總管囊性擴張腫脹，膽囊變大，肝臟腫大色暗;1w見膽囊嚴(yán)重腫脹，結(jié)扎處膽管腫脹如黃豆大，肝臟深紅色出現(xiàn)白色針尖狀壞死點;2w膽囊較一周前無變化，膽管腫脹如彈珠大，肝臟變黑，白色壞死點增多變大;4w見膽囊液體較稠，膽管腫脹縮小，肝臟硬化成黃白色，邊緣鈍圓。假手術(shù)組術(shù)后小鼠腹腔內(nèi)肝臟等各器官均正常。

2.3? 膽道阻塞后肝組織的病理變化

借助術(shù)后小鼠肝組織切片的HE染色來觀察肝組織病理變化。BDL手術(shù)組：術(shù)后2d，觀察發(fā)現(xiàn)小鼠肝組織HE染色，其大部分肝細胞依然正常，少數(shù)腫大，排列有所紊亂，出現(xiàn)少數(shù)壞死灶及少數(shù)炎性細胞;術(shù)后1w，肝小葉結(jié)構(gòu)模糊，細胞紊亂，出現(xiàn)損傷，肝細胞初現(xiàn)壞死灶，壞死面積逐漸增大，同時帶有大量炎性細胞出現(xiàn)，如染紅色嗜酸性粒細胞;術(shù)后2w，肝細胞損傷加重，無法分辨肝小葉結(jié)構(gòu)，肝細胞壞死增多，壞死灶面積繼續(xù)增大，壞死點增多;術(shù)后4w，肝細胞大部分壞死，結(jié)構(gòu)紊亂，壞死灶大量增加。假手術(shù)組：術(shù)后其肝組織HE染色，未出現(xiàn)任何變化，其肝小葉形態(tài)也顯示正常，肝細胞完整無損。

3? 結(jié)論與小結(jié)

小鼠膽總管結(jié)扎后，小鼠膽道阻塞后的病程及病理變化見下圖：

參考文獻

[1] 岳劼.實驗鼠膽道結(jié)扎后血清膽紅素變化的全程觀察[D].山西醫(yī)科大學(xué)，2009.